孟建宇，才航，劉佳杰

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院應(yīng)用與環(huán)境微生物實驗所，內(nèi)蒙古呼和浩特010018）

蒙古口蘑菌絲體最適生長條件初探

孟建宇，才航，劉佳杰

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院應(yīng)用與環(huán)境微生物實驗所，內(nèi)蒙古呼和浩特010018）

對蒙古口蘑菌絲體不同條件的培養(yǎng)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，蒙古口蘑菌絲體在室溫暗光培養(yǎng)，pH6.0～7.0時生長最好，最適pH值為pH6.0。

蒙古口蘑；菌絲體；生長條件

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）俗稱口蘑、白蘑，屬于傘菌目白蘑科，是我國北方草原出產(chǎn)的名貴野生食藥兼用菌，菇類上品[1-2]。然而由于草原退化及人為過度采集等原因，其生境受到破壞，產(chǎn)量不斷下降。蒙古口蘑的人工馴化栽培雖已成功[3]，但至今尚未獲得實質(zhì)性的突破，因此，保護(hù)和研究開發(fā)這一珍貴資源無疑具有重要的學(xué)術(shù)價值和廣闊的應(yīng)用前景[4]。蒙古口蘑菌絲體是產(chǎn)生活性物質(zhì)的基礎(chǔ)，有促進(jìn)多種植物生長的效應(yīng)[5-7]，含有較豐富的多糖活性物質(zhì)[8]，從蒙古口蘑菌絲體中分離到的凝集素TML-1和TML-2具有抗腫瘤、抗病毒和降血壓等多方面的生物活性和生理功能[9-11]。如能把蒙古口蘑加以系統(tǒng)開發(fā)，以更容易液體培養(yǎng)的菌絲體代替資源匱乏的野生子實體，用來研制各種營養(yǎng)保健食品[12]及藥膳，將具有極高的經(jīng)濟效益和社會效益。本文對蒙古口蘑菌絲體的培養(yǎng)條件做了初步研究，旨在為更好地開發(fā)蒙古口蘑提供一些基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

蒙古口蘑（Tr-12）分離自錫林浩特市。

1.2 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基[13]：馬鈴薯200 g切塊，煮沸30min后用紗布過濾，加入蔗糖20 g、瓊脂20 g（固體培養(yǎng)基用），定容至1 000mL，pH 6～7。

1.3 菌絲體的培養(yǎng)

將蒙古口蘑Tr-12菌種接種到PDA固體培養(yǎng)基上，20℃[14]恒溫培養(yǎng)7 d。等到其產(chǎn)生大量的孢子后先用無菌水洗下孢子，之后將孢子懸浮液接種于PDA液體培養(yǎng)基中（裝液量為100mL/250mL，接種量2%）。按照以下條件培養(yǎng)：條件Ⅰ：室溫下光照10 h/d，光照強度2 000 lx，條件Ⅱ：自然光照培養(yǎng)，（條件Ⅲ：室溫暗光培養(yǎng)，條件Ⅳ：室溫自然光照培養(yǎng)9 d后置4℃冰箱暗光培養(yǎng)。

1.4 pH對菌絲體生長的影響

調(diào)整PDA固體培養(yǎng)基的pH值分別為5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0。分別接種蒙古口蘑Tr-12于不同pH值的PDA固體培養(yǎng)基上，隔時測定不同pH條件下生長的菌落的直徑，計算菌絲體的生長倍數(shù)。

1.5 菌絲生長量和總糖含量的測定

將不同pH條件下培養(yǎng)的蒙古口蘑菌絲體樣品過濾，在烘箱內(nèi)80℃干燥4 h后測定菌絲體干重。測定培養(yǎng)基濾液的pH值，并用DNS法[8]測定濾液的含糖量。

2 結(jié)果

2.1 不同pH對蒙古口蘑菌絲體生長的影響

通過測定不同固體培養(yǎng)基培養(yǎng)階段的菌絲體生長倍數(shù)，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH6～7時，蒙古口蘑菌絲體生長的最好，見圖1。

圖1 不同pH值下菌絲體生長量的變化Fig.1 Effects of pH on the grow th of mycelium

從圖1上可看出，當(dāng)pH6～7時菌絲體生長量的變化明顯優(yōu)于pH7～8。在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)60天后，測定菌絲體的生長量，結(jié)果見圖2。

圖2 不同pH值對菌絲體生長量的影響Fig.2 Effects of pH on the growth of mycelium

圖2顯示在pH6～7時菌絲體生長最快。

2.2 液體培養(yǎng)前后pH的變化

用不同pH的培養(yǎng)基培養(yǎng)蒙古口蘑菌絲體，培養(yǎng)前后的pH變化見表1。

當(dāng)初始pH為4～6.3時，培養(yǎng)后pH有所升高，當(dāng)初始pH為6.9～8.0時，培養(yǎng)后pH有所降低，可見蒙古口蘑菌絲細(xì)胞對外界pH的反應(yīng)在一定范圍內(nèi)有調(diào)節(jié)作用，使其向著適宜生存的pH變化。

表1 不同pH值的培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng)前后pH值的變化Table1 The change of pH after cultivation by media of different pH

2.3 不同培養(yǎng)條件對菌絲體生長量的影響

在pH6的PDA液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)蒙古口蘑菌絲體，觀察不同的培養(yǎng)條件對菌絲生長的影響。結(jié)果表明：在室溫暗光培養(yǎng)（條件Ⅲ）時菌絲長勢最好。對各條件作方差分析時差異顯著，F(xiàn)=10.9＞F0.01。

2.4 菌絲量與糖的消耗

將培養(yǎng)好的菌絲體樣品溶液過濾干燥后得到菌絲量，同時測定濾液的總糖含量算出其消耗量（消耗量=初始總糖量-濾液總糖量），見圖3。

圖3 菌絲量與糖的消耗Fig.3 The relationship between grow th of mycelium and consumption of sugars

從圖3可以看出，隨著菌絲的增殖，糖的消耗增大，根據(jù)生物統(tǒng)計的回歸結(jié)果為y=0.113 5b+2.15x，b= 2.15，r=0.95。對b進(jìn)行t檢驗（t=17.2＞t0.01）表明，蒙古口蘑菌絲體對糖的利用為顯著關(guān)系。

3 結(jié)論

培養(yǎng)基的pH值是影響珍稀食用菌菌絲體增殖的主要因素之一[15]。通過實驗發(fā)現(xiàn)，初始pH6～7是其最適pH范圍，pH6是其最適pH；菌絲的增殖與糖的消耗呈正相關(guān)。不同的食用菌在不同生長階段對光照的需求不一，目前普遍認(rèn)為食用菌的菌絲體生長不需要光照[16]。實驗發(fā)現(xiàn)，蒙古口蘑菌絲體在室溫暗光（條件Ⅲ）培養(yǎng)時生長最好。

[1]卯曉嵐．中國大型真菌[M]．鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000，131

[2]吳恩奇,圖力古爾．蘑菇口蘑研究進(jìn)展[J]．中國食用菌,2007,26(4)：3-5

[3]田紹義,楊發(fā)茂.蒙古口蘑馴化栽培成功[J].菌物學(xué)報,1992,11(2)：146-149

[4]趙吉,邵玉琴.草原蒙古口蘑蘑菇圈的特殊生態(tài)現(xiàn)象觀察[J].中國食菌,2002,21(6)：25-26

[5]王素英,閆偉.蒙古口蘑(Tricholomamongolicum）促進(jìn)油菜、芹菜生長的研究[J].干旱區(qū)資源與環(huán)境,2000,14(4)：90-95

[6]閻偉,王素英,陳有君.蒙古口蘑不同菌株及不同處理菌液對小麥、甘藍(lán)促進(jìn)生長效應(yīng)的研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2001,23 (4)：1-4

[7]王素英,閆偉.蒙古口蘑(Tricholoma mongolicum）促進(jìn)苦菜、生菜生長試驗研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2001,22(4)：136-138

[8]范慶鋒,孟建宇,姚慶智．蒙古口蘑菌絲體多糖的測定[J]．畜牧與飼料科學(xué),2008(4)：21-23

[9]Wang HX,OoiVE,Ng TB,Hypotensive and vasorelaxing activities of a lectin from the edible mushroom Tricholoma mongolicum[J]. Pharmacology toxicology,1996,79(6)：318-323

[10]Wang HX,Ng TB,Liu WK,et al.Isolation and characterization of two distinct lectins with antiproliferative activity from the mycelium of the edible mushroom Tricholoma mongolicum[J].J.Peptide Protein Res,1996,46(6)：508-513

[11]Wang HX,Ng TB.Isolation of a novel ubiquitin-like protein from Pleurotus ostreatus mushroom with anti-human immunodeficiency virus,translation-inhibitory and ribonuclease ctivities[J].Biochem Biophys Res Commun,2000,267(2)：587-593

[12]王大為,吳恩奇,圖力古爾．蒙古口蘑保健飲品生產(chǎn)工藝及穩(wěn)定性的研究[J]．食品科學(xué),2006,27(10)：239-241

[13]金若忠,苑輝,欒慶書,等.蒙古口蘑的碳氮源營養(yǎng)研究[J].遼寧林業(yè)科技,2007(4)：47,50

[14]孟兆軍,傅占銀．溫度對口蘑生長發(fā)育影響的試驗初報[J]．食用菌,1999,21(1)：6-7

[15]宮志遠(yuǎn),于淑芳,曲玲,等．pH對五種珍稀食用菌菌絲生長的影響[J]．食用菌學(xué)報,2002,9(1)：40-43

[16]李玉,于海龍,周峰,等．光照對食用菌生長發(fā)育影響的研究進(jìn)展[J]．食用菌,2011,33(2)：3-4

Primary Study on the Optimal Culture Conditions of Mycelium of Tricholoma mongolicum

MENG Jian-yu，CAI Hang，LIU Jia-jie
（Institution for Applied and Environmental Microbiology of Life Sciences College，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，Inner Mongolia，China）

The culture conditions of mycelium of Tricholoma mongolicum was primary studied.The results showed that the mycelium of Tricholoma mongolicum grew best at room temperature and dark light condition.The growth rang of pH was between pH 6.0and pH 7.0 where as the optimal pH was determined tobe6.0.

Tricholoma mongolicum；mycelium；culture conditions

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.16.003

2014-03-23

內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)?？茖W(xué)研究項目（NJ10054）

孟建宇（1977—），男（漢），副教授，碩士，研究方向：資源與應(yīng)用微生物學(xué)。