祝捷，張輝

浙東地區(qū)漢族人群低密度脂蛋白受體基因rs2228671多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤的關(guān)系分析

祝捷，張輝

目的探討低密度脂蛋白受體基因（LDLR）單核苷酸多態(tài)性位點rs2228671與浙東地區(qū)漢族人群顱內(nèi)動脈瘤患病風(fēng)險因素之間的關(guān)系。方法在162個顱內(nèi)動脈瘤患者及113個對照組中，采用病例-對照研究的方法對rs2228671單核苷酸多態(tài)性位點進行顱內(nèi)動脈瘤患病風(fēng)險的分析。結(jié)果顱內(nèi)動脈瘤組和對照組的基因型頻率及等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。結(jié)論rs2228671-T與浙東地區(qū)漢族人群顱內(nèi)動脈瘤患病風(fēng)險沒有關(guān)聯(lián)性。

顱內(nèi)動脈瘤；動脈硬化；低密度脂蛋白受體；單核苷酸基因多態(tài)性

顱內(nèi)動脈瘤（IA）是蛛網(wǎng)膜下腔出血的首要原因[1]，該疾病的發(fā)生發(fā)展與環(huán)境因素和遺傳因素是密不可分的[2]，且動脈硬化在諸多的動脈血管影響因素中有著主導(dǎo)的作用。血液中低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）濃度升高會增加IA的患病危險性[3]。血液中低密度脂蛋白受體蛋白（LDLR）主要負(fù)責(zé)結(jié)合并清除多余的膽固醇，在膽固醇代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用[4]。

LDLR基因突變會引發(fā)體內(nèi)血脂代謝異常，LDLR基因的突變率是引起家族性高膽固醇癥（FH）的主要因素[3]，而FH是動脈粥樣硬化性疾病的重要致病因素。近年來全基因組關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)LDLR基因突變與血脂異常和動脈硬化有著密切的關(guān)聯(lián)性[5]。目前國內(nèi)外對LDLR與動脈硬化之間的關(guān)系主要是圍繞著LDLR基因的多態(tài)性位點展開的。有研究發(fā)現(xiàn)，在歐洲人群中LDLR基因的rs2228671（C/T）位點多態(tài)性與LDLC水平以及冠狀動脈粥樣硬化發(fā)病密切相關(guān)[6]。本研究選取浙東地區(qū)的162例IA患者和113例非冠心病對照組，采用病例對照研究的方法，探討了在中國人群中LDLR基因單核苷酸多態(tài)性位點與顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病的相關(guān)性。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2009年5月至2012年4月浙江省舟山市中醫(yī)骨傷聯(lián)合醫(yī)院及合作醫(yī)院經(jīng)腦血管造影檢測患者162例，其中男113例，女49例；年齡（63.29±10.20）歲。此外，113例對照組樣本來自于醫(yī)院體檢，男56例，女57例；年齡（59.24±9.68）歲。本實驗參與的研究對象均為浙東地區(qū)漢族人，并經(jīng)檢查排除先天性心臟病、心肌病和嚴(yán)重肝及腎疾病等系統(tǒng)性疾病。

1.2 方法（1）DNA提?。航?jīng)患者知情同意后，于冠狀動脈造影檢查時抽取動脈血10 ml，EDTA抗凝保存于4℃，長期保存于－20℃。常規(guī)苯酚-氯仿法抽提白細(xì)胞基因組DNA，核酸蛋白測定儀檢測DNA質(zhì)量與濃度后，－20℃保存。（2）基因型分析：合成單核苷酸多態(tài)性rs2228671引物序列。采用該引物對所有DNA樣本進行PCR擴增，PCR反應(yīng)條件分別為：94℃預(yù)變性15 s，然后按照每個循環(huán)94℃20 s、56℃30 s、72℃1 min進行45個循環(huán)，最終72℃延伸3 min。擴增后產(chǎn)物用于SEQUENOM Mass-ARRAY iPLEX平臺按照其說明書進行基因型分析[7]。

1.3 統(tǒng)計方法采用Arlequin軟件（version 3.5）計算基因型是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，＞0.05為符合該定律[8]。用CLUMP22軟件分析病例對照組的基因型及等位基因頻率的差異。使用Power and Sample Size Calculation軟件（version 3.0.43，Nashville，Tennessee，USA）對研究的樣本量進行Power分析[9]。雙側(cè)＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組LDLR基因rs2228671多態(tài)性的基因型和等位基因進行分性別進行分析，見表1。對照組rs2228671基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（＞0.05）。rs2228671位點在顱內(nèi)動脈瘤組中均存在C/C（97%）、C/T（2%）、T/T（1%）3種基因型；對照組中僅發(fā)現(xiàn)C/C（98%）和C/T（2%）2種基因型。全部樣本及男女分組中基因型和等位基因分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。對rs2228671多態(tài)性位點的顯性模式進行分析，發(fā)現(xiàn)顱內(nèi)動脈瘤組和對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05），見表2。

3 討論

血液中LDLR濃度的變化會引起膽固醇的代謝異常，LDLR基因作為FH的主要致病基因，已被證明與動脈粥樣硬化、高血壓及冠心病有著密切關(guān)系[10]。LDLR基因一旦發(fā)生突變，有可能引發(fā)血液中LDL-C水平升高而出現(xiàn)動脈病變的早期癥狀[3]。

LDLR基因位于19p13.2，長度45kb，包含18個外顯子和17個內(nèi)含子。LDLR編碼839個氨基酸組成的成熟蛋白，位于細(xì)胞膜表面，在膽固醇代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用[4]。rs2228671位于LDLR基因的第二個外顯子[11]。近年來，多個全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)在LDLR基因中的單核苷酸多態(tài)性位點（rs599839，rs4970834，rs646776，rs599839）與血液中LDL-C水平和動脈粥樣硬化是密切相關(guān)的[12]。此外，研究表明rs2228671的T等位基因能有效減少血液中LDL-C濃度，并且與降低動脈粥樣硬化和心肌梗死（MI）患病風(fēng)險因素密切相關(guān)l[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)rs2228671（C/T）的多態(tài)性分布具有種族差異。在HapMap計劃和1000 Genomes計劃中，歐洲人群中該多態(tài)性的等位基因頻率為10%～17%，在非洲人群中占2%～3%，而在亞洲人群中占0～1%。本研究結(jié)果顯示浙東地區(qū)人群的T等位基因頻率在CHD（2%）和對照組（1%）分布較低。說明浙東地區(qū)漢族正常健康人群的rs2228671-T的等位基因型頻率分布符合亞洲人群的分布特征，而與歐洲人群有明顯差異。這種分布的差異性可能是由于不同種族和群體之間等位基因頻率存在異質(zhì)性。本研究未發(fā)現(xiàn)兩組數(shù)據(jù)間基因型頻率及等位基因頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。這說明rs2228671-T多態(tài)性可能與浙東地區(qū)漢族人群的顱內(nèi)動脈瘤無關(guān)。此外，本樣本的Power僅為18.10%，因此不能排除樣本量較少是導(dǎo)致陰性結(jié)果的主要原因。

表1 兩組LDLR基因rs2228671多態(tài)性位點的基因型及等位基因頻率分布

表2 兩組LDLR基因rs2228671多態(tài)性位點顯性模式分析

綜上所述，本研究顯示LDLR基因的rs2228671與浙東地區(qū)人群的顱內(nèi)動脈瘤無明顯關(guān)系。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.12.007

R743.4

A

1671-0800(2014)12-1477-03

316000 浙江省舟山，舟山市中醫(yī)骨傷聯(lián)合醫(yī)院

祝捷，Email：zszj5353@163.com