源瀚祺，黃慶華,*，張小英，周子雄，游明霞

（1.廣東藥學院藥科學院，廣東 廣州 510006；2.湯臣倍健股份有限公司，廣東 珠海 519040）

茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素的大鼠腸吸收特性

源瀚祺1，黃慶華1,*，張小英1，周子雄1，游明霞2

（1.廣東藥學院藥科學院，廣東 廣州 510006；2.湯臣倍健股份有限公司，廣東 珠海 519040）

目的：研究茶枝柑皮提取物中多甲氧基黃酮類成分川陳皮素和橘皮素在大鼠的腸吸收特性。方法：采用大鼠單向腸灌流模型，利用高效液相色譜法分別測定灌流前后經(jīng)處理的灌流液中川陳皮素和橘皮素的含量變化，計算其腸吸收速率常數(shù)Ka和表觀吸收系數(shù)Kapp，分析茶枝柑皮提取物在大鼠腸吸收的特征。結果：川陳皮素和橘皮素在各腸段吸收有顯著差異，同種成分不同腸段間吸收無顯著差異，質量濃度和pH值對吸收情況無顯著影響。結論：茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素在大鼠各腸段吸收良好，在空腸段吸收最好，其吸收呈簡單的被動擴散。

茶枝柑皮；在體單向腸灌流模型；川陳皮素；橘皮素

目前，我國食品功能因子的研發(fā)相對快捷有效的途徑主要有：從各種天然產物特別是藥食兩用的中藥資源中尋找食品功能因子；加強對第2代功能性食品的功效物質基礎的研究。研究活性組分口服后在體內的吸收情況，對設計其傳輸系統(tǒng)具有重要的指導意義。小腸是吸收的主要場所，也是研究口服活性成分吸收機理的主要部位。評價活性成分在腸道吸收的方法有離體法、在體法和體內法等多種方法[1]，在體法因不損傷研究部位的淋巴和循環(huán)系統(tǒng)而明顯優(yōu)于其他方法。在眾多的在體研究法中，單向灌流模型是以較低的流速（0.2～0.3 mL/min）對某一腸段進行單向灌流，根據(jù)進出入口處灌流液中的藥物濃度差考察藥物在該腸段的吸收，其實驗條件與口服給藥后藥物接觸的腸道環(huán)境較接近，吸收速率穩(wěn)定，與人體有良好的相關性[2-3]。這種技術在國內外被廣泛地應用于研究各種化學藥物的吸收行為[4-6]，在中藥及功能食品研究中也日益普及。

茶枝柑皮是茶枝柑（Citrus reticulata “Chachi”）的成熟果皮，是廣東道地藥材廣陳皮的原料來源，也是國家衛(wèi)生部確定的藥食兩用的中藥品種。黃酮類成分是茶枝柑皮中的主要活性成分[7]，而多甲氧基黃酮類（polymethoxylated flavones，PMFs）更是蕓香科柑橘屬所特有的、高度甲氧化的微量成分，由于具有很強的抗氧化、抗癌、抗腫瘤、抗炎、降低膽固醇水平及抗菌活性而備受關注[8]。本課題組主要針對茶枝柑皮的抗氧化活性進行研究，以體外抗氧化活性為指標進行了茶枝柑皮的提取工藝研究，應用血清藥物化學的原理確定了提取物入血有效成分主要為包括川陳皮素和橘皮素在內的多種PMFs[9-10]，在經(jīng)過硅膠柱層析分離得到多種PMFs后，通過細胞實驗證實了茶枝柑皮提取物及PMFs均具有抗氧化活性，對受H2O2氧化應激損傷的大鼠嗜鉻瘤細胞PC12具有保護作用，能降低細胞丙二醛水平，提高其超氧化物歧化酶及谷胱甘肽過氧化物酶活性[11]。

研究口服茶枝柑皮提取物后PMFs的吸收部位和吸收機制對建立其口服傳輸系統(tǒng)和理解茶枝柑皮提取物作用的物質基礎具有重要意義。實驗采用大鼠單向腸灌流模型，比較不同質量濃度和pH值條件下的茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素在不同腸段的吸收變化，以期通過研究以川陳皮素和橘皮素為代表的PMFs在大鼠腸道的吸收轉運特性，探討茶枝柑皮提取物抗氧化活性成分在不同條件下服用時的吸收差異，為功能食品功效機制的深入研究提供基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

動物SD大鼠，雄性，體質量250～300 g，廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供（粵檢證字第2000A037號）。適應性喂養(yǎng)1周，每天自由進食、飲水。

1.2 材料與試劑

茶枝柑皮于2009年12月采自廣東翁源壩仔鎮(zhèn)溪水村，由廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室張丹雁教授鑒定為茶枝柑（Citrus reticulata “Chachi”）。參照文獻[9]，茶枝柑皮粉碎至20目，在40 ℃烘箱內干燥1～2 d，以液料比17∶1，42%乙醇于62 ℃條件下水浴回流3.1 h，真空干燥得固體塊狀茶枝柑皮提取物。經(jīng)高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定[12]，茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素含量分別為13.30 mg/g和10.68 mg/g。

川陳皮素及橘皮素對照品（實驗室自提，經(jīng)HPLC歸一化法測定含量大于98%）；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。Krebs-Ringer’s灌流液組成：NaCl（133 mmol/L）、KCl（4.7 mmol/L）、CaCl2（3.3 mmol/L）、MgCl2（2.3 mmol/L）、NaH2PO4（1.8 mmol/L）、NaHCO3（16.4 mmol/L）、D-葡萄糖（7.8 mmol/L）。

1.3 儀器與設備

H L-2電子蠕動泵 上海滬西分析儀器廠；ZNHW-Ⅲ電子節(jié)能控溫儀 鞏義市英峪予華儀器廠；高效液相色譜儀 美國安捷倫公司。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL；流動相（體積分數(shù)）：0.2%乙酸-乙腈，梯度洗脫，0～10 min乙腈8%～25%，10～20 min乙腈25%～30%，20～30 min乙腈30%～50%，30～40 min乙腈40%；檢測波長：330 nm。

1.4.2 溶液的配制

茶枝柑皮提取物供試液：精密稱取一定量的茶枝柑皮提取物，加入20 mL 0.5%羧甲基纖維素鈉溶液溶解后以Krebs-Ringer’s灌流液定容至200 mL，得質量濃度分別為1.00、3.00、5.00 mg/mL的提取物灌流液。

對照品溶液：精密稱取川陳皮素、橘皮素對照品適量，置10 mL量瓶中，甲醇定容，即得1 mg/mL的對照品貯備液。精密量取對照品貯備液適量，用甲醇稀釋成不同質量濃度的混合對照品系列溶液。

1.4.3 方法學考察

1.4.3.1 標準曲線的建立

精密吸取系列溶液各200 μL，置于1.5 mL 離心管中，水浴加熱氮氣吹干甲醇溶劑，分別精密加入Krebs-Ringer’s灌流液200 μL，乙酸乙酯800 μL，渦旋混勻3 min，靜置后10 000 r/min離心10 min，吸取上清液，反復操作2次，合并上清液，水浴加熱氮氣吹干，精密加入甲醇200 μL，渦旋1 min后10 000 r/min離心5 min，取上清液20 μL進行HPLC分析。分別以川陳皮素和橘皮素的質量濃度ρ/（μg/mL）對峰面積A進行線性回歸，得2個標準曲線方程。

1.4.3.2 精密度實驗

精密吸取上述系列的高質量濃度（含川陳皮素84.40 μg/mL、橘皮素84.08 μg/mL）、中質量濃度（含川陳皮素10.55 μg/mL、橘皮素10.51 μg/mL）、低質量濃度（含川陳皮素0.66 μg/mL、橘皮素0.66 μg/mL）混合對照品溶液，按1.4.3.1節(jié)“置于1.5 mL離心管中”開始操作處理，24 h內間隔進樣5次，5 d內間隔進樣5 次，分別記錄峰面積及計算日內和日間精密度。

1.4.3.3 回收率實驗

分別精密吸取上述系列的兩組高質量濃度（含川陳皮素84.40 μg/mL、橘皮素84.08 μg/mL）、中質量濃度（含川陳皮素10.55 μg/mL、橘皮素10.51 μg/mL）、低質量濃度（含川陳皮素0.66 μg/mL、橘皮素0.66 μg/mL）混合對照品溶液各200 μL，置于1.5 mL 離心管中，水浴加熱氮氣吹干甲醇溶劑，一組分別精密加入Krebs-Ringer’s灌流液200 μL，另一組分別精密加入空白腸液200 μL，其余步驟按1.4.3.1節(jié)從“乙酸乙酯800 μL”開始處理后進樣，以后者對前者相應質量濃度的峰面積比值計算絕對回收率。并以后者峰面積代入標準曲線方程計算實測質量濃度，與實際對照品質量濃度的比值計算方法回收率。

1.4.3.4 穩(wěn)定性實驗

精密稱取茶枝柑皮提取物適量，按1.4.2節(jié)方法配制茶枝柑皮提取物灌流液，封口膜密封，置37 ℃恒溫水浴中，分別于0、30、60、90、120 min精密吸取200 μL，按1.4.3.1節(jié)方法處理后進樣，將各時間點測得的川陳皮素和橘皮素含量與0 min測得的含量作百分比，并重復實驗3 次，計算各時間點含量百分比值的相對標準偏差（relative standard deviation，RSD），作為供試液穩(wěn)定性考察指標，考察供試液中的成分含量在大鼠腸灌流吸收研究過程中能否保持穩(wěn)定。

1.4.4 大鼠在體腸吸收實驗

實驗前將大鼠禁食過夜（自由飲水），腹腔注射0.2 g/mL烏拉坦溶液麻醉（5 mL/kg），固定，用紅外燈保持37 ℃體溫，沿腹中線打開腹腔約3 cm，分別截取十二指腸、空腸、回腸、結腸腸段（選取腸段標準如下：十二指腸自幽門1 cm處開始向下10 cm止；空腸段自幽門起15 cm往下10 cm止；回腸自盲腸上行20 cm開始往下10 cm止；結腸段從盲腸后端開始往下10 cm止。每個腸段的吸收狀況用6 只大鼠進行考察統(tǒng)計，每次實驗只截取1 只大鼠的其中1 個腸段），兩端切口，用預熱至37 ℃的生理鹽水將腸內容物沖洗干凈，再用空氣將生理鹽水排空，切口兩端分別插管并結扎固定。傷口處用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保濕，紅外燈下保溫。用37 ℃的Krebs-Ringer’s灌流液以0.2 mL/min流速對截取腸段灌流平衡30 min，再取預熱至37 ℃的供試藥液50 mL，以0.2 mL/min流速灌流平衡45 min，待平衡結束后腸段入口處換上裝有灌流液且已稱量的供試液瓶并開始計時，出口處則用另一已知質量的具塞瓶收集流出液，每隔15 min迅速更換供試液瓶和收集液瓶并稱質量，實驗共收集6 次流出液，即于灌流計時開始后15、30、60、75、90 min收集流出液。實驗結束后，測量腸段長度l與內徑r。供試液和各時間點得到的收集液分別按1.4.3.1節(jié)方法處理后進樣測定，將得到的川陳皮素及橘皮素峰面積代入標準曲線方程，計算其質量濃度。

實驗中小腸不僅吸收藥物也吸收和分泌水分，導致供試液體積變化，故不能用直接測定藥物濃度的方法計算藥物的吸收。故采用質量法[13]校正因腸內水分吸收引起的灌流液體積的變化。供試液瓶和收集液瓶的空瓶質量分別為ms0和mr0，ρin為入腸灌流供試液的密度，ρout為15～60 min的總收集液混勻后的密度（各時間點的收集液密度經(jīng)測定可看作一致）。每隔15 min結束灌流后裝供試液瓶和接收液瓶的質量分別為ms1和mr1，則入腸液體的質量min=ms0-ms1；出腸液體質量mout=mr1-mr0；供試液實際體積Vin=min/ρin；接收液實際體積Vout=mout/ρout。Vin與Vout的差異即為腸道吸收或分泌的水分體積。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用質量法[9]，根據(jù)公式（1）、（2）計算藥物吸收速率常數(shù)（Ka）和表觀吸收系數(shù)（Kapp）。

式中：Q為灌流速度；V為被測腸段的體積；r為被測腸段內徑；l為被測腸段長度；Cout為各時間點得到的收集液中被測成分的質量濃度；Vout為經(jīng)質量法校正后的收集液實際體積；Cin為提取物供試液中被測成分的質量濃度；Vin為經(jīng)質量法校正后的供試液實際體積。

利用統(tǒng)計分析軟件SPSS 13.10處理腸吸收數(shù)據(jù)，并進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 方法學驗證

圖1 腸灌流液中的川陳皮素和橘皮素的HPLLCC圖Fig.1 Chromatograms of intestinal fluid spiked with nobiletin and tangeretin

由圖1可知，經(jīng)HPLC測定，川陳皮素和橘皮素的保留時間分別是13.29、15.47 min，空白灌流液中的物質不干擾其測定，表明分析方法可行。

川陳皮素的線性方程為：A=74.66C-8.8431，r=0.999 9，線性范圍0.66～84.40 μg/mL；橘皮素的線性方程為：A=80.90C-21.63（r=0.999 9），線性范圍0.66～84.08 μg/mL。高、中、低質量濃度的日內精密度RSD（n=5）分別為川陳皮素：2.28%、2.99%、7.37%；橘皮素：1.58%、2.76%、5.88%。高、中、低質量濃度的日間精密度RSD（n=5）分別為川陳皮素：2.03%、2.76%、4.93%；橘皮素：2.15%、2.70%、4.29%。RSD均小于10%，表明方法的精密度良好。3 次穩(wěn)定性實驗測得的含量百分比的平均RSD為川陳皮素：1.03%，橘皮素：0.74%，表明供試液中的成分質量濃度在37 ℃水浴加熱2 h內基本穩(wěn)定不變。川陳皮素和橘皮素的方法回收率和絕對回收率考察結果見表1，符合質量濃度測定的要求。2.2 茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素在大鼠不同腸段的吸收

表1 川陳皮素和橘皮素的回收率考察（n＝55）Table 1 Recovery of nobiletin and tangeretin in intestinal fluid ( = 5)

用1 mg/mL提取物灌流液（含川陳皮素13.30 mg/L和橘皮素10.68 mg/L），對大鼠各腸段的吸收特性進行考察，結果見表2。表2中Kapp值表明，川陳皮素（13.30 mg/L）在腸道的吸收狀況為空腸＞回腸＞十二指腸＞結腸；橘皮素（10.68 mg/L）在腸道的吸收狀況為空腸＞回腸＞結腸＞十二指腸，但同種成分在不同腸段吸收參數(shù)統(tǒng)計學上均無顯著性差異（P＞0.05），說明川陳皮素和橘皮素在全腸段均有吸收，且在空腸段吸收最好。另外從表2可看出，橘皮素比川陳皮素的在各段腸道中吸收稍好，吸收系數(shù)均存在極顯著差異（P＜0.01）。

表2 不同腸段對川陳皮素（13.30 mg/L）和橘皮素（10.68 mg/L）吸收的app值的影響Table 2 Absorptivity and app of nobiletin (13.30 mg/L) and tangeretin (10.68 mg/L) in different intestinal segme

表2 不同腸段對川陳皮素（13.30 mg/L）和橘皮素（10.68 mg/L）吸收的app值的影響Table 2 Absorptivity and app of nobiletin (13.30 mg/L) and tangeretin (10.68 mg/L) in different intestinal segme

注：**.與川陳皮素的吸收系數(shù)相比，差異極顯著（P＜0.01）。

參數(shù)藥物十二指腸空腸回腸結腸Ka/（10-2/min）川陳皮素97.38±0.4297.21±0.9697.76±0.3697.28±0.68橘皮素98.75±0.31**98.89±0.44**99.13±0.15**98.53±0.85**Kapp/（10-3cm/min）川陳皮素2.58±0.203.04±0.522.99±0.732.46±0.64橘皮素6.11±0.78**7.56±1.18**6.67±1.13**6.53±0.95**

2.3 不同質量濃度的提取物灌流液對十二指腸段吸收的影響

分別采用了高、中、低質量濃度的提取物供試液對十二指腸段進行灌流，結果見表3。結果表明在低質量濃度的提取物供試液中川陳皮素和橘皮素的吸收系數(shù)最大，并隨質量濃度的提高而降低，但同種成分在不同質量濃度下的吸收系數(shù)均無顯著性差異，說明提取物質量濃度對吸收的總體影響不大。

表3 質量濃度對川陳皮素和橘皮素在大鼠十二指腸吸收的Ka和Kapp值的影響Table 3 Absorptivity of different concentrations of nobiletin and tangeretin in the duodenu

表3 質量濃度對川陳皮素和橘皮素在大鼠十二指腸吸收的Ka和Kapp值的影響Table 3 Absorptivity of different concentrations of nobiletin and tangeretin in the duodenu

藥物質量濃度/（mg/L）Ka/（10-2/min）Kapp/（10-3cm/min）川陳皮素66.5（高）96.76±2.612.50±0.31 39.9（中）97.21±0.452.68±0.50 13.3（低）97.66±0.212.69±0.22橘皮素66.5（高）98.15±0.135.37±0.19 39.9（中）98.89±0.186.10±0.47 13.3（低）98.97±0.146.47±0.83

2.4 不同pH值的提取物灌流液對十二指腸段吸收的影響

分別采用了高、中、低pH值的Krebs-Ringer’s灌流液配制提取物供試液，對十二指腸段進行灌流，結果見表4。結果表明用于配制提取物供試液的Krebs-Ringer’s灌流液的pH值的變化對其在大鼠腸道的吸收影響并不明顯，在不同pH值條件下同種成分在十二指腸的吸收系數(shù)均無顯著性差異。

表4 pH值對川陳皮素和橘皮素在大鼠十二指腸吸收的Ka和Kapp值的影響Table 4 Absorptivity of nobiletin and tangeretin in perfusates with different pH values in the duodenu

表4 pH值對川陳皮素和橘皮素在大鼠十二指腸吸收的Ka和Kapp值的影響Table 4 Absorptivity of nobiletin and tangeretin in perfusates with different pH values in the duodenu

藥物pHKa/（10-2/min）Kapp/（10-3cm/min）川陳皮素7.50（高）97.66±0.212.69±0.22 6.50（中）98.01±0.333.41±0.60 5.50（低）96.05±1.474.09±1.05橘皮素7.50（高）98.97±0.146.47±0.83 6.50（中）98.80±0.144.94±0.98 5.50（低）97.77±0.916.37±0.91

3 討 論

在體單向腸灌流法通過測定藥物經(jīng)過在體腸段后灌流液的減少量來估算藥物滲透系數(shù)，可避免胃腸內容物、消化道的運動等生理因素的影響，較容易通過控制和改變實驗條件來觀察比較藥物在腸道中的消除過程和影響因素[14-15]。由于小腸吸收并不是引起腸道內藥物減少的唯一原因，腸黏膜代謝和藥物在黏膜的積聚也會引起供試液中藥物質量濃度的減少，因此在實驗開始前應用供試液對考察腸段進行灌流平衡以減少實驗結果與實際情況的誤差[16]。另外，實驗過程中由于腸道能吸收或排泄水分，導致供試液體積改變，所以有必要對其進行校正。有文獻報道，用不被吸收的標記物如酚紅或14C-聚乙二醇標示灌流液體積的變化，然而酚紅本身能部分被吸收以及對某些化合物的腸道轉運或分析測定有干擾，而14C-聚乙二醇存在放射性和安全性問題[17]，故本實驗采用質量分析法校正。質量法通過灌流前后的質量差和密度對灌流液體積進行校正，能更真實地反映腸道吸收水分的實際情況，提高測定Ka和Kapp準確度，并且對實驗條件無特殊要求，廣泛適用于中藥復方的腸吸收研究[18-20]。

由于多甲氧基的存在，使PMFs分子更具平面性，因而比柑橘中富含的其他黃酮苷的極性更小，且PMFs脂溶性極好，故易于透過細胞膜而被吸收[21]。藥物吸收的量可用Kapp表示，藥物吸收的速度則用Ka表示，文獻報道藥物成分Kapp＜1.8×10-3cm/min和Kapp＞1.2×10-2cm/min時表示藥物在大鼠腸道難以吸收和易于吸收[2]。實驗結果顯示，提取物中川陳皮素和橘皮素在各腸段均有Kapp＞1.2×10-2cm/min，據(jù)此可認為兩種成分在各腸段均易于吸收，其中空腸段最好，提示可考慮將提取物制成緩釋制劑或空腸定位制劑等劑型。另外，實驗結果表明提取物灌流液中川陳皮素、橘皮素在各高、中、低質量濃度及pH值的吸收系數(shù)無顯著性差異，說明藥物吸收不受質量濃度的影響，不存在較大濃度下飽和的現(xiàn)象。而pH值分配假說認為藥物的吸收取決于藥物在胃腸道中的解離狀態(tài)和油水分配系數(shù)[22-23]，川陳皮素和橘皮素均為弱酸性化合物，在消化道體液pH值環(huán)境下，未解離型成分在胃腸道的濃度占大比例，容易透過消化道上皮細胞膜，故調節(jié)供試液pH值可能影響成分的解離度繼而影響吸收狀況，但實驗結果顯示弱酸性至弱堿性pH 5.5～7.5對其吸收無顯著影響。因此推斷茶枝柑皮提取物中川陳皮素和橘皮素的吸收可能表現(xiàn)為被動擴散。

影響口服藥物生物利用度的原因很多，如藥物溶解性、胃腸道的酸堿度、胃排空的速度和胃腸蠕動等，還有可能是腸道菌群作用、腸道屏障作用、藥物外排和腸上皮細胞的代謝。因此研究藥物吸收和代謝特點成為口服藥物開發(fā)的主要環(huán)節(jié)，而在體單向腸灌流模型為其提供了重要的方法。大鼠在體腸灌流模型技術成熟，目前已被廣泛應用于研究各類單體藥物及中藥復方的吸收機制[24-27]。本實驗印證了將大鼠在體腸灌流模型應用于研究保健食品的功能因子在腸道吸收機制的可行性，若結合體內代謝動力學研究，可為保健食品的劑型及劑量設計提供參考依據(jù)。

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Intestinal Absorption Properties in Rats of Nobiletin and Tangeretin in Ethanol Extract of Citrus reticulata “Chachi” Peel by Single Pass Perfusion Model

YUAN Han-qi1, HUANG Qing-hua1,*, ZHANG Xiao-ying1, ZHOU Zi-xiong1, YOU Ming-xia2
(1. College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China; 2. By-Health Co. Ltd., Zhuhai 519040, China)

Objective: To study the intestinal absorption behaviors of two polymethoxylated flavonoids (PMFs), nobiletin and tangeretin, from Citrus reticulata “Chachi” peel. Methods: In situ single pass perfusion model was used to investigate the absorption rate constant (Ka) and apparent absorption coefficient (Kapp), based on nobiletin and tangeretin concentration in the solution before and after perfusion. Results: An obvious difference betwe en nobiletin and tangeretin was observed for their absorption in whole intestinal sections. For each of the two PMFs, the absorption in whole intestinal sections was not significantly different. The concentration and pH of PMFs exerted no remarkable effect on intestinal absorption. Conclusion: Nobiletin and tangeretin from Citrus reticulata “Chachi” peel can be well absor bed in whole intestinal sections, especially in the jejunum. Their transport mechanism in vivo is sim ilar to p assive diffusion.

Citrus reticulata “Chachi” peel; in situ single pass perfusion; nobiletin; tangeretin

R945

A

1002-6630（2014）15-0263-05

10.7506/spkx1002-6630-201415053

2013-10-21

珠海市科技工貿和信息化局企業(yè)技術創(chuàng)新項目（珠經(jīng)貿字（2009）414號）

源瀚祺（1989—），男，碩士研究生，研究方向為保健食品開發(fā)。E-mail：keithyuen@126.com

*通信作者：黃慶華（1954—），女，教授，本科，研究方向為中藥保健食品開發(fā)與質量控制。E-mail：hqh1003@163.net