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正交設(shè)計法優(yōu)選穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に?/h1>
2014-03-08 07:13:39王海燕高文學
藥學研究 2014年11期
關(guān)鍵詞:穿山龍三氟乙酸薯蕷

劉 斌,王海燕,高文學

(泰安市食品藥品檢驗中心,山東泰安271000)

正交設(shè)計法優(yōu)選穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に?/p>

劉 斌,王海燕,高文學

(泰安市食品藥品檢驗中心,山東泰安271000)

目的優(yōu)選穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に?。方法采用正交試驗設(shè)計進行條件優(yōu)選,以總皂苷和薯蕷皂苷的含量作綜合評價。結(jié)果優(yōu)選的提取工藝為:穿山龍加入10倍量60%的乙醇,提取3次,每次1 h。結(jié)論該工藝簡單合理,穩(wěn)定可行,可作為穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に嚒?/p>

穿山龍;總皂苷;薯蕷皂苷;提取工藝;正交試驗

穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的干燥根莖[1],是泰山四寶之一,性甘、苦,溫。具有祛風除濕,舒筋通絡(luò),活血止痛,止咳平喘的功效[1]。其總皂苷類成分具有調(diào)節(jié)免疫,改善心血管的功能,還具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛等多種作用。總皂苷中的薯蕷皂苷可以合成200多種藥物,為合成副腎皮質(zhì)激素以及口服或注射用避孕藥的主要原料[2,3]。泰山的穿山龍資源豐富,具有極高的藥用價值和廣闊的市場開發(fā)前景。本試驗以總皂苷和薯蕷皂苷的含量作綜合評價,采用正交試驗方法對其提取工藝進行優(yōu)化[4~8],確定最佳工藝參數(shù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260 Series高效液相色譜儀(Agilent1200四元泵,VWD檢測器),Agilent Chemstation工作站;TU-1901雙波束紫外可見分光光度計(北京普析);十萬分之一電子天平(Mettler Toledo XS205)。

1.2 試藥 薯蕷皂苷(中國藥品生物制品檢定所,批號:110717-200501)。乙腈為色譜純,甲醇、乙醇等其他試劑均為分析純,水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1.1 穿山龍總皂苷的測定 取薯蕷皂苷對照品13.5 mg,精密稱定,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻即得對照品儲備溶液。精密量取對照品儲備液5 mL,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液。精密吸取對照品溶液2.0 mL,置具塞試管中,水浴揮干溶劑,精密加入高氯酸10 mL,于60℃水浴加熱15 min,冰水終止反應,隨行試劑做空白,以紫外分光光度計在406 nm波長處測定吸光度。精密吸取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分別置具塞試管中,按相同方法處理后,在406 nm波長處測定吸光度,以吸光度Y(A)為縱坐標,濃度X(μg·mL-1)為橫坐標,繪制標準曲線。得到回歸方程為Y=0.019 11X-0.045 3,r=0.999 4,線性范圍為5.4~54.0μg·mL-1。

2.1.2 薯蕷皂苷的測定 采用HPLC法,以薯蕷皂苷含量計。采用Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,乙腈-水(55∶45)為流動相,測定波長203 nm,流速為1.0 mL·min-1,柱溫為30℃,進樣量為10μL。

2.2 薯蕷皂苷對照品溶液的制備 精密稱取薯蕷皂苷對照品15.25 mg,置50 mL容量瓶中,加甲醇制成含薯蕷皂苷305μg·mL-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 稱取穿山龍飲片50 g,分別按照不同的提取條件回流提取,過濾提取液,濾液減壓干燥制成干膏。精密稱取干膏1.00 g,置于200 mL容量瓶中,用65%乙醇溶解并定容至刻度。分別取對照品溶液和供試品溶液進樣,色譜圖見圖1和圖2。

圖1 薯蕷皂苷對照品色譜圖 1.薯蕷皂苷

圖2 供試品色譜圖 1.薯蕷皂苷

2.4 提取溶劑的初選 穿山龍總皂苷一般極性較大,多采用水、乙醇等極性較大的溶劑進行提取,試驗以水、50%乙醇、95%乙醇為溶劑,采用回流提取方式,平行試驗,以薯蕷皂苷與總皂苷為指標,初選提取溶劑,結(jié)果見表1。

表1 提取溶劑的初選考察

結(jié)果表明:水和95%乙醇對于本品提取效果較差,50%乙醇對于總皂苷和薯蕷皂苷提取效果較好,因此我們以中濃度乙醇作為研究基礎(chǔ)進行提取工藝研究。

2.5 提取工藝參數(shù)優(yōu)選 影響加熱回流提取的主要參數(shù)包括提取次數(shù)、提取溶劑、提取時間、溶劑用量等。我們在預實驗的基礎(chǔ)上,以薯蕷皂苷、總皂苷為考察因素,采用建立L16(45)正交實驗,優(yōu)選穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に噮?shù)。正交實驗因素水平表見表2。

表2 正交實驗因素水平表

2.6 正交試驗結(jié)果與方差分析 取樣品16份,分別按照正交實驗設(shè)計提取,制備干膏,測定薯蕷皂苷與總皂苷的含量。由本實驗研究目的認為,提取物中薯蕷皂苷與總皂苷的含量具有同等的意義,權(quán)衡指標系數(shù)皆為5,為避免衡量方式引入的誤差,采用系數(shù)評分,利用下列公式計算綜合評分。實驗結(jié)果及方差分析見表3~4。計算公式如下:

薯蕷皂苷評分=(薯蕷皂苷含量/最大薯蕷皂苷含量)×5,總皂苷評分=(總皂苷含量/最大總皂苷含量)×5,綜合評分=薯蕷皂苷+總皂苷評分。

表3 回流提取L16(45)正交實驗結(jié)果

查表知:F0.05(3,3)=9.28,F(xiàn)0.01(3,3)=29.46。

結(jié)果說明:通過方差分析,4個因素中A>B>C>D,其中A、B因素為顯著性影響因素。通過極差分析認為:理論最佳工藝為A3B3C3D3,即分別加入10倍量60%的乙醇提取3次,每次1 h,我們以此為基礎(chǔ)進行工藝驗證。

表4 回流提取方差分析表

2.7 工藝驗證 取100 g藥材3份,分別按照上述擬定的提取工藝參數(shù)提取,減壓濃縮成干膏,測定薯蕷皂苷與總皂苷的含量,進行工藝驗證。結(jié)果見表5。結(jié)果表明:工藝穩(wěn)定,質(zhì)量可靠。

表5 工藝驗證

3 結(jié)果與討論

3.1 試驗首次以穿山龍中總皂苷和薯蕷皂苷為指標,對穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に囘M行研究,達到了較好的提取效果,且工藝穩(wěn)定可行。

3.2 本試驗通過正交試驗對穿山龍?zhí)崛∥锾崛」に嚨难芯?,確定提取工藝為:穿山龍飲片,加入10倍量60%的乙醇,提取3次,每次1 h。經(jīng)驗證試驗結(jié)果表明,在該工藝下,總皂苷和薯蕷皂苷的含量均較高。

3.3 現(xiàn)代中藥提取純化技術(shù)發(fā)展迅速,通過一定的方法提取純化,制備中藥提取物,可以有效地除去雜質(zhì),提高有效成分的純度。本試驗根據(jù)穿山龍飲片中總皂苷和薯蕷皂苷的理化性質(zhì),優(yōu)選了穿山龍?zhí)崛∥锏奶崛」に嚕竟に嚭唵魏侠?,穩(wěn)定可行,為今后穿山龍?zhí)崛∥锏募兓蜕a(chǎn)應用提供了必要條件。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:250.

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表2 三氟乙酸測定結(jié)果

由上表可以看出,離子色譜法較高效液相色譜法有較高的檢測靈敏度。

4 結(jié)語

采用離子色譜法,使用碳酸鈉與碳酸氫鈉緩沖溶液作為淋洗液對鹽酸托烷司瓊中的三氟乙酸進行檢測,該方法操作簡單,專屬性強,靈敏度高,線性、準確度均能滿足定量測試的要求,該方法檢測結(jié)果準確可靠,可以作為鹽酸托烷司瓊中三氟乙酸的測試方法。

參考文獻:

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Orthogonal test for optim ization of extracting procedure from Dioscorea nipponica

LIU Bin,WANG Hai-yan,GAOWen-xue
(Taian Center for Food and Drug Control,Taian 271000,China)

ObjectiveTo select the optimalextracting technology for the extraction from Dioscorea nipponica.M ethodsThe procedure was selected with the contents of diosgenin and total saponins from Dioscorea nipponica by orthogonal test design.ResultsThe optimized extract technology was:Dioscorea nipponica was extracted by ten times of the amount of 60%alcohol for three times,each time for1 hour.ConclusionThe extracting technologywas simple and reasonable,stable and feasible,can be used as the extracting procedure for the extraction from Dioscorea nipponica.

Dioscorea nipponica;Total saponins;Diosgenin;Extraction craft;Orthogonal experiment

R284.2

A

2095-5375(2014)11-0637-003

泰安市科技發(fā)展計劃(No.20123080)

劉斌,男,主管藥師,研究方向:藥品檢驗,E-mail:liubin8247@sina.com

高文學,男,副主任藥師,研究方向:藥品檢驗,Tel:0538-8332398,E-mail:gwx366@163.com

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