諶金花，羅永杰

缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1）是受控于氧濃度變化的一個至關(guān)重要的轉(zhuǎn)錄因子。在腦卒后HIF-1表達，與其下游靶基因的缺氧反應(yīng)元件結(jié)合，調(diào)節(jié)其表達，介導(dǎo)機體的缺氧反應(yīng)。本文對HIF-1及其重要靶基因（血管生長因子，熱休克蛋白）在急性腦卒中的表達及臨床意義進行綜述。

1 HIF-1及其靶基因的結(jié)構(gòu)

1.1 HIF-1 的結(jié)構(gòu) HIF-1 是一種DNA 結(jié)合蛋白，由α、β 兩個亞基組成，以異源二聚體的形式存在，α亞基位于胞質(zhì)中，其濃度水平隨著低氧水平的增加而呈指數(shù)增加，β 亞基位于核中，其表達相對保持恒定。HIF-α家族包括三個成員：HIF-1α、HIF-2α（也叫做內(nèi)皮PAS 區(qū)域蛋白-1,EPAS-1）和HIF-3α,后兩者有更嚴格的組織表達。HIF-1α則為HIF-1所特有，既是HIF-1的調(diào)節(jié)亞基又是其活性亞基，其調(diào)節(jié)亞基包括兩個重要的結(jié)構(gòu)域:氧依賴降解結(jié)構(gòu)域和C 末端轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域以及內(nèi)在激活結(jié)構(gòu)域［1］。

1.2 HIF-1相關(guān)靶基因的結(jié)構(gòu) HIF-1α表達后，與其下游靶基因的缺氧反應(yīng)元件結(jié)合，調(diào)節(jié)其表達，介導(dǎo)機體的缺氧反應(yīng)，在缺氧誘導(dǎo)的基因表達中發(fā)揮關(guān)鍵作用。目前已確認HIF途徑直接激活超過70種基因,HIF 誘導(dǎo)的蛋白表達主要幫助缺氧細胞的代謝和生存需要。根據(jù)功能不同，這些靶基因分以下幾類：（1）作用于血管舒縮的控制，如：腎上腺髓質(zhì)素（AM）、一氧化氮合成酶（NOS）；（2）作用于血管的生成，如：內(nèi)皮素1（ET1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、FLT1（VEGF受體1）；（3）作用于鐵代謝,如：運鐵蛋白受體、血漿銅藍蛋白；（4）作用于紅細胞生成，如：促紅細胞生成素（EPO）；（5）作用于細胞分化/細胞循環(huán)控制，如：P21（WAF1/CIP1）、類胰島素生長因子2（IGF2）I、GFBP1、IGFBP2、IGFBP3；（6）作用于細胞死亡，如：NIP3、NIX；（7）作用于能量代謝,如：葡萄糖載體1和3（GLU1、GLU3）、脯氨酰4 羥化酶a1、磷酸果糖激酶L乳酸脫氫酶A、醛縮酶A和C、丙酮酸鹽激酶M、烯醇酶1、己糖激酶1和2、磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）；（8）作用于轉(zhuǎn)錄，如：DEC1 和ETS1、ID2、CITED2/p35srj；（9）作用于凋亡，如：NIP3、BNIP3、Noxa、Mcl1；（10）作用于應(yīng)激，如：熱休克蛋白70（HSP70）;（11）其他，如：纖溶酶原激活阻滯劑1（PAI1）、轉(zhuǎn)換生長因子3（TGF3）、血紅素加氧酶1、腺苷酸激酶3、磷酸甘油酸鹽激酶1、碳脫水酶9、RTP801、PHD2、PHD3。其中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一種多樣多功能的生長因子，具有四大生物學(xué)特性：增加血管滲透性、促進血管生成、促進內(nèi)皮細胞增值、保護神經(jīng)細胞。而熱休克蛋白70（HSP70）是一種在缺氧缺血等損傷后產(chǎn)生的具有高度保守性的應(yīng)激蛋白，能使細胞對損害的耐受能力增強。綜上所述二者在缺氧缺血損傷后，均具有保護作用。

VEGF是一種血管生長因子，在VEGF家族成員中VEGF是最強的調(diào)節(jié)血管生長因子。VEGF家族有以下幾個成員：VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和胎盤生長因子（PLGF）。它們雖然有相似的結(jié)構(gòu)，但他們有著不同的生理和生物學(xué)特性，因為它們與三個特定的酪氨酸激酶受體（VEGF-R1、VEGF-R2和VEGF-R3）不同的相互作用決定的。

熱休克蛋白根據(jù)不同的分子質(zhì)量，分不同的家族：HSP100，HSP90，HSP70，HSP60，HSP40 和小HSP家族。其中最保守的是熱休克蛋白70 家族［2］。有研究證實熱休克蛋白存在于多種類型的細胞，包括神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和血管內(nèi)皮細胞。熱休克蛋白70由兩個主要的功能區(qū)域組成：N-末端和C-末端結(jié)構(gòu)。其N-末端的核苷酸結(jié)合域（NBD）為45 kDa，通過與未折疊蛋白和合成肽結(jié)合，可以刺激很弱的ATP酶活性；與底物結(jié)合的C-末端結(jié)構(gòu)域（SBD），它進一步細分成β-夾心的為15 kDa的亞區(qū)和C-末端α-螺旋亞區(qū)。熱休克蛋白在他們的促進者中有熱休克元素，他們通過熱休克轉(zhuǎn)錄因子（HSF，一個家族的轉(zhuǎn)錄因子）的結(jié)合和激活，在熱沖擊或壓力后啟動熱休克轉(zhuǎn)錄［3］。HSF 通常與靜息細胞中的熱休克蛋白90 結(jié)合。在異常蛋白質(zhì)的存在下，熱休克蛋白90（Hsp90）與HSF解離，然后異常蛋白質(zhì)結(jié)合從而被激活。一旦熱休克蛋白70 被激活，在和其他的蛋白陪伴分子協(xié)同下，與變性蛋白結(jié)合，以防止蛋白質(zhì)進一步的變性［4］。熱休克蛋白在細胞缺氧缺血表達增加，它既是細胞受損的標志,又是神經(jīng)保護因子,對神經(jīng)細胞的損傷起著重要的保護作用。

2 HIF-1以及相關(guān)靶基因在缺血性卒中的表達及意義

2.1 腦缺血后HIF-1α的表達 HIF-1α在不同的腦損傷的實驗?zāi)Ｐ鸵约安煌哪挲g中，其表達時間不一樣。有實驗發(fā)現(xiàn)HIF-1α在成年人的局灶性腦缺血后7.5h后表達［5］，而在成人全腦缺血模型中96h 后表達［6］。全身缺氧，不管其持續(xù)時間（1，3 或6h），大鼠大腦的HIF-1 核的含量增加［7］。心臟驟停復(fù)蘇后1h 的大鼠大腦皮質(zhì)，HIF-1 顯著增加，持續(xù)升高超過12h［8］。更近的研究呈雙相中風(fēng)后，HIF-1的激活歷時長達10d［9］。

2.2 腦缺血后HIF-1 以及相關(guān)靶基因表達 在腦缺氧和缺血時，通過轉(zhuǎn)錄活化缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1 和HIF-2）從而誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子表達。有研究表明在局部缺血梗死3d 后，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和血管內(nèi)皮生長因子受體-2（VEGFR-2）的神經(jīng)細胞在皮質(zhì)區(qū)有表達，說明二者與梗死周圍神經(jīng)保護作用有關(guān)。在一個永久性局灶性腦缺血模型中，早在缺血發(fā)作后6h，VEGF 基因在半影區(qū)表達增加，導(dǎo)致在大腦中動脈閉塞后48 h 內(nèi)缺血區(qū)域的新血管生長［10］。Ryu 等［11］的實驗表明：血漿中的VEGF 在所有的卒中亞型（心源性卒中、大動脈粥樣硬化性卒中、其它原因引發(fā)的卒中、小動脈閉塞性卒中和原因不明的卒中）中均增加，并且在所有卒中亞型中，VEGF 的增加持續(xù)表達3個月。VEGF對缺血性腦卒中的整體影響是復(fù)雜的，這可能與缺血的強度，持續(xù)的時間和側(cè)支循環(huán)的建立有關(guān)。在缺血性腦血管疾病中，VEGF起到一種急性神經(jīng)保護作用，作用于新的神經(jīng)元的存活和新生血管的生長。這一點成為臨床上潛在的應(yīng)用點，我們可以通過多種機制，通過調(diào)節(jié)VEGF改善中風(fēng)后的組織并且產(chǎn)生有用的功能。

熱休克蛋白70 在各種大腦損傷后會產(chǎn)生，如缺血、缺氧、癲癇、外傷。內(nèi)源性熱休克蛋白70 在腦缺血后大約4～6h后表達和直到缺血后24h后缺血達高峰；與此相反，外源性缺血后21/4h 和3h 表達；有人假設(shè)在腦缺血的更早時間（如1～2h）給予重組熱休克蛋白70，可以提供保護作用［12］。局灶性腦缺血后，HSP70 主要在梗死區(qū)域內(nèi)的血管和小膠質(zhì)細胞中和在梗死區(qū)域以外的神經(jīng)膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元中表達［13］。因此，在神經(jīng)細胞中HSP70表達可以被看作一種定義半暗帶的蛋白質(zhì)變性的分子。

有研究發(fā)現(xiàn)在腦缺血中的梗死灶周圍的散在神經(jīng)膠質(zhì)中存在HSP70 染色夾雜物［14］。這些熱休克蛋白70染色的神經(jīng)膠質(zhì)夾雜物的形成可能依賴于腦缺血的嚴重程度和持續(xù)時間。在局部缺血后檢測到兩種有活性的小膠質(zhì)細胞：有活性的HSP70陽性的小膠質(zhì)細胞和有活性的HSP70 陰性的小膠質(zhì)細胞［14］。而后者帶有一種“極化的”和桿狀的結(jié)構(gòu)，可以促進梗死的形成，并代表有活性的小膠質(zhì)細胞在梗死灶中遷移。在一些有活性的小膠質(zhì)細胞中的HSP70 可能通過抑制炎癥轉(zhuǎn)錄因子和細胞核因子-κB而抑制炎癥。

2.3 腦缺血后HIF-1α表達意義 卒中后缺血性腦損傷是一個動態(tài)的過程，特別是在半影區(qū)，這個過程包括幾個事件如氧化應(yīng)激，細胞死亡，炎癥，以及激活內(nèi)源性的適應(yīng)性和再生機制。許多這些進程發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上的規(guī)例，涉及的協(xié)同激活各種轉(zhuǎn)錄因子，包括缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）。雖然HIF-1的作用在缺血半暗帶仍是未知，HIF-1 的活性和缺血半暗帶區(qū)域之間有很強的相關(guān)性。在大腦中腦動脈閉塞后引起的短暫的局灶性腦缺血小鼠模型中，使用紅外熒光標記的融合蛋白（POH-N）標記HIF 活躍的地區(qū)并成像［15］。結(jié)果表明，缺血性腦損傷后POH-N 標記的HIF 在體內(nèi)具有監(jiān)測作用和藥物輸送作用。

然而HIF-1 在缺血性腦病中的作用仍有爭議。一方面，HIF-1 調(diào)節(jié)促進細胞適應(yīng)低氧環(huán)境廣泛的基因的表達。它的目標包括基因編碼分子參與紅血球生成，細胞增殖及能量代謝。這些功能可能有助于腦缺血神經(jīng)元存活。神經(jīng)元特異性敲除HIF-1α增加了組織的損傷和降低大腦中動脈閉塞的小鼠的成活率［9］。另一方面，一些研究報道了在腦缺血中的HIF-1相反的作用。Helton 等的研究結(jié)果證明消除大腦中的HIF-1能改善成年大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的細胞凋亡［16］。黃原酸鹽通過抑制HIF-1α的表達以保護大腦的缺血損傷，抑制多余的血管內(nèi)皮生長因子的表達，以避免血腦屏障破壞和通過BNIP3途徑抑制神經(jīng)細胞凋亡［17］。HIF-1α的siRNA通過抑制HIF-1α，及其下游的血管內(nèi)皮生長因子和其它細胞凋亡相關(guān)蛋白如p53 和Caspase-3 在體內(nèi)可保護缺血-再灌注損傷的神經(jīng)元，并可能在治療早期缺血性腦卒中具有潛力［18］。臨床上有許多實驗證明，抑制HIF-1α及其下游基因可減少腦梗死的出血性轉(zhuǎn)換和改善局灶性腦缺血后神經(jīng)功能缺損?？傊?，在缺血性神經(jīng)細胞的結(jié)局中，HIF-1起著重要的作用。HIF-1參與細胞對缺血損害的反應(yīng)，具有雙刃劍效應(yīng)。這的種效應(yīng)可能取決于細胞損害的嚴重程度。了解這一機制有助于更好的理解其保護的積極作用和促進凋亡的消極作用，有助于引導(dǎo)我們?nèi)で笕绾螒?yīng)用其保護作用和減少其消極作用。

2.4 腦缺血后HIF-1α及其靶基因的表達的意義 VEGF的神經(jīng)血管保護作用：（1）血管內(nèi)皮生長因子的保護作用與抑制caspase-3活性有關(guān)，在外源性給予VEGF的治療中和體內(nèi)實驗中，均表明VEGF通過抑制細胞死亡途徑的執(zhí)行而起保護作用；（2）VEGF 可作用于神經(jīng)元微導(dǎo)管的內(nèi)容物，在神經(jīng)細胞的增長、穩(wěn)定和成熟中起著重要作用［19］，從而對大腦的修復(fù)和重生起著重要的作用；（3）VEGF誘導(dǎo)NO從血管內(nèi)皮細胞上釋放以及通過軸索的生成和提高神經(jīng)元的存活而直接起到神經(jīng)保護效應(yīng)［20］;（4）VEGF通過抑制谷氨酸和N-甲基-D-天門冬氨酸的毒性從而阻止海馬神經(jīng)元的死亡，以及通過刪除VEGF啟動子中的缺氧元反應(yīng)元件導(dǎo)致大鼠的運動神經(jīng)元的衰退［21］;（5）血管內(nèi)皮生長因子已被當(dāng)作一種促進神經(jīng)發(fā)生的因子應(yīng)用于成人大腦中，這種保護作用是其通過提供神經(jīng)前體增值和分化的血管微環(huán)境而達到的，也通過促進內(nèi)皮細胞釋放腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子而起作用，還作用于神經(jīng)前體的有絲分裂。

Hsp70 蛋白在大腦缺血后的神經(jīng)保護作用和以下幾點有關(guān)：（1）可能部分與蛋白質(zhì)的重折疊有關(guān),在這個過程中HSP70 通過下游的細胞色素c 和上游的casase-3而起抗凋亡作用,通過保存能量的作用，避免損害線粒體的新陳代謝;熱休克蛋白70 蛋白的N-末端部是必不可少的ATP-結(jié)合部，而C-末端的結(jié)合肽，是熱休克蛋白70的抗凋亡部分［22］；（2）HSP70可能通過結(jié)合細胞凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）和caspase-9的前體/抗惡性貧血因子（APAF），減少下游事件，而起保護作用［23］；（3）通過抑制蛋白質(zhì)聚集從而減少細胞的凋亡和壞死，以及通過阻止NF-kB的活化以及與NF-kB相互作用的下游炎癥因子的表達而減少炎癥［24］。

3 HIF-1α在腦出血中的表達和意義

腦出血后引起的腦缺血癥是可變的，往往是暫時的。在腦出血的血腫周圍有一過性的血流量減少。即使低灌注可能不足以引起缺血性損傷，但缺氧仍可引起HIF-1α的表達。腦出血早期，血腫周邊腦組織中HIF-1α蛋白表達的陽性率較低，此后逐漸增加。HIF-1α主要表達于神經(jīng)細胞胞核，胞質(zhì)中也有表達，其中胞核染色陽性的細胞多聚集在靠近血腫邊緣的壞死區(qū)及血管相對稀少的區(qū)域，一般認為距離功能血管100～200μm以外區(qū)域即處于缺血環(huán)境中。Jiang 等［25］報道，腦出血造模后4h HIF-1α蛋白水平開始升高，第3d達到高峰，到第7d 時低于第1d 的水平，且第3d 的高峰期可以被水蛭素阻斷。劉慶新等［26］研究高血壓腦出血后4h血腫周圍腦組織可見散在HIF-1α表達，24～48h 達到高峰，49～72hHIF-1α持續(xù)高表達。Zhu 等［27］發(fā)現(xiàn)，出血量＞60ml 的HIF-1α的表達，陽性率（88.9%）明顯高于那些與出血量介乎30～45ml 或45～60ml（P ＜0.05）。

綜上所述，HIF-1α的表達與出血的時間和出血的量密切相關(guān)。HIF-1α表達和血腫大小相關(guān)，這可能是血腫的占位效應(yīng)、血液活性物質(zhì)的釋放、再灌注“無復(fù)流現(xiàn)象”、腦血流自動調(diào)節(jié)障礙等有關(guān)。隨著出血時間的延長，血腫中的白細胞本身或刺激神經(jīng)細胞產(chǎn)生的白細胞介素、腫瘤壞死因子α等可通過核因子κB途徑上調(diào)HIF-1α的表達［28］和紅細胞裂解物也可使HIF-1α的表達增加。干擾素α也可使HIF-1α轉(zhuǎn)錄增加。然而，缺氧以外的其他因素也有可能導(dǎo)致腦出血后HIF-1α上調(diào)。例如，凝血酶能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的平滑肌細HIF-1α上調(diào)［29］。

4 HIF-1以及相關(guān)靶基因?qū)θ毖竽X水腫的影響

卒中后腦水腫具有逐漸增加的發(fā)病率和死亡率，成為臨床上關(guān)鍵問題。在腦缺血損傷后數(shù)小時內(nèi)，早期的病理反應(yīng)如血管通透性增加和腦水腫形成會被觸發(fā)。有研究表明，VEG 在因血腦屏障破環(huán)導(dǎo)致的不同形式的腦損害的早期階段，發(fā)揮了關(guān)鍵作用。在再灌注的大鼠大腦中動脈閉塞90min 后的大腦表面上，局部應(yīng)用VEGF，明顯減少梗死體積和水腫，以及降低了神經(jīng)元的損傷［30］。另一方面，在缺血早期（1h）內(nèi)全身使用VEGF，導(dǎo)致血腦屏障滲透性增加致急性腦水腫，同時增加了出血轉(zhuǎn)化的風(fēng)險［31］。局部組織VEGF 濃度精確地決定：新生血管是否發(fā)生，異常血管系統(tǒng)是否形成。這提示在正確的部位應(yīng)用適量的血管內(nèi)皮生長因子的重要性。全身的血管內(nèi)皮生長因子的應(yīng)用的有益效果，從另一方面來說是依賴于治療的時間點。已有的數(shù)據(jù)表明，在正確時間和適量地應(yīng)用VEGF 是至關(guān)重要的［32］。HIF-1α作為大腦的甘油濃度和腦水腫上游調(diào)節(jié)器，其分子途徑涉及水通道蛋白（AQP-4 和AQP-9）,可以設(shè)想藥理封鎖這條途徑可以為中風(fēng)患者提供腦水腫新的治療策略［32］。

5 HIF-1α與缺血性腦病的治療

維生素E 誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1α及其靶基因，包括血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和血紅素氧化酶-1的表達，從而減輕大腦缺血損害［33］。依達拉奉是一種新型的自由基清除劑，在臨床上用于急性腦梗塞患者。研究表明，依達拉奉通過抑制HIF-1α信號通路誘導(dǎo)大鼠腦缺血再灌注損傷后的腦室管膜下區(qū)神經(jīng)再生［34］。在動物實驗的大腦中動脈閉塞導(dǎo)致的腦缺血中，葛根素是一種有效的神經(jīng)保護劑。此效應(yīng)可能是介導(dǎo)的，至少部分通過抑制HIF-1α和TNF-α的激活［35］。高壓氧的預(yù)處理減少局灶性腦缺血后的腦損傷，這可能是通過上調(diào)HIF-1α及其靶基因EPO，從而減少神經(jīng)元的缺血損傷以及凋亡［36］。Anan M 等［37］在HIF-1α，HIF-2α和環(huán)氧合酶2裸DNA誘導(dǎo)的大鼠血管生成的間接旁路模型中，用HIF-1α的DNA處理的10天組織學(xué)切片顯示一個發(fā)達的側(cè)支循環(huán)（P ＜0.05）以及梗死體積減少和對照的DNA 處理比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）。這些結(jié)果說明了通過HIF-1 的途徑建立側(cè)支循環(huán)來治療腦缺血的一種新穎的方法的可能性，通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控的策略來間接的促進新生血管的形成，改善卒中后局灶的缺血病變。

6 結(jié)語

HIF-1 及其相關(guān)靶基因是重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在缺氧缺血性腦血管疾病中和缺血性腦病的治療中都扮演重要的角色。腦梗死或腦出血后病灶周圍的缺血缺氧反應(yīng)，誘導(dǎo)HIF-1 以及其相關(guān)靶基因的表達，從而直接或間接的起到保護作用，另一方面也產(chǎn)生一些負面作用?，F(xiàn)目前關(guān)于HIF-1 以及其相關(guān)靶基因的研究，仍處于動物實驗階段，這提示我們在以后的臨床試驗中如何避免它們的消極作用更好的應(yīng)用它們的積極作用是及其重要的。

［1］Schofield CJ，Ratcliffe PJ.Oxygen sensing by HIF hydroxylases［J］.Nat RevMoiCellBiol，2004，5（5）:333-354.

［2］P.J.Muchowski,J.L.Wacker.Modulation of neu-rodegeneration by molecular chaperones［J］.NatureReviews naturosicience,2005，6：11-22.

［3］Jolly C,Morimoto RI.Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death［J］.Natl Cancer Inst,2000,92:1564-1572.

［4］Pratt WB,Toft DO.Regulation of signaling protein function and traf-ficking by the HSP90/HSP70-based chaperone machinery［J］.Exp Biol Med（Maywood）,2003,228:111-133.

［5］Calvert JW,Cahill J,Yamaguchi-Okada M,et al.Oxygen treatment after experimental hypoxia-ischemia in neonatal rats alters the expression of HIF-1alpha and its downstream target genes［J］.Appl Physiol,2006,101:853-865.

［6］Li D,Marks JD,Schumacker PT,et al.Physiological hypoxia promotes survival of cultured cortical neurons［J］.Eur J Neurosci,2005,22:1319-1326.

［7］Bernaudin M,Nedelec AS,Divoux D,et al.Normobaric hypoxia induces tolerance to focal permanent cerebral ischemia inassociation with an increased expression of hypoxia-inducible factor-1 and its target genes,erythropoietin and VEGF,in the adult mouse brain［J］.Cereb Blood Flow Metab,2002,22:393-403.

［8］Pichiule P,Agani F,Chavez JC,et al.HIF-1 alpha and VEGF expression after transient global cerebral ischemia［J］.Adv Exp Med Biol,2003,530:611-617.

［9］Baranova O,Miranda LF,Pichiule P,et al.Neuronspecific inactivation of the hypoxia inducible factor 1alpha increases brain injury in a mouse model of transient focal cerebral ischemia［J］.Neurosci,2007,27:6320-6332.

［10］Marti HH,Bernaudin M,Bellail A,et al.Hypoxia-induced vascular endothelial growth factor expression precedes neovascularization after cerebral ischemia［J］.Am J Pathol,2000,156:965-976.

［11］Ryu Matsuo,Tetsuro Ago,Masahir Kamouchi,et al.Clinical significance of plasma VEGF value in ischemic stroke research for biomarkers in ischemic stroke（REBIOS）study［J］.Matsuoet al.BMC Neurology,2013,13:32.

［12］Zhan X,Ander BP,Liao IH,et al.Recombinant Fv-Hsp70 Protein Mediates Neuroprotection After Focal Cerebral Ischemia in Rats［J］.stroke,2010,41（3）:538-543.

［13］Kinouchi H,Sharp FR,Hill MP,et al.Induction of 70-kda heat shock protein and hsp70 mRNA following transient focal cerebral ischemia in the rat［J］.Cereb Blood Flow Metab,1993,13:105-115.

［14］Xinhua Zhan,Charles Kim,Frank R Sharp,et al.Very brief focal ischemia simulating transient ischemic attacks（TIAs）can injure brain and induce Hsp70 protein［J］.Brain Res,2008,1234:183-197.

［15］Fujita Y,Kuchimaru T,Kadonosono T,et al.In vivo imaging of brain ischemia using an oxygen-dependent degradativefusionprotein probe［J］.PLoS One,2012,7（10）:e48051.

［16］Helton R,Cui J,Scheel JR,et al.Brain-specific knock-out of hypoxia-inducible factor-1alpha reduces rather than increases hypoxic-ischemic damage［J］.Neurosci,2005,25:4099-4107.

［17］Chen C,Hu Q,Yan J,et al.Multiple effects of 2ME2 and D609 on the cortical expression of HIF-1alpha and apoptotic genes in a middle cerebral artery occlusion-induced focal ischemia rat model［J］.Neurochem,2007,102（6）:1831-1841.

［18］Chen C,Hu Q,Yan J,et al.Early inhibition of HIF-1alpha with small interfering RNA reduces ischemic-reperfused brain injury in rats［J］.Neurobiol Dis,2009,33（3）:509-517.

［19］Rosenstein JM,Krum JM.New roles for VEGF in nervous tissue-beyond blood vessels［J］.Exp Neurol,2004,187:246-253.

［20］Sondell M,Lundborg G,Kanje M.Vascular endothelial growth factor has neurotrophic activity and stimulates axonal outgrowth,enhancing cell survival and Schwann cell proliferation in the peripheral nervous system［J］.Neurosci,1999,19:5731-5740.

［21］Oosthuyse B,Moons L,Storkebaum E,et al.Deletion of the hypoxia-response element in the vascular endothelial growth factor promoter causes motor neuron degeneration［J］.Nat.Genetics,2001,28:131-138.

［22］Yenari MA,Liu J,Zheng Z,et al.Anti-apo-ptotic and antiinflammatory mechanisms of heat-shock protein pro-tection［J］.Ann N Y Acad Sci,2005,1053:74-83.

［23］Matsumori Y,Hong SM,Aoyama K,et al.Hsp70 over expression sequesters AIF and reduces neonatal hypoxic/ischemic brain injury［J］.Cereb Blood Flow Metab,2005,25:899-910.

［24］Zheng Z,Kim JY,Ma H,et al.Anti-inflammatory effects of the 70 kDa heat shock protein in experimental stroke［J］.Cereb Blood Flow Metab,2008,28:53-63.

［25］Jiang Y，Wu J，Keep RF，et al.Hypoxia-inducible factor-1alpha accumulation in the brain after experimental intracerebral hemorrhag［J］.Cereb Blood Flow Metab，2002，22（6）:689-696.

［26］劉慶新，陳金波，朱玉紅，等.缺氧誘導(dǎo)因子-1α在腦出血早期腦水腫形成中的作用［J］.國際腦血管病雜志，2008，16（3）:181-184.

［27］Zhu S,Tang Z,Guo S,et al.Experimental study on the expression of HIF-1alpha and its relationship to apoptosis in tissues around cerebral bleeding loci［J］.Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2004,24（4）:373-385.

［28］Jung YS，Isaacs JS，Lee S，et al.IL-1beta-mediated up-regulation of Hif-1alpha via an NF-Kappa B/COX-2 pathway identifies HIF-1 as a critical link between inflammation and oncogensis.［J］.FASEB J，2003，17（14）:2115-2117.

［29］Richard DE，Berra E，Pouyssegur J.Nonhypoxic pathway mediates the induction of hypoxia-inducible factor l alpha in vascular smooth muscle cells［J］.J Biol Chem，2000，275（35）:26765-26771.

［30］Zhang ZG,Zhang L,Jiang Q,et al.VEGF enhances angiogenesis and promotes blood-brain barrier leakage in the ischemic brain［J］.Clin Invest,2000,106:829-838.

［31］Ozawa CR,Banfi A,Glazer NL,et al.Microenvironmental VEGF concentration,not total dose,determines a threshold between normal and aberrant angiogenesis［J］.Clin Invest,2004,113:516-527.

［32］Higashida T,Peng C,Li J,et al.Hypoxia-inducible factor-1α contributes to brain edema after stroke by regulating aquaporins and glycerol distribution in brain［J］.Curr Neurovasc Res,2011 Feb,8（1）:44-51.

［33］Zhang B,Tanaka J,Yang L,et al.Protective effect of vitamin E against focal brain ischemia and neuronal death through induction of target genes of hypoxia-inducible factor-1［J］.Neuroscience,2004,126（2）:433-440.

［34］Zhang P,Li W,Li L,et al.Treatment with edaravone attenuates ischemic brain injury and inhibits neurogenesis in the subventricular zone of adult rats after focal cerebral ischemia and reperfusion injury［J］.Neuroscience,2012,201:297-306.

［35］Chang Y,Hsieh CY,Peng ZA,et al.Neuroprotective mechanisms of puerarin in middle cerebral artery occlusion-induced brain infarction in rats［J］.J Biomed Sci,2009,16:9.

［36］Zhang Q,Qian Z,Pan L,et al.Hypoxia-inducible factor 1 mediates the anti-apoptosis of berberine in neurons during hypoxia/ischemi［J］.Acta Physiol Hung,2012,99（3）:311-323.

［37］Anan M,Abe T,Shimotaka K,et al.Induction of collateral circulation by hypoxia-inducible factor 1alpha decreased cerebral infarction in the rat［J］.Neurol Res,2009,31（9）:917-922.