楊聰琴 張玲 陳娟
河南科技大學(xué)第五附屬醫(yī)院兒科,河南洛陽(yáng)471000
TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義
楊聰琴 張玲 陳娟
河南科技大學(xué)第五附屬醫(yī)院兒科,河南洛陽(yáng)471000
目的探討TNF-a(腫瘤壞死因子-a)和NO(一氧化氮)在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義。方法選擇2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒86例(觀察組),留取治療前后腦脊液標(biāo)本2 mL室溫下以2000r/min離心后,取上清液置-20℃冰箱保存。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定腦脊液中的TNF-a;通過(guò)比色法測(cè)定NO2/NO3值表示NO的濃度。與無(wú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的患兒40例(對(duì)照組)進(jìn)行比較。結(jié)果觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a(1.78±0.44)ug/L,明顯高于對(duì)照組的(0.910.±37)ug/L。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.8139,P<0.05),恢復(fù)期患兒腦脊液TNF-a水平(0.96±0.32)ug/L,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L,明顯高于對(duì)照組(7.24±2.31)mol/L,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.46,P<0.01)?;謴?fù)期患兒腦脊液中NO水平(9.7±3.8)mol/L與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平,明顯高于輕癥及對(duì)照組患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論檢測(cè)TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平,有助于臨床診斷和判斷病情的發(fā)展。
小兒病毒性腦炎;腦脊液;表達(dá);腫瘤壞死因子-a;一氧化氮
小兒病毒性腦炎是由各種病毒感染引起的急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病,是腦實(shí)質(zhì)的炎癥,近年來(lái)患病率較以往有明顯上升。病毒性腦炎患兒病情危急而嚴(yán)重,可能出現(xiàn)驚厥、昏迷、腦水腫等神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀,可并發(fā)心力衰竭、呼吸衰竭、肝腎功能損害等嚴(yán)重的并發(fā)癥。小兒重癥病毒性腦(severe viral encephalitis,SVE)病死率高,存活患兒常留有各種神經(jīng)系統(tǒng)的后遺癥[1-2],嚴(yán)重影響患兒及其家庭的生活質(zhì)量,應(yīng)盡早診斷,積極正確治療。因此,早期診斷,控制疾病進(jìn)展,減少后遺癥的發(fā)生是關(guān)鍵?,F(xiàn)回顧性分析我院2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒的臨床資料,研究患兒腦脊液中TNF-a和NO水平,旨在探討TNF-a(腫瘤壞死因子-a)和NO(一氧化氮)在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義,為臨床診斷、治療提供一定的參考信息。
1.1 一般資料
病毒性腦炎患兒86例(觀察組),全部病例均為急性或亞急性起病,腰穿檢查腦脊液符合病毒性腦炎的特點(diǎn),并攝胸片、PPD實(shí)驗(yàn)除外結(jié)核感染;做腦CT或MRI檢查排除顱內(nèi)占位性病變,寄生蟲(chóng)感染。頭顱CT,腦電圖檢查符合病毒性腦炎的臨床特點(diǎn)。腦炎組分為輕癥組和重癥組。輕癥組40例,男23例,女17例,年齡(5.4±1.1)歲。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異,常腦電圖異常,頭顱CT無(wú)異常。重癥組,其中男26例,女20例,年齡(5.6±1.1)歲,病程(12.6±3.0)d。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異常,部分患兒有高熱持續(xù)不退、頻繁抽搐或驚厥持續(xù)狀態(tài)、昏迷、癱瘓或出現(xiàn)不同程度的腦膜刺激征。其中昏迷(重度)22例,伴有昏迷(輕度)24例。入院后均給予止驚、鎮(zhèn)靜、降顱壓、抗感染、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)等綜合治療。對(duì)照組40例,男21例,女19例;年齡(5.5±1.0)歲?;颊甙l(fā)熱,嘔吐,頭疼,惡心,腦脊液檢查無(wú)病毒性腦炎的特點(diǎn),拍胸片,PPD實(shí)驗(yàn)除外結(jié)核感染,腦CT或MRI排除顱內(nèi)占位性病變,寄生蟲(chóng)感染?;純旱哪挲g、性別相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
所有患兒入院24 h內(nèi)取腦脊液做常規(guī)檢查的同時(shí),留取腦脊液標(biāo)本2 mL室溫下2000 r/min離心后,取上清液置-20℃冰箱保存,檢測(cè)腦脊液中TNF-a和NO的濃度。TNF-a檢測(cè)方法:用由海南華美公司提供的試劑盒,美國(guó)HyperionMR2III型酶標(biāo)儀作為檢測(cè)儀器,由專業(yè)人員用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行測(cè)量。NO檢測(cè)方法:通過(guò)比色法測(cè)定NO2/NO3值表示NO的濃度,試劑盒用美國(guó)CAYMAN,由專業(yè)人員嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。兩組患兒治療7 d后按上述方法復(fù)查腦脊液中TNF-a和NO的水平。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較見(jiàn)表1、2。
表1 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較(±s)
表1 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較(±s)
注:*P<0.05重癥組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中TNF-a水平比較,**P<0.01重癥組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于對(duì)照組患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
組別T N F -a(u g / L)N O(m o l / L)治療前治療后治療前治療后重癥組(n = 2 2)對(duì)照組(n = 4 0)t值1 . 7 8 ± 0 . 4 4*0 . 9 1 ± 0 . 3 7 2 . 9 3 3 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 8 ± 0 . 2 3 3 . 1 3 6 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4**7 . 2 4 ± 2 . 3 1 7 . 3 6 4 9 . 7 ± 3 . 8 6 . 1 5 ± 1 . 2 6 3 . 6 6 9
表2 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較(±s)
表2 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較(±s)
注:△P<0.05觀察組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中TNF-a水平比較,△△P<0.01觀察組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于輕癥組患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
組別T N F -a(u g / L)N O(m o l / L)治療前治療后治療前治療后重癥組(n = 2 2)輕癥組(n = 2 4)1 . 7 8 ± 0 . 4 4△1 . 3 5 ± 0 . 6 4 2 . 9 9 7 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 9 ± 0 . 2 6 0 . 6 8 1 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4△△1 8 . 7 2 ± 7 . 1 5 7 . 8 8 9 9 . 7 ± 3 . 8 7 . 2 6 ± 2 . 0 1 0 . 6 6 1
病毒性腦炎是由各種病毒入侵腦組織引起的急性炎癥反應(yīng),可引起相應(yīng)的細(xì)胞功能受損病刺激機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng),而細(xì)胞因子TNF-a和NO也參與了病毒與機(jī)體的反應(yīng)。TNF-a是一種由單核巨噬細(xì)胞分泌的具有廣泛生物活性的多肽調(diào)節(jié)因子,是體內(nèi)重要的炎癥因子,具有雙重作用[3]。由于各種病毒侵入腦組織引起急性炎性反應(yīng),會(huì)引起相應(yīng)的細(xì)胞功能受損并刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng),而細(xì)胞因子TNF-a也參與了病毒和機(jī)體的反應(yīng)[4]。當(dāng)病毒侵犯機(jī)體時(shí),可激活免疫系統(tǒng),產(chǎn)生各種細(xì)胞因子和體液因子,適量的TNF-a對(duì)機(jī)體抵抗疾病有益,而過(guò)量的TNF-a可使組織嚴(yán)重?fù)p傷,器官衰竭[5]。TNF-a可進(jìn)一步誘導(dǎo)IL-6、8、10等細(xì)胞因子的產(chǎn)生,參與體內(nèi)急性期反應(yīng),引起趨化肽等釋放、發(fā)熱,使內(nèi)皮細(xì)胞活化而導(dǎo)致血管通透性增加。Babu等[6]發(fā)現(xiàn)日本腦炎患者病死率隨腦脊液中TNF-a水平的增加而增加,腦脊液中高水平的TNF-a與致死性的預(yù)后有關(guān)。TNF-a可直接破壞血腦脊液屏障使其通透性增加,可直接刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱,作用于神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,使其表面表達(dá)更多的細(xì)胞因子及受體,加重神經(jīng)細(xì)胞損傷,從而引起炎性反應(yīng),感染性休克及惡病質(zhì)的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示,病毒性腦炎急性期血清TNF含量明顯高于對(duì)照組。說(shuō)明TNF-a水平與病毒感染程度密切相關(guān)。過(guò)多的TNF-a除引起局部癥狀外,還可引起全身癥狀。因此可以通過(guò)檢測(cè)TNF-a水平,有助于判斷病毒性腦炎患兒的病情和腦損傷程度,可作為早期診斷參考指標(biāo),并檢測(cè)病毒性腦炎的病程及可能死亡的病例,早期干預(yù),降低病死率。
內(nèi)源性NO是在一氧化氮合酶(NOS)催化下由L—精氨酶轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)-瓜氨酸和NO,由于NO半衰期短,所以體內(nèi)NO水平的高低完全依賴NOS。NOS在體內(nèi)至少有兩種存在形式即結(jié)構(gòu)型鈣依賴性NOS(cNOS)當(dāng)其受生理刺激后活化釋放少量NO,發(fā)揮生理調(diào)節(jié)作用;而另一種是誘導(dǎo)型鈣非依賴性NOS(iNOS),它廣泛分布在感染,炎癥條件下,內(nèi)毒素和某些細(xì)胞因子誘導(dǎo)下進(jìn)行釋放和轉(zhuǎn)錄,合成大量NO而且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng),引起細(xì)胞毒素的作用[7-8]。病毒性腦炎患兒,由于病毒對(duì)機(jī)體的入侵,可激活以單核巨噬細(xì)胞為代表的防御體系,被激活的巨噬細(xì)胞通過(guò)非依賴性一氧化氮酶(iNOS)產(chǎn)生高水平的NO,病毒性腦炎急性期腦脊液的NO含量明顯高于正常人,且隨著病情的恢復(fù),NO的含量較急性期明顯下降[9]。腦脊液中NO的增高雖可抑制病毒的復(fù)制,但過(guò)量的NO可導(dǎo)致腦組織的損傷。腦損傷嚴(yán)重時(shí),顱內(nèi)壓增高,NO含量可明顯增高,因此,NO參與病毒性腦炎的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,腦細(xì)胞損傷越嚴(yán)重,NO含量越高成正相關(guān)系。所以,通過(guò)檢測(cè)腦脊液中NO的變化,判斷分析病情發(fā)展,早期干預(yù),降低病死率。
本組資料結(jié)果顯示:觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a(1.78± 0.44)ug/L,明顯高于對(duì)照組的(0.910.±37)ug/L。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.8139,P<0.05),恢復(fù)期患兒腦脊液TNF-a水平(0.96±0.32)ug/L,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L,明顯高于對(duì)照組(7.24±2.31)mol/L,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.46,P<0.01)?;謴?fù)期患兒腦脊液中NO水平(9.7±3.8)mol/L與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平,明顯高于輕癥及對(duì)照組患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見(jiàn),檢測(cè)TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平,有助于臨床診斷和判斷病情的發(fā)展。
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R729
A
1672-5654(2014)11(a)-0183-02
2014-08-26)
楊聰琴(1969-),女,漢族,河南洛陽(yáng),醫(yī)學(xué)學(xué)士,副主任醫(yī)師,研究方向:兒科臨床。