胡錫林 楊湘越 王開宇 蘭小鵬

兩種儀器檢測自身免疫性甲減患者*血清促甲狀腺激素結(jié)果的比較評價(jià)

胡錫林①楊湘越②*王開宇②蘭小鵬②

目的：探討兩種免疫分析系統(tǒng)檢測自身免疫性甲狀腺功能減退(甲減)患者血清促甲狀腺激素(TSH)結(jié)果的一致性。方法：采用寶太BIOT-YG-I與羅氏E601免疫分析系統(tǒng)，檢測80例自身免疫性甲減患者和40例正常人血清的TSH水平，通過Kappa檢驗(yàn)分析兩種系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致程度，并利用線性回歸分析兩種系統(tǒng)定量檢測TSH的相對偏差。結(jié)果：兩種系統(tǒng)檢測TSH結(jié)果的符合率及一致性較高；兩系統(tǒng)間TSH定量測定結(jié)果直線相關(guān)性良好(r≥0.975)，在相應(yīng)醫(yī)學(xué)參考水平濃度測定結(jié)果的相對偏差均可被臨床接受。結(jié)論：兩種免疫分析系統(tǒng)檢測TSH的結(jié)果一致性較高。

熒光免疫分析系統(tǒng)；促甲狀腺激素；一致性

胡錫林,男,(1965- ),本科學(xué)歷，副主任技師。南京軍區(qū)鼓浪嶼療養(yǎng)院檢驗(yàn)科主任，研究方向：臨床檢驗(yàn)、免疫學(xué)。

[First-author’s address]Department of laboratory Medicine, Gulangyu Sanatorium of Nanjing Military Command, Xiamen361002, China.

甲狀腺功能減退(甲減)，是由于甲狀腺激素的合成、分泌或生物效應(yīng)不足而引起的一種綜合征，其特征是機(jī)體代謝率降低，嚴(yán)重者可形成黏液性水腫。臨床上引起甲減的原因很多，其中自身抗甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)和抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)陽性的橋本甲狀腺炎是亞臨床甲減的最常見病因，其次為甲狀腺腫，甲狀腺腺瘤較少見[1-2]。此外，促甲狀腺素受體抗體(TRAb)根據(jù)其功能不同分為兩類，其中甲狀腺阻斷性抗體(TBAb)可通過阻斷血清促甲狀腺激素(thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH)與受體的結(jié)合及TSH功能而引起甲減[3]。據(jù)報(bào)道，我國農(nóng)村地區(qū)男性甲減患病率為2.8%，女性為3.2%[4]。美國的一項(xiàng)研究顯示男性患病率為5.7%，女性為13%，且每年有2%～5%的亞臨床甲減患者進(jìn)展為臨床甲減[2,5-6]。因此，在甲減的診療過程中，血清TSH水平是十分重要的檢測指標(biāo)。

目前，TSH定量測定的傳統(tǒng)方法為放射免疫測定法和(或)免疫放射分析法，但均存在試劑有效期短、操作繁瑣、環(huán)境污染和放射危害等問題，而且檢測濃度范圍偏窄。近年來，國外相繼開發(fā)出化學(xué)發(fā)光免疫測定法、時間分辨免疫熒光法及電化學(xué)發(fā)光法等非放射標(biāo)記免疫測定技術(shù)的試劑盒，其優(yōu)點(diǎn)為靈敏度和操作自動化程度高、穩(wěn)定性好，無放射性輻射危害及環(huán)境污染，但其試劑和儀器價(jià)格昂貴，試劑封閉不通用，容易形成壟斷市場，給患者帶來很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，迫切需要開發(fā)出國產(chǎn)開放式試劑和儀器，配置低廉、通用的POCT診斷試劑，以滿足國內(nèi)各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床診斷的需求，而熒光免疫層析試劑正符合國內(nèi)市場需求。為驗(yàn)證該系統(tǒng)的可行性，按照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)系列文件，利用患者樣本進(jìn)行方法對比及偏差評估(批準(zhǔn)指南第2版(EP9-A2)文件)，對羅氏E601全自動電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)和廈門寶太公司免疫熒光分析儀I及其配套試劑盒，分別進(jìn)行血清TSH的檢測并對結(jié)果加以比較分析[7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1-12月在南京軍區(qū)福州總醫(yī)院確診的80例自身免疫性甲減患者納入本研究，其中男性41例，女性39例；年齡18～55歲。80例患者中原發(fā)性甲減51例，繼發(fā)性甲減26例，急性甲狀腺炎3例；所有患者標(biāo)本要求為未溶血、無嚴(yán)重脂濁、無黃疸及標(biāo)本量足夠的血清，均用羅氏檢測系統(tǒng)檢測TSH，檢測結(jié)果均符合甲減的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器試劑與檢測方法

羅氏公司E601型全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑；廈門寶太公司BIOT-YG-I型免疫熒光分析儀及配套試劑。

每份樣本均用兩種方法按照說明書要求進(jìn)行檢測，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每日選取8份臨床陽性甲減患者樣本，分別用兩種方法按順序(1→8)進(jìn)行樣本測定，再按相反順序(8→1)重復(fù)測定，連續(xù)測定5 d，共40例樣本，樣本的濃度均勻分布在線性范圍內(nèi)。

1.3 TSH檢測判定標(biāo)準(zhǔn)

寶太公司免疫熒光分析儀(寶太)和羅氏E601全自動電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)I及其配套試劑盒(羅氏)的TSH檢測判定標(biāo)準(zhǔn)(見表1)。

表1 兩種檢測系統(tǒng)TSH檢測判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4 兩種系統(tǒng)定量檢測TSH結(jié)果的偏倚評估

記錄測定結(jié)果(Xij和Yij)，計(jì)算每個樣本測定結(jié)果的均值(Xi和Yi)、樣本重復(fù)測定值間差值的絕對值(Dxi和Dyi)及兩種方法測定結(jié)果均值間的差值(Yi-Xi)。以Yi對Xi作散點(diǎn)圖計(jì)算線性回歸方程：Y=bX+a。以(Yi-Xi)對Xi作偏差圖。按EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群值檢查：計(jì)算樣本重復(fù)測定值間差值(Dxi和Dyi)的平均數(shù)。計(jì)算兩種方法測定結(jié)果均值間差值(Yi-Xi)的平均數(shù)。判斷：超出上述平均數(shù)4倍時，檢驗(yàn)結(jié)果視為無效。根據(jù)臨床使用要求，依據(jù)各個項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度X及允許偏倚(T＜20%)計(jì)算兩系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差即預(yù)期偏倚和相對偏倚[9-10]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析，TSH檢測對比結(jié)果的一致性使用Kappa檢驗(yàn)[8]。檢測結(jié)果一致性的程度分為6個區(qū)段：極強(qiáng)，Kappa系數(shù)0.81～1.0；高度，Kappa系數(shù)0.61～0.8；中度，Kappa系數(shù)0.41～0.6；弱，Kappa系數(shù)0.21～0.4；微弱，0～0.2；極差，Kappa系數(shù)＜0。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測系統(tǒng)的樣本檢測結(jié)果

采用廈門寶太公司免疫熒光分析儀(寶太)和羅氏E601全自動電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)I及其配套試劑盒(羅氏)，同時對80例甲減及正常人血清樣本TSH進(jìn)行檢測，其結(jié)果顯示兩種檢測系統(tǒng)具有極強(qiáng)的一致性(見表2)。

表2 兩種檢測系統(tǒng)檢測80例TSH的結(jié)果比較(例)

2.2 兩種檢測系統(tǒng)的樣本檢測符合率

廈門寶太公司免疫熒光分析儀和羅氏E601全自動電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)兩種檢測系統(tǒng)的樣本檢測陽性符合率、陰性符合率及總符合率分別為97.50%、97.50%及97.50%，95%置信區(qū)間下限均＞90%(見表3)。

表3 兩種檢測系統(tǒng)一致率的比較(%)

2.3 兩種檢測系統(tǒng)間TSH的直線相關(guān)與回歸分析

兩種檢測系統(tǒng)間TSH的直線相關(guān)性與回歸分析結(jié)果如圖1所示。

圖中顯示，兩種檢測系統(tǒng)間TSH的直線相關(guān)性良好，據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r2＝0.9815，P＜0.001)，見表4。

圖1 寶太與羅氏系統(tǒng)測試結(jié)果散點(diǎn)圖

表4 兩種檢測系統(tǒng)測試TSH直線相關(guān)與回歸分析

2.4 兩種檢測系統(tǒng)間的相對偏差

選擇TSH值為5 mIU/L及60 mIU/L作為醫(yī)學(xué)參考水平，在醫(yī)學(xué)參考水平[11-13]處使用公式1計(jì)算兩種檢測系統(tǒng)間的相對偏差即偏倚：

式中b為直線回歸方程的斜率，a為截距，X為醫(yī)學(xué)參考水平。

依據(jù)各個項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度X及允許偏倚(T＜20%)計(jì)算兩系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差即預(yù)期偏倚和相對偏倚[9-10](如圖2所示)。

圖2 寶太與羅氏系統(tǒng)偏倚分析散點(diǎn)圖

通常，相對偏差(即偏倚)＞20%被認(rèn)為將影響臨床上對疾病的診斷。兩系統(tǒng)間的預(yù)期偏倚和相對偏倚結(jié)果具有高度一致性(r2=0.9903，P＜0.001)，見表5。

表5 兩種檢測系統(tǒng)間的偏倚

3 討論

目前，實(shí)驗(yàn)室檢測在疾病診斷和治療等方面的作用越來越受到臨床的重視，隨著標(biāo)本數(shù)量的不斷增加，越來越多的臨床實(shí)驗(yàn)室采用兩套或多套檢測系統(tǒng)來檢測同一項(xiàng)目。在甲減的診療過程中，血清TSH水平是十分重要的指標(biāo)，但其在臨床不同檢測系統(tǒng)間存在較大的差異，其原因在于各廠家儀器檢測原理不同，采用的試劑來源不同等[14]。因此，使用不同免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行對比，以了解檢測結(jié)果的可比性和偏倚評估非常重要[15]。本研究顯示，寶太公司免疫熒光分析儀BIOT-YG-I及配套試劑與羅氏E601型電化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑相比，兩種系統(tǒng)在TSH水平的檢測上具有極強(qiáng)的一致性，陽性、陰性符合率及總符合率分別為97.50%、97.50%及95%置信區(qū)間下限均＞90%。分析兩種系統(tǒng)的TSH檢測值發(fā)現(xiàn)，在TSH濃度水平≥5 mIU/L時，相對偏差均在允許偏差之內(nèi)，可以被接受，但偏差較大，分析原因可能是兩種系統(tǒng)所采用分析方法不同及試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的來源不同，并且羅氏E601系統(tǒng)與寶太系統(tǒng)參考值范圍不一致，但就臨床診斷需求而言，此偏倚對甲減的輔助診斷影響甚微。

4 結(jié)論

本研究按照CLSI的 EP9-A2文件要求，對TSH在兩種全自動化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)(羅氏E601和寶太BIOTYG-I)的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比分析和偏倚評估。結(jié)果表明，由于使用了配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，TSH在兩種分析系統(tǒng)之間的檢驗(yàn)結(jié)果顯示良好的相關(guān)性，線性回歸方程良好，絕對相關(guān)系數(shù)r2均＞0.975。本研究結(jié)果顯示，以上兩種系統(tǒng)對TSH水平的檢測具有高度一致性。

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Comparison of serum TSH in patients with autoimmune hypothyroidism detected by BIOT- YG-I and Roche E601

/HU Xi-lin, YANG Xiang-yue, WANG Kai-yu, et al// China Medical Equipment,2014,11(12):7-10.

Objective:To compare the results of TSH serum samples in patients with autoimmune hypothyroidism detected by two different immune analyze systems BIOT-YG-I and Roche E601.Methods:TSH in serum samples from 80 patients with autoimmune hypothyroidism and 40 normal controls were quantified by BIOT-YG-I and Roche E601 systems. Kappa statistic was used to analyze the agreement between the results from two immune analyze systems. The relatively deviation at medical reference level of the quantitative results of TSH were further studied using linear regressive analysis.Results:The quantitative results from two immune analyze systems presents good accordance rate and the agreement as well as a significant linear correlation (r≥0.975). TSH quantitative results from two systems are both clinically acceptable at medical reference level.Conclusion:The consistency of two immune analyze systems is high for detecting TSH serum.

Fluorescence immune analyze system; Thyroid stimulating hormone; Consistency

1672-8270(2014)12-007-04

R581.9

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2014.12.003

2014-07-11

福建省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2013Y0075)“多種自身抗體快速聯(lián)合檢測試劑盒—(復(fù)合斑點(diǎn)膠體金法)的研發(fā)”

①南京軍區(qū)鼓浪嶼療養(yǎng)院檢驗(yàn)科 福建 廈門 361002

②南京軍區(qū)福州總醫(yī)院檢驗(yàn)科 福建 福州 350025

*通訊作者：yangxy3737@163.com