魏譚軍， 王 毅， 陳曉東

(1. 達州市中西醫(yī)結合醫(yī)院，四川 達州635000;2. 江西中醫(yī)藥大學藥學院，江西 南昌330004)

復方西羚解毒丸處方來源于衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十四冊，由淡竹葉、荊芥穗、牛蒡子(炒)、連翹、金銀花、桔梗、甘草、薄荷、淡豆豉、羚羊角、水牛角濃縮粉、冰片這十二味藥物組成［1］。原部頒標準未對方中的任何藥物進行定性鑒別或定量測定，不能有效地保證產品的質量和療效，本實驗采用高效液相梯度洗脫法對淡竹葉中的葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和荊芥穗中的胡薄荷酮進行定量測定方法研究，為完善該制劑質量標準提供依據(jù)。

1 試藥與儀器

Agilent 1200 高效液相色譜儀;G1322A 脫氣機、G1329A 自動進樣器、G1311A 四元泵、Chemstation 色譜工作站;G1315B 可變波長檢測器;牡荊苷對照品(111687-200602，純度100.0%，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h 以上使用)、葒草苷對照品(111777-201302，純度97.9%，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h 以上使用)、胡薄荷酮對照品(111706-201205，純度99.8%)均購于中國食品藥品檢定研究院;異葒草苷對照品(4261-42-1，純度98.0%)購于成都行標生物技術有限公司;復方西羚解毒丸(6 g/丸，批號分別為131017、131019、131021)購于山東健民藥業(yè)有限公司;冰醋酸(分析純，廣州化學試劑二廠);甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 依利特Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);體積流量1.2 mL/min;以甲醇(A)-0.1%冰醋酸溶液(B)為流動相［2］，梯度洗脫 (0 ～9 min，60.0% A;9 ～29 min，60.0%→75.0%A;29 ～48 min，75.0%A);檢測波長340 nm［3-5］(0 ～29 min)、252 nm［6-12］(29 ～48 min)。此系統(tǒng)條件下所測組分與其他組分分離效果良好，理論塔板數(shù)按牡荊苷計不得低于3 000，分離度均大于2。

2.2 樣品制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 取葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮對照品各適量，精密稱定，加70%甲醇制成混合對照品溶液(葒草苷為0.032 8 mg/mL，異葒草苷為0.026 2 mg/mL，牡荊苷為0.020 6 mg/mL，胡薄荷酮為0.037 0 mg/mL)。

2.2.2 供試品溶液的配制 取本品適量，剪碎，取約10.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(300 W，40 kHz)35 min，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照試驗 按復方西羚解毒丸處方比例稱取除淡竹葉和荊芥穗的其余藥味各一份，按復方西羚解毒丸的生產工藝分別制成淡竹葉空白樣品和荊芥穗空白樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成淡竹葉空白溶液和荊芥穗空白溶液。分別精密吸取10 μL 的供試品溶液、混合對照品溶液、淡竹葉空白溶液和荊芥穗空白溶液，按上述色譜條件測定，結果在與葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮對照品色譜圖相應的保留時間處，供試品溶液色譜圖中有吸收峰，而陰性對照色譜圖中未顯吸收峰，色譜圖見圖1。

圖1 葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮的液相色譜圖Fig.1 Chromatograms of orientin，luteolin-6-c-glucoside，vitexin and pulegone

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別置于10 mL 量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取稀釋后的上述溶液和混合對照品溶液各20 μL，注入色譜儀中，按“2.1”項下所述色譜條件進行測定，以峰面積Y 與進樣量X，得回歸方程，葒草苷為Y=2.249 1 ×106X+768.3，r=0.999 6;異葒草苷、牡荊苷為Y = 2.457 4 × 106X - 698.9，r =0.999 7;胡薄荷酮為Y =1.835 2 ×106X +301.5，r=0.999 2。葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮分別在0.032 8 ～0.656 0 μg、0.026 2 ～0.524 0 μg、0.020 6 ～0.412 0 μg、0.037 0 ～0.740 0 μg范圍內進樣量與峰面積線性關系良好。

2.3.2 精密度試驗 取“2.2.1”項下的混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6 次，測定，記錄葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮的峰面積，RSD 分別為0.8% (葒草苷)、0.7%(異葒草苷)、0.9% (牡荊苷)和0.4% (胡薄荷酮)。結果表明，儀器具有良好精密度。

2.3.3 重復性試驗 稱取同一批樣品6 份，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備6 份供試品溶液，依法進樣測定，計算，求得各組分RSD分別為0.7% (葒草苷)、0.5% (異葒草苷)、0.9% (牡荊苷)和0.6% (胡薄荷酮)。結果表明，本法測定重復性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h 后，每次進樣10 μL，測定其峰面積值，求得各組分RSD 分別為0.7% (葒草苷)、0.8% (異葒草苷)、0.9%(牡荊苷)和0.7% (胡薄荷酮)。結果表明，供試品溶液24 h 內基本穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗 取已知含有量的同一批復方西羚解毒丸(批號131017;葒草苷為0.163 mg/g，異葒草苷為 0.132 mg/g，牡荊苷為0.104 mg/g，胡薄荷酮為0.185 mg/g)適量，剪碎，取約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入混合對照品溶液25 mL、70%甲醇25 mL，按“2.2.2”項下供試品溶液的配制方法制備加樣供試品試液。按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算各組分回收率，結果見表1。

表1 葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮回收率Tab.1 Results of recovery tests for orientin，luteolin-6-cglucoside，vitexin and pulegone

2.4 樣品測定 取3 個批號的樣品，按“2.2.2”項下供試品制備方法，按“2.1”項下色譜條件測定本品中葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮量，結果見表2。

表2 樣品測定結果(±s，n=3)Tab.2 Results of content determination of the samples (±s，n=3)

表2 樣品測定結果(±s，n=3)Tab.2 Results of content determination of the samples (±s，n=3)

批 號 葒草苷/(mg/丸) 異葒草苷/(mg/丸) 牡荊苷/(mg/丸) 胡薄荷酮/(mg/丸)1.11 ±0.01 131019 0.926 ±0.008 0.815 ±0.008 0.656 ±0.005 1.28 ±0.01 131021 0.950 ±0.004 0.834 ±0.007 0.662 ±0.007 131017 0.978 ±0.007 0.792 ±0.005 0.624 ±0.004 1.35 ±0.01

3 討論

3.1 供試品溶液提取方法的選擇 曾考察了超聲(300 W，40 kHz)提取20 min、35 min、50 min 和加熱回流2 h 四種制備方法，結果超聲提取20 min所得樣品中成分含有量較低，超聲提取35 min、50 min和加熱回流2 h 所得樣品中成分含有量基本一致，考慮到檢驗過程的簡便性和快捷性，選用超聲提取35 min 作為供試品溶液制備的最佳提取時間。

3.2 檢測波長的選擇 取一定質量濃度的葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和胡薄荷酮對照品溶液置紫外分光光度計下掃描，結果葒草苷、異葒草苷和牡荊苷在340 nm 有最大吸收，胡薄荷酮在252 nm 有最大吸收，為兼顧4 種成分在同一色譜圖上均有最大吸收，因此選用波長切換法進行檢測。

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