李石磊，劉君昂，趙 瑩，路宗巖

（中南林業(yè)科技大學(xué) 經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)試驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙410004）

6種殺菌劑對(duì)油茶主要病害的室內(nèi)毒力測(cè)定

李石磊，劉君昂，趙 瑩，路宗巖

（中南林業(yè)科技大學(xué) 經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)試驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙410004）

油茶為我國(guó)南方主要的油料作物，近年來(lái)油茶病害發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，而且由于油茶病害發(fā)病時(shí)期不同以及各種病原菌抗病性的不同，無(wú)形中增加了殺菌劑的噴灑次數(shù)，并浪費(fèi)了大量的人力物力，因此有必要從市面常見的殺菌劑中篩選出一種高效廣譜的殺菌劑來(lái)更好的防治油茶病害。本文通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法來(lái)測(cè)定所選擇的6種殺菌劑對(duì)3種油茶病害的室內(nèi)毒力效果，結(jié)果顯示苯甲咪鮮胺對(duì)3種病原菌的抑制效果最好，對(duì)3種病原菌的EC50分別為炭疽病菌1.86 mg/L、葉枯病菌1.98 mg/L、軟腐病菌0.41 mg/L，EC50值均為6種殺菌劑最低。課題的研究可能為防治油茶病害提供了用藥參考，具有潛在的參考價(jià)值。

油茶；殺菌劑；室內(nèi)毒力測(cè)定；EC50

油茶Camellia oleifera是世界上四大木本食用油料樹種之一，也是我國(guó)特有的油料樹種[1]。其種子提取的茶油是優(yōu)質(zhì)的保健食用油，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值高、用途廣泛、適應(yīng)性強(qiáng)，綜合開發(fā)利用潛力大[2]。近年來(lái)由于油茶林管理粗放，導(dǎo)致病害嚴(yán)重發(fā)生，主要的病害有炭疽病、葉枯病、軟腐病等[3-4]。

油茶炭疽病是油茶樹的主要病害,在南方各省的大面積油茶栽培區(qū)發(fā)生普遍，引起嚴(yán)重落果、落蕾、枝梢枯死,甚至整株衰亡,造成重大經(jīng)濟(jì)損失。各省每年因該病造成油茶籽實(shí)減產(chǎn)10%～30%,重病區(qū)40%～50%,在典型林分,病落蕾占落蕾總數(shù)的26%～45%[5-6]。經(jīng)研究表明油茶炭疽病病原菌為焦孢炭疽菌。

近年來(lái)，油茶葉枯病發(fā)病嚴(yán)重，導(dǎo)致果實(shí)和葉片脫落，使油茶的生長(zhǎng)受到了嚴(yán)重的影響，并導(dǎo)致了油茶產(chǎn)量的下降，進(jìn)而給當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)效益與生態(tài)效益帶來(lái)了嚴(yán)重的損失。油茶葉枯病主要危害油茶葉、芽和果實(shí)，一般病株率為30%～50%，病害嚴(yán)重的達(dá)到90%以上；果實(shí)的發(fā)病率為25%，病害嚴(yán)重的達(dá)到40%[7-8]。李河等通過(guò)ITS序列測(cè)定確定油茶葉枯病病原菌為擬盤多毛胞菌屬，且與小孢擬盤多毛孢菌親緣關(guān)系最近[9]。

油茶軟腐病是我國(guó)油茶產(chǎn)區(qū)的重要病害，危害苗木、幼林和成林的葉、果，引起大量落葉落果，感病葉片最初在葉尖、葉緣或葉中部出現(xiàn)水漬狀黃色斑點(diǎn)，后擴(kuò)大為黃褐色或黑褐色圓形或半圓形病斑，后期病斑上長(zhǎng)出多數(shù)近白色或淡黃色小顆粒，呈蘑菇狀，稱為蘑菇菌體，感病果實(shí)病斑形態(tài)同病葉，但色澤較淺，病部組織腐爛，干后常開裂[10-11]。經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所副研究員劉錫珊鑒定,確定油茶軟腐病病原菌是半知菌叢梗抱月暗叢梗抱菌類一個(gè)前人未記述的新種,命名為油茶傘座抱菌并以該種為模式種建立一個(gè)新屬，傘座孢屬[12]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

油茶炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides，油茶葉枯病菌Pestalotiopsis microspora，油茶軟腐病菌Agaricodochium camellia，由中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室菌種保藏中心保藏。

1.1.2 供試殺菌劑

50%多菌靈可濕性粉劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、72%鏈霉素可濕性粉劑、80%嘧霉異菌脲可濕性粉劑、70%苯甲咪鮮胺可濕性粉劑

1.1.3 供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基，含殺菌劑PDA培養(yǎng)基

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含殺菌劑PDA的配制以及病原菌的接種

首先用無(wú)菌水配制6種殺菌劑的母液，向滅菌后的PDA培養(yǎng)基中用移液槍加入已配制好的殺菌劑母液，通過(guò)加入量的多少控制培養(yǎng)基中殺菌劑的濃度，使每種殺菌劑都有5個(gè)濃度梯度。配制好含藥培養(yǎng)基倒平板待冷卻后倒置一天，為接菌種做準(zhǔn)備。用6 mm的打孔器在已經(jīng)培養(yǎng)好的病原菌培養(yǎng)基上打取菌絲塊接種于放置一天的培養(yǎng)基上，使菌絲面向上。將接種后的培養(yǎng)平板置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，倒置4 d，每種病原菌做3個(gè)空白對(duì)照，于相同的環(huán)境下培養(yǎng)[13-15]。

1.2.2 不同殺菌劑對(duì)油茶3種病害的室內(nèi)毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[16-18]：培養(yǎng)4 d后采用十字測(cè)量法測(cè)量不同處理的菌落直徑（單位mm），并計(jì)算抑菌率：

抑菌率(%)=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-6）×100%。

毒力回歸方程的建立：計(jì)算出不同濃度下殺菌劑的抑菌率，并將抑菌率根據(jù)生物統(tǒng)計(jì)機(jī)率值換算表?yè)Q算為機(jī)率值，以殺菌劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率機(jī)率值為縱坐標(biāo)在Excel中做XY散點(diǎn)圖，并添加趨勢(shì)圖，得出毒力回歸方程以及r，并計(jì)算出抑菌中濃度EC50（mg/L）[19]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對(duì)炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

從6種殺菌劑對(duì)油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果可以看出，6種殺菌劑對(duì)炭疽病菌的抑制效果差別很大，對(duì)炭疽病菌的EC50分別為：多菌靈1.86 mg/L、代森錳鋅260.74 mg/L、百菌清1 416.15 mg/L、鏈霉素200.31 mg/L、嘧霉異菌脲72.76 mg/L、苯甲咪鮮胺1.86 mg/L，大小排列順序?yàn)榘倬澹敬i鋅＞鏈霉素＞嘧霉異菌脲＞多菌靈=苯甲咪鮮胺。效果最好的殺菌劑為苯甲咪酰胺和多菌靈。

表1 不同殺菌劑對(duì)炭疽病菌的室內(nèi)毒力回歸方程Table 1 Indoor toxicity regression equations of different Fungicides against Colletotrichum gloeosporioides of the Camellia oleifera

2.2 不同殺菌劑對(duì)油茶葉枯病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

根據(jù)6種殺菌劑對(duì)油茶葉枯病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果可以得出，所選的6種殺菌劑對(duì)葉枯病菌的抑菌效果差別較大，各殺菌劑對(duì)葉枯病菌的EC50分別為：多菌靈429.26 mg/L、代森錳鋅33.95 mg/L、百菌清931.80 mg/L、鏈霉素2 305.10 mg/L、嘧霉異菌脲112.66 mg/L、苯甲咪鮮胺1.98 mg/L，大小順序依次為鏈霉素＞百菌清＞多菌靈＞嘧霉異菌脲＞代森錳鋅＞苯甲咪鮮胺。其中對(duì)油茶葉枯病菌抑制作用最好的殺菌劑為苯甲咪酰胺。

2.3 不同殺菌劑對(duì)油茶軟腐病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

6種殺菌劑對(duì)油茶軟腐病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果顯示，6種殺菌劑對(duì)油茶軟腐病菌的EC50相差較大，其中多菌靈為1.92 mg/L、代森錳鋅為241.31 mg/L、百菌清為1291.42 mg/L、鏈霉素為798.58 mg/L、嘧霉異菌脲為142.41 mg/L、苯甲咪鮮胺為。41.00 mg/L，對(duì)軟腐病菌的EC50大小順序依次為：百菌清＞鏈霉素＞代森錳鋅＞嘧霉異菌脲＞多菌靈＞苯甲咪鮮胺。對(duì)軟腐病菌抑制效果最好的殺菌劑為苯甲咪酰胺。

表2 不同殺菌劑對(duì)油茶葉枯病菌室內(nèi)毒力回歸方程Table 2 Indoor toxicity regression equations of different fungicides against Pestalotiopsis microspora of Camellia oleifera

表3 不同殺菌劑對(duì)油茶軟腐病菌室內(nèi)毒力回歸方程Table 3 Indoor toxicity regression equations of different fungicides against Agaricodochium camellia of Camellia oleifera

3 結(jié)論與討論

根據(jù)以上6種殺菌劑對(duì)3種油茶主要病害病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果分析，多菌靈對(duì)3種病原菌的EC50分別為：炭疽病菌1.86 mg/L、葉枯病菌429.26 mg/L、軟腐病菌1.92 mg/L，差別較大。代森錳鋅對(duì)3種病害病原菌的EC50分別為：炭疽病菌260.73 mg/L、葉枯病菌33.95 mg/L、軟腐病菌232.63 mg/L。百菌清對(duì)3種病原菌的EC50分別為炭疽病菌1 416.45 mg/L、葉枯病菌931.80 mg/L、軟腐病菌1291.42 mg/L，所需的殺菌劑濃度較高。鏈霉素對(duì)3種病原菌的EC50分別為：炭疽病菌200.31 mg/L、葉枯病菌2 305.11 mg/L、軟腐病菌798.58 mg/L，相差較大且濃度高。嘧霉異菌脲對(duì)3種病原菌的EC50分別為炭疽病菌72.76 mg/L、葉枯病菌112.66 mg/L、軟腐病菌142.41 mg/L，相差不大且所需濃度較低，效果較好。苯甲咪鮮胺對(duì)3種病原菌的EC50分別為:炭疽病菌1.86 mg/L、葉枯病菌1.97 mg/L、軟腐病菌0.41 mg/L，該殺菌劑對(duì)3種病原菌都有很好的防治作用，是一種很好的廣譜性殺菌劑。

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Indoor toxicity determination of six fungicides on main diseases of Camellia oleifera

LI Shi-lei, LIU Jun-ang, ZHAO Ying, LU Zong-yan
(Key Laboraratory for Economic Forest Cultivation of Education Ministry, Central South University of Forestry & Technology,Changsha 410004, Hunan, China)

Camellia oleifera as the major oil-bearing crops in South China has important economic values. However, the diseases occurred in Camellia oleifera has been more and more serious. Due to the different disease-oncoming periods and pathogenic bacteria abilities to resist bactericides, the times to spray bactericides have to increase to control the diseases, which not only was laborconsuming but also increased the costs. It is necessary for us to obtain a kind of most effective and broad-spectrum bactericide to improve the efficacies of controlling pathogenic bacteria. A test to determine the six common bactericides’ indoor toxicity effects to three diseases of C. oleifera was performed. The method of mycelial growth rate was used to test the different effectiveness of the six bactericides of controlling pathogenic bacteria. The results show that benzoyl prochloraz was the most potent microbicide to inhibit the three pathogenic bacteria; The three EC50of benzoyl prochloraz to Colletotrichum gloeosporioides, Pestalotiopsis microspora,Agaricodochium camellia were 1.86 mg/L, 1.98 mg/L, 0.41 mg/L respectively, the mean of all three EC50was equal to the lowest of the 6 microbicides. The findings may provide a reference to the control of pathogenic bacteria in practice.

Camellia oleiera diseases; microbicides; indoor toxicity measurement; concentration for 50% of maximal effect (EC50)

S794.4；S763.306

A

1673-923X(2013)09-0060-03

2012-10-16

國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)項(xiàng)目（2011-05）

李石磊（1986-），男，山東嘉祥人，碩士研究生，主要從事油茶病蟲害方面的研究

劉君昂（1963-），男，湖北鐘祥人，教授，博士，主要從事油茶病蟲害方面的研究

[本文編校：吳 毅]