朱愛華 楊鈞 張藝芳 秦永剛 周新民 何愛武
陜西中藥研究所(咸陽712000)
五加參沖劑是在繼承祖國傳統(tǒng)養(yǎng)生理論的基礎(chǔ)上,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究成果,選用陜西地產(chǎn)五加—倒卵葉五加莖為主要原料,配以麥冬、五味子研制而成的具有抗疲勞作用的保健功能食品。該產(chǎn)品可明顯地延長小鼠游泳時間,降低血清尿素氮、乳酸含量,提高肝糖原含量,消除疲勞狀態(tài),具有明顯地抗疲勞作用。本研究是在五加參沖劑的經(jīng)口急性毒性、30d喂養(yǎng)試驗(yàn)毒性、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用小鼠精子畸形試驗(yàn)、傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)的方法,進(jìn)一步研究五加參沖劑的毒理學(xué)安全性。
1 材 料 1.1 樣 品 五加參沖劑(浸膏粉)內(nèi)容物呈棕色細(xì)粉狀,1g浸膏粉相當(dāng)于成品3g,由陜西利威爾制藥有限公司提供。用蒸餾水配制各劑量濃度。人體推薦成品最大用量14g/人/d。
1.2 試驗(yàn)動物 SD 大鼠和昆明種小鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號:SCXK(陜)2007-001。
2 方 法[1]2.1 小鼠精子畸形試驗(yàn) 將雄性小鼠分為5組,每組5 只小鼠。即五加參沖劑(浸膏粉)4.0g/kg、8.0g/kg和16.0g/kg3個劑量組,另設(shè)陰性對照組(蒸餾水)和陽性對照組(絲裂霉素C1.5mg/kg)共5組,連續(xù)5d分別灌胃給予受試物。按照衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范小鼠精子畸形試驗(yàn)試驗(yàn)方法,在末次灌胃后30d,處死小鼠,取其副睪放入生理鹽水中剪碎、過濾,然后用濾液涂片、染色、鏡檢,計(jì)數(shù)精子畸形數(shù),并計(jì)算精子畸形發(fā)生率(‰),結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(χ2檢驗(yàn))。
2.2 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 將五加參沖劑(浸膏粉)設(shè)計(jì)為2.75g/kg、5.50g/kg和11.0g/kg3個劑量組,另設(shè)溶劑對照組(蒸餾水),每組15只孕鼠(按查得陰栓計(jì)),按照衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范致畸試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。于孕第7~16d灌胃給予受試物,每天1次,第20d解剖取胎鼠,進(jìn)行外觀檢查后分別進(jìn)行胎鼠骨骼、內(nèi)臟前處理,再觀察與統(tǒng)計(jì)。
3 結(jié) 果 3.1小鼠精子畸形試驗(yàn) 各劑量組與溶劑對照組精子畸形率間差異無顯著性(P ﹥0.05);陽性對照組與溶劑對照組精子畸形率間差異有高度顯著性(P<0.01)。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示五加參沖劑(浸膏粉)在4.0g/kg~16.0g/kg劑量范圍內(nèi)對小鼠生殖細(xì)胞未見損害作用。
3.2 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)(大鼠) 3.2.1對孕鼠體重的影響:
表1 五加參沖劑(浸膏粉)精子畸形試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)(±s)
表1 五加參沖劑(浸膏粉)精子畸形試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)(±s)
注:卡方檢驗(yàn);與溶劑對照組比較△P<0.05,▲P<0.01
組 別(g/kg)n精子計(jì)數(shù)畸形精子數(shù)精子畸形率(%)4.0 5 1000×5 18.6±3.85 1.86五加參沖劑8.0 5 1000×5 20.2±6.69 2.02五加參沖劑16.00 5 1000×5 22.4±4.67 2.24陰性對照-5 1000×5 19.0±3.81 1.90絲裂霉素C陽性對照1.5mg 5 1000×5 116.0±20.0▲ 11.60五加參沖劑▲
表2 五加參沖劑(浸膏粉)對孕鼠體重的影響(g)(±s)
表2 五加參沖劑(浸膏粉)對孕鼠體重的影響(g)(±s)
注:組間進(jìn)行t檢驗(yàn),與溶劑對照組比較△P<0.05,▲P<0.01
組 別劑量(g/kg)孕鼠數(shù)(n)妊娠天數(shù)(d)0 7 12 16 20總增重(g).82 314±38.51 95.4±34.20五加參沖劑 5.50 13 196±7.37 227±10.52 227±10.52 279±12.03 305±13.00 109.2±16.71五加參沖劑 11.0 12 219±19.99 247±14.86 262±15.42 292±29.63 310±25.23 90.8±28.73溶劑對照- 12 215±20.66 242±17.20 260±17.55 283±18.54 五加參沖劑 2.75 13 242±25.29 254±34.55 254±34.55 282±36 310±22.21 94.5±19.81
表2中,各實(shí)驗(yàn)組孕鼠總增重與對照組孕鼠總增重值比較,經(jīng)t檢驗(yàn),結(jié)果t值均小于2.074,其差異均無顯著性(P ﹥0.05)。
3.2.2 對胎鼠的影響:
表3 五加參沖劑(浸膏粉)對大鼠胎鼠的影響(±s)
表3 五加參沖劑(浸膏粉)對大鼠胎鼠的影響(±s)
注:組間進(jìn)行t檢驗(yàn),與溶劑對照組比較△P<0.05,▲P<0.01
組別劑量(g/kg)受精鼠(n)受孕鼠(n)胎鼠數(shù)(n)平均胎仔數(shù)(n)胎仔平均重(g)吸收胎(n)死胎數(shù)(n)2.75 16 13 140 10.8±2.42 4.11±0.475 6 0五加參沖劑5.50 16 13 140 10.8±1.88 4.09±0.375 4 0五加參沖劑11.00 16 13 136 11.3±1.37 4.05±0.527 3 0溶劑對照五加參沖劑-16 13 136 11.4±2.75 4.04±0.472 6 0
表4 五加參沖劑(浸膏粉)對胎鼠骨骼的影響
表5 五加參沖劑(浸膏粉)對胎鼠內(nèi)臟的影響
從表2~5可見,各劑量組胎鼠一般狀況、骨骼及內(nèi)臟檢查與溶劑對照組比較均無明顯異常變化。
試驗(yàn)期各劑量組孕鼠均未見中毒表現(xiàn)。
3 討 論 五加參沖劑是由倒卵葉五加、麥冬、五味子組成的復(fù)方制劑,急性毒性試驗(yàn)、大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及Ames試驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)毒性作用[2],本次小鼠精子畸形試驗(yàn)為陰性結(jié)果,大鼠致畸試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)致畸作用,說明五加參沖劑對實(shí)驗(yàn)動物的各項(xiàng)毒理學(xué)指標(biāo)均未產(chǎn)生毒理作用,根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》[3],五加參沖劑符合食用要求,安全無毒。
[1] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范[S].北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,2003:177-224.
[2] 朱愛華,張藝芳,楊 鈞,等.五加參沖劑毒理學(xué)安全性評價試驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2013,34(4):489.
[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品安全性毒理學(xué)評價程序及評價方法[S].北京,中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.1-21-2003.