聶 健，詹素瓊，梁 歌，李金良，袁定勝，李旭廷

（四川省畜牧科學(xué)研究院獸藥研究所，四川 成都 610066）

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 6周齡昆明小鼠80只，體重19~21g，雌性，購自成都某生物科技有限公司。

1.1.2 藥品 注射用環(huán)磷酰胺（Cy），規(guī)格：0.2g/支，通化某制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100101；玉屏風(fēng)口服液，規(guī)格：10 mL/支，廣州某藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100302；黃芪多糖提取物，規(guī)格：95.5%黃芪多糖，由四川某動(dòng)物藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。

當(dāng)歸補(bǔ)血湯制備：黃芪75g、當(dāng)歸15g，采用傳統(tǒng)水煎法制備：蒸餾水預(yù)先浸泡1h，加熱煎煮2次，第一次保持微沸30min，濾出藥液；藥渣加溫水再煮沸，仍保持微沸30min，濾出藥液；合并2次濾液，小火濃縮至生藥含量為1g/mL。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)小鼠的分組與處理 80只小鼠空腹稱重，隨機(jī)分為8組，每組10只。第1至4組為正常組，即第1組不作任何處理，作為空白對(duì)照組，第2至4組分別給予黃芪多糖（2組）、當(dāng)歸補(bǔ)血湯（3組）和玉屏風(fēng)（4組）；第5至8組為免疫抑制組，即第5組只注射Cy不給予藥物，作為環(huán)磷酰胺對(duì)照組，第6至8組在注射Cy的同時(shí)分別給予黃芪多糖（6組）、當(dāng)歸補(bǔ)血湯（7組）和玉屏風(fēng)（8組）進(jìn)行處理。從試驗(yàn)的第1d起，第6至8組小鼠以75mg/kg的劑量腹腔注射Cy，隔日一次，連續(xù)注射3次；第1至4組同時(shí)注射等量生理鹽水。然后對(duì)小鼠灌胃給藥，0.5mL/只，對(duì)照組給予等量的蒸餾水，連續(xù)10d。

1.2.2 樣品的采集與檢測 各組小鼠均于試驗(yàn)的第11 d以頸部脫臼處死，快速采血，肝素抗凝，檢測血常規(guī)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、平均血紅蛋白含量（HGB）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）。取脾臟和肝臟，觀察病理變化，計(jì)算肝、脾指數(shù)。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行分析處理，LSD比較差異顯著性，所有數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 藥物對(duì)小鼠精神狀態(tài)的影響 所有灌胃小鼠，包括灌生理鹽水的空白對(duì)照小鼠，在注射和灌藥開始的3 d內(nèi)，飲水量和采食量均有減少，3d以后逐步恢復(fù)到正常水平。所有試驗(yàn)組小鼠在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)未見明顯的精神異常。

2.2 中藥對(duì)小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 各組小鼠的血常規(guī)結(jié)果見表1。從表1可看出，第1至4組的WBC、RBC、HGB、PLT 值差異不顯著（P＞0.05），表明正常小鼠服用黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液對(duì)血液學(xué)指標(biāo)沒有顯著影響。第6至8組小鼠腹腔注射Cy后，血液學(xué)指標(biāo)WBC、RBC、HGB、PLT與空白對(duì)照組相比顯著下降，差異顯著（P＜0.05），表明 Cy注射后可導(dǎo)致 WBC、RBC、HGB、PLT指標(biāo)顯著降低。第6組、8組的WBC、HGB指標(biāo)與環(huán)磷酰胺對(duì)照組（第5組）相比，差異不顯著（P＞0.05），但對(duì)WBC指標(biāo)有一定的提升。第7組的WBC、HGB 指標(biāo)與第 5組相比升高顯著（P＜0.05），與第1組相比差異顯著（P＜0.05）。表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)Cy注射小組的WBC和HGB指標(biāo)有較好的恢復(fù)作用，但不能恢復(fù)到正常水平。第6、7、8組的RBC指標(biāo)與第5組相比顯著升高（P＜0.05），PLT 指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）。

表1 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（n=10）

2.3 中藥方劑對(duì)小鼠體重及肝、脾指數(shù)的影響 由表2可知，黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液對(duì)正常小鼠和免疫抑制小鼠均無明顯的促生長作用（P＞0.05），各免疫抑制組與各正常組相比，試驗(yàn)?zāi)w重明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。第6、7、8組與第5組的增重率相比差異顯著（P＜0.05）。表明黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液對(duì)Cy造成的小鼠增重減少有較顯著的拮抗作用，但不能恢復(fù)到正常水平。各正常組與第5組的脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)相比差異顯著（P＜0.05），各正常組之間差異不顯著（P＞0.05），表明Cy可引起小鼠的肝、脾指數(shù)異常，而3個(gè)受試中藥對(duì)正常小鼠的肝、脾指數(shù)無明顯影響。6、8組的脾臟指數(shù)與5組相比，差異不顯著（P＞0.05），7組與5組相比，差異顯著（P＜0.05），與1組比較差異不顯著（P＞0.05）。表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯可使Cy造成的小鼠脾臟萎縮恢復(fù)到正常水平。6、7、8組的肝臟指數(shù)與5組相比，差異不顯著（P＞0.05），表明3個(gè)受試中藥對(duì)Cy造成的小鼠肝臟腫大無恢復(fù)作用。

表2 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)試驗(yàn)小鼠體重和肝、脾指數(shù)的影響（n=10）

3 結(jié)論

3.1 黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液對(duì)正常小鼠的血液學(xué)指標(biāo)（WBC、RBC、HGB、PLT）及肝、脾指數(shù)沒有顯著影響，但對(duì)環(huán)磷酰胺造模小鼠的血液學(xué)指標(biāo)有一定程度的恢復(fù)作用，其中當(dāng)歸補(bǔ)血湯效果優(yōu)于黃芪多糖和玉屏風(fēng)口服液，但均未能使WBC、RBC、HGB、PLT值回到正常水平。

3.2 黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液對(duì)環(huán)磷酰胺造成的小鼠增重減少和脾臟萎縮有明顯的拮抗作用；當(dāng)歸補(bǔ)血湯可將脾臟的損傷恢復(fù)到正常水平，但黃芪多糖、當(dāng)歸補(bǔ)血湯和玉屏風(fēng)口服液均不能將體重的增加恢復(fù)到正常水平，且對(duì)肝臟腫大無明顯的拮抗作用。

3.3 當(dāng)歸補(bǔ)血湯作為傳統(tǒng)治療“氣血兩虛”的經(jīng)典中藥方劑，在臨床中有著豐富的應(yīng)用成果。給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后，可明顯提高造模小鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞生成，提高血紅蛋白含量，與當(dāng)歸補(bǔ)血湯在其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的研究結(jié)果相同。對(duì)生長性能的影響方面，當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠的增重率與環(huán)磷酰胺空白對(duì)照組相比，有顯著的提高（P＜0.05），但不能恢復(fù)到正常水平，符合我們之前報(bào)道的在家兔方面的研究結(jié)果。

4.3 中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾為“后天之本”，是機(jī)體氣血生化之源，肝藏血主疏泄，二者均是水谷消化吸收的主要器官。病理損傷必然會(huì)造成水谷得不到充分的消化吸收和運(yùn)輸，血液化生沒有來源，就會(huì)出現(xiàn)精神短少、貧血，影響發(fā)育。本試驗(yàn)觀察到當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)免疫抑制小鼠的脾臟損害有較好的恢復(fù)作用，從病理的角度印證了中醫(yī)學(xué)的這一理論。

[1]黃兆勝，危建安，王宗偉.當(dāng)歸補(bǔ)血湯實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中成藥，2001，23（9）：680－683.

[2]王燕平，李曉玉，宋純清，等.當(dāng)歸補(bǔ)血湯中不同組分對(duì)正常及血虛小鼠免疫功能的影響[J].中草藥，2002，33（2）：135－138.

[3]寧 煉，陳長勛，金若敏，等.當(dāng)歸補(bǔ)血湯促進(jìn)造血功能的成分及其作用的研究[J].中國中藥雜志，2001，27（1）：50-53.

[4]劉伯成，劉 良，王永祿，等.當(dāng)歸補(bǔ)血湯的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，22（5）：48－50.

[5]王和平，趙喜新，田開宇.小鼠白細(xì)胞減少模型白細(xì)胞及骨髓粒系細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2002，37（4）：439-441.

[6]陳 奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：1010.

[8]Zheng KY，Choi RC，Cheung AW，et al.Flavonoids from radix astragali induce the expression of erythropoietin in cultured cells：a signaling mediated via the accumulation of hypoxia-inducible factor-1α[J].J Agric Food Chem.，2011，59（5）：1697-1704.