張子英 伊 樂(lè) 愛(ài) 民* 孫 虹 趙 娟

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

心律失常是常見(jiàn)的心血管疾病，臨床上常用的抗心律失常藥在劑量不當(dāng)或長(zhǎng)期用藥時(shí)可誘發(fā)傳導(dǎo)阻滯及心衰［1，2］，發(fā)生率為 3% ～ 13%［3］。蒙藥肉豆蔻(Myristica Fragrans Houtt，MFH)主治心赫依、心刺痛、心慌等癥［4］，其具有療效高、不良反應(yīng)少的優(yōu)點(diǎn)。心“赫依”病，即西醫(yī)的心臟疾病。《蒙醫(yī)金匱》中記載的用于治療心臟病的13個(gè)傳統(tǒng)驗(yàn)方中，將其入藥，其中6個(gè)驗(yàn)方將其作為主藥［5］。

關(guān)于肉豆蔻提取物作用的報(bào)道較少，Saleh等報(bào)道其提取物對(duì)蟾蜍心臟有急、慢性作用，肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)大鼠離體心臟的藥理作用方面的實(shí)驗(yàn)尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)為肉豆蔻的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康成年Wistar大鼠，雄性，體重180 ～300 g，許可證號(hào)SCXK(蒙)2002－001(清潔級(jí))，由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物研究中心提供。

1.1.2 藥品:肉豆蔻，市售;維拉帕米(0302293)、普萘洛爾(0302293)，山東魯能制藥有限公司;肝素鈉(H12020505)，天津市生物化學(xué)制藥廠(chǎng);鹽酸腎上腺素(05020341)，北京市永康藥業(yè)有限公司。

1.1.3 器材:DHT型攪拌恒溫電熱套，鄴城光明儀器有限公司(山東省);Langendorff灌流器，成都泰盟科技有限公司;Medlab－U/4CS生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，南京美易科技有限公司;XDH －3動(dòng)物心電圖機(jī)，上海電子儀器廠(chǎng);XB－D1心電圖示波器，丹東十四無(wú)線(xiàn)電廠(chǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 肉豆蔻揮發(fā)油提?。?］:取肉豆蔻 80 g，置圓底燒瓶中，加蒸餾水650 mL，振搖混勻后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水至揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分。置電熱套中緩緩加熱至沸(其中加攪拌子)，并保持微沸5 h，測(cè)定器中油量不增加，停止加熱，放置片刻，開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端達(dá)刻度0線(xiàn)上面5 mm處為止，放置1 h以上，開(kāi)啟活塞緩緩放出揮發(fā)油。將揮發(fā)油瓶裝蠟封、4℃保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)用0.5%吐溫溶液配置使用。

1.2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn):Wistar大鼠，體重180 ～250g，64 只大鼠隨機(jī)分8組，每組8只。肉豆蔻揮發(fā)油組:2個(gè)劑量組(0.3、0.6)mL/kg/d，腹腔注射，連續(xù) 7d;空白對(duì)照組:給相同體積的生理鹽水;陽(yáng)性對(duì)照組:0.4 g/kg維拉帕米和1.4 g/kg普萘洛爾。氯化鈣陽(yáng)性對(duì)照組于給藥前l(fā)0 min給維拉帕米，(0.4 g/kg)，20%烏拉坦 1.2 g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定，3.5%(140 mg/kg)氯化鈣10 s內(nèi)頸靜脈快速推注，觀(guān)察動(dòng)物心電示波器，穩(wěn)定10 min后描記II導(dǎo)心電圖，1 mV定標(biāo)，走紙速度為50 mm/s。腎上腺素組于給藥前5 min給0.1%普萘洛爾1.4 g/kg然后給腎上腺素(94 ug/kg)，10s內(nèi)頸靜脈快速推注，觀(guān)測(cè)方法同前。

1.3 離體實(shí)驗(yàn)［8－7］:Wistar大鼠，體重250 ～300g，隨機(jī)分3組，每組8只。肉豆蔻揮發(fā)油組:按0.4 mL/L入灌流液;空白對(duì)照組:給予同體積的生理鹽水;陽(yáng)性對(duì)照組:10 g/L普萘洛爾入灌流液。2%肝素加20%烏拉坦麻醉［9］，剪開(kāi)胸腔迅速取出心臟，剪斷上、下腔靜脈、肺動(dòng)脈、主動(dòng)脈，將主動(dòng)脈保留0.5 cm，放人0℃ Kreb－Henseleit buffer灌流液(K－H液)中，并清洗淤血和清除心臟周?chē)M織，擠出心室內(nèi)殘血。插上主動(dòng)脈套管，將心臟轉(zhuǎn)移到Langendorff灌流裝置上，(37±0.5)℃充有95%02和5%CO2混合氣飽和的K－H液恒壓逆向灌流。

模型建立20 min時(shí)，分別給各組肉豆蔻揮發(fā)油、生理鹽水、普萘洛爾，25 min給1 mL/min腎上腺素。在5 min、20 min、25 min、30 min;收集經(jīng)冠狀靜脈竇從右心房、肺動(dòng)脈和腔靜脈斷端流出的灌流液，此為冠脈流量(CF)［10］，同時(shí)記錄心率(HR)。

1.4 數(shù)據(jù)分析:計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s方式表示，用方差分析;計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)分析組間各個(gè)指標(biāo)的變化，分析程序采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。

2 結(jié)果

2.1 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)麻醉大鼠心電圖的影響:氯化鈣誘發(fā)的心律失常實(shí)驗(yàn)組中，未給氯化鈣之前，描記一段II導(dǎo)心電圖。對(duì)比肉豆蔻給藥組與空白對(duì)照組的心率，有極顯著性差異(P＜0.01);肉豆蔻揮發(fā)油與空白對(duì)照組相比，Q－T間期有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.05)。

表1 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)麻醉大鼠心電圖的影響(n=8，±s)

2.2 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)氯化鈣、腎上腺素誘發(fā)的大鼠在體心律失常的保護(hù)作用:氯化鈣誘發(fā)心律失常在體實(shí)驗(yàn)組中，肉豆蔻揮發(fā)油給藥組的心律失常發(fā)生率與空白對(duì)照組的心律失常發(fā)生率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肉豆蔻揮發(fā)油給藥組與空白對(duì)照組死亡率相比均可降低氯化鈣所致死亡率(P＜0.05);肉豆蔻揮發(fā)油大劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見(jiàn)表2)

腎上腺素誘發(fā)的大鼠在體心律失常組中，肉豆蔻揮發(fā)油給藥組與空白對(duì)照組比，可降低腎上腺素誘發(fā)的心律失常發(fā)生率(P＜0.05);肉豆蔻揮發(fā)油組與陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見(jiàn)表2)

表2 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)氯化鈣、腎上腺素誘發(fā)的心律失常的影響(n=8，±s)

2.3 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)大鼠離體心臟的影響:大鼠離體實(shí)驗(yàn)中，對(duì)比模型建立5min、20min時(shí)，各組間的心率(HR)、冠脈流量(CF)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對(duì)比模型建立25 min時(shí)，肉豆蔻揮發(fā)油組與空白對(duì)照組的心率、冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01)，肉豆蔻揮發(fā)油組與普萘洛爾組的心率無(wú)差別(P＞0.05);其與普萘洛爾組的冠脈流量相比也有極顯著性差異(P＜0.01)。模型建立30 min對(duì)比發(fā)現(xiàn):肉豆蔻揮發(fā)油和空白對(duì)照組的心率和冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01);肉豆蔻揮發(fā)油組與普萘洛爾組的冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01)，其和普萘洛爾組的心率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對(duì)比不同時(shí)間的心率、冠脈流量發(fā)現(xiàn)，普萘洛爾組的心率 25min、30min和20min對(duì)比時(shí)有極顯著性差異(P＜0.01)，其冠脈流量和20 min相比無(wú)差異(P＞0.05)，肉豆蔻揮發(fā)油組的心率、冠脈流量25 min、30 min和20 min相比有極顯著性差異(P＜0.01)。肉豆蔻揮發(fā)油組冠脈流量較空白對(duì)照組和普萘洛爾組有極顯著差異(P＜0.01)。(見(jiàn)表3)

表3 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)離體心臟灌HR、CF的影響(n=8，±S)

3 討論

當(dāng)前對(duì)于抗心律失常藥物的研究認(rèn)為，具有重要意義的抗心律失常藥物靶點(diǎn)包括:離子通道、細(xì)胞間耦聯(lián)的分子、最佳靶點(diǎn)假說(shuō)等［11］。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)觀(guān)察肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠在體心律失常模型及離體心臟灌流模型的影響，研究其抗心律失常作用及其作用靶點(diǎn)。

3.1 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)麻醉大鼠心電圖的影響電生理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，一般情況下只有使心率減慢的藥物才具有抗心律失常作用［12］。本實(shí)驗(yàn)大鼠心電圖結(jié)果顯示:對(duì)比不同劑量給藥組和空白對(duì)照組，發(fā)現(xiàn)肉豆蔻揮發(fā)油能減慢心率、延長(zhǎng)Q－T間期。從這一結(jié)果看來(lái)，肉豆蔻抗心律失常作用的作用，介于抗心律失常藥II類(lèi)(β－受體阻斷劑)和III類(lèi)(延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程藥)之間［13］;負(fù)性頻率、負(fù)性傳導(dǎo)作用可能是其抗心律失常作用的一個(gè)重要的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

3.2 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)氯化鈣誘發(fā)的心律失常的影響:氯化鈣可影響心肌細(xì)胞上的鈣通道，使大量鈣離子進(jìn)人心肌細(xì)胞，導(dǎo)致異位心律失常［9］?？焖凫o推140 mg/kg氯化鈣，約80%的大鼠在數(shù)秒鐘內(nèi)死于室顫［10］。一般在注射過(guò)程中或注入后立即出現(xiàn)心律失常，持續(xù)20 min以上［14］。維拉帕米電生理效應(yīng)主要是通過(guò)抑制依賴(lài)于鈣的動(dòng)作電位與減慢房室結(jié)的傳導(dǎo)速度。觀(guān)察大鼠給氯化鈣30 min內(nèi)所致的心律失常心電圖變化及死亡率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)氯化鈣誘發(fā)的心律失常無(wú)拮抗作用，肉豆蔻揮發(fā)油大劑量與維拉帕米降低氯化鈣誘發(fā)的心律失常所致死亡率作用相當(dāng)，其降低死亡率可能與神經(jīng)、體液等其他因素有關(guān)。

3.3 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)腎上腺素誘發(fā)的心律失常的影響:普萘洛爾是β－受體阻滯藥，對(duì)抗腎上腺素對(duì)心臟的過(guò)度興奮作用，有效的預(yù)防腎上腺素過(guò)量所致的心律失常［15］。抗心律失常藥物的發(fā)展趨勢(shì)為阻斷多重通道，多通道阻滯劑和β－受體阻滯劑的聯(lián)合應(yīng)用顯示出廣闊前景［14］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:肉豆蔻揮發(fā)油可明顯降低腎上腺素誘發(fā)的心律失常發(fā)生率(P＜0.05)，對(duì)腎上腺素誘發(fā)的大鼠在體心律失常有明顯的拮抗作用，抗腎上腺素引起的心律失常作用與普萘洛爾相當(dāng)。

3.4 肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)大鼠離體心臟的影響:客觀(guān)評(píng)價(jià)肉豆蔻揮發(fā)油對(duì)心臟功能的影響，需排除很多干擾因素。有關(guān)文獻(xiàn)認(rèn)為離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)可去除神經(jīng)體液的影響［10］。本實(shí)驗(yàn)在大鼠離體心臟上進(jìn)行觀(guān)察，用恒壓逆向灌流法，靠外加液壓逆向灌流冠脈維持心肌功能，離體心臟做功維持循環(huán)［16］。所以，本實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟谂懦饲柏?fù)荷和后負(fù)荷影響的條件下觀(guān)察離體心臟的功能變化，排除了神經(jīng)內(nèi)分泌的干擾。本實(shí)驗(yàn)復(fù)制的心臟灌流模型符合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠心臟體外灌流過(guò)程舒縮功能、心率變化在20 min時(shí)穩(wěn)定，持續(xù)2h左右。

綜上所述，肉豆蔻揮發(fā)油抗心律失常的作用可能是通過(guò)多方面的機(jī)制而產(chǎn)生的，如減慢心率、增加冠脈流量、對(duì)抗交感神經(jīng)興奮，有關(guān)其抗心律失常的作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

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