羅玲 嚴海燕 羅曉紅

強直性脊柱炎(AS)是一種常見的慢性炎癥性關(guān)節(jié)病，主要影響脊柱關(guān)節(jié)及骶髂關(guān)節(jié)，主要發(fā)病于年輕男性。該病診斷的直接證據(jù)是X線下脊柱的特征性改變及骶髂關(guān)節(jié)炎，但這種改變只有在疾病發(fā)展到一定的程度時才能被觀察到。HLA抗原是人類主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibity complex，MHC)的表達產(chǎn)物，在免疫系統(tǒng)中主要負責(zé)細胞之間的相互識別和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的功能。HLA-B27基因?qū)儆冖裥蚆HC基因。人們在很早就發(fā)現(xiàn)了HLA-B27抗原的表達與AS有著高度的相關(guān)性[1，2]。在臨床上，由于AS的癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此，HLAB27的檢測在AS的診斷中有著重要的意義。本文用流式細胞儀檢測AS患者外周血淋巴細胞HLA-B27的表達，探討其在臨床診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2009年1月至2012年1月到骨科、風(fēng)濕科住院的144個病例，其中男110例，女34例，平均年齡34.1歲，20以下38例，20～30歲29例，30～40歲26例，40歲以上51例。其中有90例患者是采用1984年紐約修訂的AS診斷標準確診為AS。

1.2 儀器與試劑 儀器采用美國貝克曼公司的Beckman-Coulte FC500流式細胞儀，單克隆抗體HLA-B27-FITC/HLAB7-PE、溶血素、鞘液均來自貝克曼公司的標準試劑盒。

1.3 方法 操作按SOP要求，取流式管2支，分別加入5 μl單克隆抗體(HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE)和同型對照(IgG2a-FITC/IgG1-PE)，分別向兩支管中加入50 μl混勻的抗凝全血，混勻后室溫避光15～20 min，然后加入溶血素300 μl，混勻后室溫避光10 min，加入500 μlPBS，1500r/min 離心5 min，棄上清，加入 500 μlPBS，混勻上機測樣。

1.4 獲取數(shù)據(jù) 采用流式細胞儀自帶的軟件獲取數(shù)據(jù)并進行分析。如圖1所示，先通過FS-SS雙參數(shù)圖圈定淋巴細胞設(shè)門，再分析淋巴細胞中HLA-B27+/HLA-B7-細胞群的熒光強度和百分比。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段HLA-B27陽性率的比較見表1，可以看出AS的好發(fā)人群主要是青少年。

2.2 不同性別HLA-B27陽性率的比較見表2，可以看出男性(70.9%)要顯著高于女性(41.2%)。

圖1 通過FS-SS雙參數(shù)圖圈定淋巴細胞設(shè)門

圖2 淋巴細胞中HLA-B27+/HLA-B7-細胞群的熒光強度和百分比

表1 不同年齡段HLA-B27陽性率的比較(例，%)

表2 不同性別陽性率的比較(例，%)

2.3 AS患者與非AS患者HLA-B27的陽性率的比較見表3，由表3可得HLA-B27檢測對診斷AS的出靈敏度為91.1%(82/90)，特異度為81.5%(44/54)，正確率為87.5%(126/144)。

表3 AS患者與非AS患者的陽性率的比較(例)

3 討論

AS發(fā)病原因未明，發(fā)病早期主要累及骶髂關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、椎間關(guān)節(jié)。由于發(fā)病隱匿，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，影像學(xué)改變不典型，常被忽視為腰肌勞損等其他疾病而被誤診或漏診，是目前臨床上誤診率很高的一種疾病。晚期，患者出現(xiàn)脊柱強直，活動受限，甚至致殘[3]。目前AS的診斷主要按照1984年紐約修訂的診斷標準，除要求患者存在X線≥2級骶髂關(guān)節(jié)炎，還要求存在腰椎活動受限，胸椎活動降低等損害。所以患者可能在數(shù)年之后才能被確診，此時就已經(jīng)失去了最佳治療的時機，并導(dǎo)致致殘率很高。因此，AS的早期診斷成為了爭取良好預(yù)后的關(guān)鍵[4]。

HLA-B27基因定位于人類第6號染色體短臂上，由8個外顯子和7個內(nèi)含子組成。HLA-B27抗原幾乎表達于所有的有核細胞，特別是淋巴細胞表面，自1973年Brew erton等率先報道其與AS密切相關(guān)以來，世界范圍內(nèi)對HLA與疾病的相關(guān)性研究與探討一直不斷。不同種族、不同地區(qū)人群的研究結(jié)果顯示，HLA-B27抗原與AS的相關(guān)性是迄今已知HLA與疾病相關(guān)中最強和最典型的。但是對于HLA-B27與AS發(fā)病機制之間的關(guān)聯(lián)尚不清楚，現(xiàn)在認為，HLA-B27陽性者易患AS的原因，是由于這種人的抗原提呈細胞能結(jié)合某些微生物抗原，將其抗原多肽提呈給T細胞。這些微生物抗原多肽與AS的致病多肽有同源性，可模擬致病多肽起作用。HLA-B27陽性者感染這些微生物是AS發(fā)病的直接原因[5]。

有研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27陽性者患AS的概率是陰性者的200～300倍[6]，10年內(nèi)有70～90%發(fā)展成為 AS。近年國外報道，AS發(fā)病對HLA-B27有劑量依存關(guān)系，即純合子HLAB27的人發(fā)病的危險性高，發(fā)病后病情重。在AS、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等發(fā)病中，HLA-B27陽性患者的親屬發(fā)病危險性比HLAB27人群又高10倍[7]，因此，認為 HLA-B27檢測可作為 AS的篩選方法[8]，并且對AS的預(yù)防也有一定的意義。我們在臨床上有必要對疑似AS的病例和HLA-B27陽性的一級親屬開展HLA-B27抗原的檢測。本研究中AS確診患者HLA-B27陽性率為91.1%，與文獻報道的90%以上相符。

HLA-B27抗原的檢測目前常規(guī)使用流式細胞術(shù)，在國外，經(jīng)過長期的方法質(zhì)量驗證證明[9]，流式細胞術(shù)檢測HLAB27抗原標準化程度高，可同時測定細胞多個參數(shù)，敏感性好、特異性好、重復(fù)性好，結(jié)果判斷準確，且操作簡單快捷，所需標本量少，無需分離單個淋巴細胞，是目前最優(yōu)的檢測方法。本文使用的流式細胞術(shù)檢測HLA-B27抗原的靈敏度為91.1%，特異性為81.5%，正確率為87.5%，顯示HLA-B27抗原與AS密切相關(guān)。但仍有一部分AS患者HLA-B27抗原呈陰性，故臨床應(yīng)引起注意，HLA-B27陰性并不能排除AS。

在臨床上，如癥狀和體征提示AS，HLA-B27抗原陽性會顯著增加正確診斷的機會，對疑似AS患者開展HLA-B27抗原的檢測，有利于為他們提供診斷和鑒別診斷的線索，彌補X線的不足?？傊?，HLA-B27抗原有利于AS的早期診斷和防治，使疾病的發(fā)展得到及時控制，避免致殘，提高生活質(zhì)量。采用流式細胞術(shù)檢測HLA-B27抗原，對于AS的診斷有很好的特異性、靈敏度，可靠、準確，且操作簡便，是一種很好的檢測方法，值得臨床常規(guī)開展此項檢查。

[1]Breweton DA，Hart FD.Ankylosing spondylitis and HLAB27.Lancet，1973，1(13):904-907.

[2]Schlosstein L，Terasaki PI，Bluestone R，et al.High association of HLA antigen，W27 with ankylosing spondylitis.New Eng J Med，1973，288(14):704-706.

[3]王桂葉，孫振昌，張明智.強直性脊柱炎與HLA-B27關(guān)聯(lián)性的分析.中原醫(yī)刊，2006，33(5):11-12.

[4]金朝暉.強直性脊柱炎的早期診斷.北京醫(yī)學(xué)，2005，27(11):688-689.

[5]Khure SD，Lathra HS，Davis CS.Role of HLA-B27 in spondyloarthropathies.Curr Top Microbiol Immunol，1996，206:85-100.

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[9]Macardle PJ，McEvoy R，Jovanovich S.HLA-B27 expression by flow cytometry:an analysis of 7 years quality assurance data.J Immunological Methods，2000，5(243):51.