任忠國(guó)

目前國(guó)內(nèi)血站檢測(cè)抗-HCV的方法，多為間接ELISA法。間接ELISA檢測(cè)獻(xiàn)血者血漿的加樣量?jī)H10 μl，加樣量非常小，這就要求我們的加樣系統(tǒng)必須十分精確，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在實(shí)際工作中，我們多采用自動(dòng)化設(shè)備來檢測(cè)，而自動(dòng)化儀器加樣的方式也可以分為兩種，一種是直接將標(biāo)本加注到HCV稀釋液中，另一種是將標(biāo)本加注到稀釋液后，再采用反復(fù)吸打的方式進(jìn)行混合，筆者發(fā)現(xiàn)采用不同的加樣方式，對(duì)檢測(cè)抗-HCV的結(jié)果有著較大的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 陰性標(biāo)本:經(jīng)本站兩家試劑檢測(cè)的抗-HCV陰性獻(xiàn)血者標(biāo)本。弱陽(yáng)性標(biāo)本:采用抗-HCV質(zhì)控品(0.5NCU/ml)，北京康徹思坦公司，批號(hào):201105003。

ELISA抗-HCV試劑:廈門新創(chuàng)試劑，批號(hào):2011115824。

1.2 儀器 全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng):AT PLUS2、FAME24/20瑞士哈米爾頓公司。

1.3 方法 采用同一廠商試劑，采用不同的加樣方式進(jìn)行加樣，在同一臺(tái)FAME后處理中進(jìn)行檢測(cè)。

加樣方式:混合方式:吸取10 μl標(biāo)本，加入相應(yīng)的酶標(biāo)孔HCV稀釋液中，并反復(fù)吸打一次。每板加40份陰性標(biāo)本和40份弱陽(yáng)性標(biāo)本。未混合方式:吸取10 μl標(biāo)本，直接加入相應(yīng)的酶標(biāo)孔HCV稀釋液中。每板加40份陰性標(biāo)本和40份弱陽(yáng)性標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 產(chǎn)生數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析，配對(duì)資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同加樣方式檢測(cè)結(jié)果比較，見表1

表1 不同加樣方式檢測(cè)結(jié)果比較(S/CO值)。

3 討論

兩種加樣方式中，對(duì)于確定為陰性的標(biāo)本，結(jié)果并無影響(P＞0.05)，但對(duì)于弱陽(yáng)性標(biāo)本，本文中主要以0.5NCU/ml的質(zhì)控品代替弱陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果差異顯著(P＜0.01)。這種差異的出現(xiàn)，筆者認(rèn)為可能原因如下:①混合加樣方式，使標(biāo)本在稀釋液中得到充分混合，減少了標(biāo)本在稀釋液中自由擴(kuò)散達(dá)到混勻的時(shí)間。②加樣過程中，處理器加樣針尖處可能由于液體的表面張力的作用而存在液滴，在不采用混合加樣模式下，該存留的液滴將使相對(duì)加樣誤差達(dá)到0.4%以上[1]。由于血漿與水具有不同的粘滯系數(shù)，所以在加入血漿等粘滯系數(shù)較大的液體時(shí)，這種誤差會(huì)更加明顯，正是這種誤差造成了檢測(cè)結(jié)果的差異。經(jīng)筆者深入試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，如果采用未混合加樣方式，加樣量12 μl約可達(dá)到混合加樣方式檢測(cè)結(jié)果的S/CO值。

有學(xué)者的研究結(jié)果表明，血站篩檢獻(xiàn)血者血液時(shí)，應(yīng)將抗HCV ELISA的陽(yáng)性判斷值下限20%，即0.8，這對(duì)于減少HCV的經(jīng)輸血傳播有重要意義[2]。也就是說，對(duì)于ELISA檢測(cè)接近c(diǎn)ut-off值的，會(huì)有“灰區(qū)”標(biāo)本的存在。對(duì)于這種標(biāo)本，如采用未混合加樣方式檢測(cè)抗-HCV，很可能會(huì)判斷為陰性，而采用混合加樣方式則有可能檢出。所以對(duì)于弱陽(yáng)性標(biāo)本，尤其是灰區(qū)標(biāo)本來講，混合加樣方式會(huì)比未混合加樣方式增加檢出率。

對(duì)于ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中試劑的平衡時(shí)間、溫度、洗板等原因?qū)z測(cè)結(jié)果的影響，多見諸文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)[3]，但對(duì)于加樣方式對(duì)間接ELISA法檢測(cè)抗-HCV結(jié)果的影響未見深入探討。

HCV主要經(jīng)血液途徑傳播，PTH 90%是 HCV[4]。抗-HCV的檢測(cè)已成為重要的防止HCV經(jīng)輸血傳播的手段之一。目前國(guó)內(nèi)血站系統(tǒng)檢測(cè)抗-HCV多為第三代ELISA間接法試劑，該種試劑采用樣本量10 μl加入到100 μl樣本稀釋液中，加入樣本量較小。建議如有可能，在抗-HCV檢測(cè)過程中，應(yīng)采用加入標(biāo)本后并進(jìn)行混合的加樣方式，以增加弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢出。

[1]李金明.臨床酶免疫測(cè)定技術(shù).北京:人民軍醫(yī)出版社，2006:140.

[2]鄧巍，王露楠，李金明.丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)陽(yáng)性判斷值在獻(xiàn)血員血液篩檢中的意義.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，27(10):664.

[3]閔志軍，張力超，張建偉，等.試劑盒平衡時(shí)間對(duì)抗-HCV檢測(cè)結(jié)果的影響因素分析.臨床血液學(xué)雜志，2010，23(12):713-715.

[4]馬現(xiàn)君，陳元鋒，楚中華，等.無償獻(xiàn)血者不同人群抗HCV流行情況調(diào)查研究.臨床血液學(xué)雜志，2008，21(4):195-196.