梁 博，王新軍，周少龍

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)外科 鄭州 450052

研究[1]表明胞質(zhì)多聚腺苷酸化成分結(jié)合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element-binding protein 4, CPEB4)對(duì)于基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)起關(guān)鍵作用，CPEB4的過(guò)表達(dá)存在于多種腫瘤中。Bcl-xL蛋白在細(xì)胞的凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，在多種腫瘤組織中有過(guò)表達(dá)現(xiàn)象，它的過(guò)表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡, 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移甚至耐藥性有關(guān)[2]。作者應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中CPEB4和Bcl-xL的表達(dá)，并探討二者及多種臨床因素與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1材料2008至2009年在鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)外科接受手術(shù)、資料完整的膠質(zhì)瘤患者165例，其中男89例，女76例，年齡3～82(47.2±3.1)歲。按WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)，其中低級(jí)別膠質(zhì)瘤69例，包括毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤(Ⅰ級(jí))27例和彌漫型星形細(xì)胞瘤(Ⅱ級(jí))42例；高級(jí)別膠質(zhì)瘤96例，包括間變性星型細(xì)胞瘤(Ⅲ級(jí))61例和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Ⅳ級(jí))35例。其他評(píng)估因素包括患者年齡、性別、術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤直徑、腫瘤切除范圍、術(shù)后是否放療或化療、腫瘤位置、病理級(jí)別、是否復(fù)發(fā)及術(shù)后3 a生存率等。術(shù)后隨訪情況包括是否死亡及死亡時(shí)間、癥狀是否有進(jìn)展及進(jìn)展發(fā)生的時(shí)間。隨訪資料的取得來(lái)源于患者本人或家屬的門(mén)診或電話隨訪，隨訪期2010至2012年。

1.2膠質(zhì)瘤組織中CPEB4和Bcl-xL的免疫組化染色檢測(cè)CPEB4、Bcl-xL兔抗人多克隆抗體分別購(gòu)自美國(guó)Sigma公司和武漢博士德生物工程有限公司，即用型SP超敏免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。CPEB4和Bcl-xL一抗均按1200稀釋，標(biāo)本經(jīng)脫蠟、抗原修復(fù)后進(jìn)行免疫組化染色，蘇木素復(fù)染，脫水、封片后顯微鏡下觀察。以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性的胰腺癌組織切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定由兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察切片。CPEB4、Bcl-xL蛋白表達(dá)均以腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)棕黃色著色為染色陽(yáng)性。每個(gè)切片選取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。采用Ortiz-Zapater等[1]提出的染色標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定CPEB4的檢測(cè)結(jié)果：陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%為 1分，～50%為2分，>50%為3分；無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分。兩項(xiàng)得分相加為最后得分，0分為陰性，≥1分為陽(yáng)性。采用Karczmarek-Borowska等[2]提出的標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定Bcl-xL蛋白檢測(cè)結(jié)果：陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%為陰性，>10%為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0處理數(shù)據(jù)。不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)，多種因素與膠質(zhì)瘤患者3 a生存率的關(guān)系采用logistic回歸模型進(jìn)行分析，選擇其中有意義的變量進(jìn)行多因素分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1膠質(zhì)瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白的表達(dá)

見(jiàn)圖1、表1。

圖1 膠質(zhì)瘤組織中CPEB4(A)和Bcl-xL(B)蛋白的表達(dá)(SP，×400)

表1 不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白的表達(dá) 例(%)

2.2影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后指標(biāo)的單因素和多因素分析主要變量賦值見(jiàn)表2。

表2 主要變量賦值表

利用logistic回歸分析篩選出術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤直徑、腫瘤切除范圍、術(shù)后放療、術(shù)后化療、病理級(jí)別、CPEB4和Bcl-xL表達(dá)8個(gè)有意義的變量。對(duì)單因素分析有意義的因素進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，最終能進(jìn)入回歸模型的變量有6個(gè)，病理級(jí)別、CPEB4和Bcl-xL的表達(dá)是膠質(zhì)瘤預(yù)后的危險(xiǎn)因素，而術(shù)前KPS評(píng)分>80分、腫瘤全切、術(shù)后化療則為保護(hù)因素，見(jiàn)表3。影響膠質(zhì)瘤預(yù)后的全部指標(biāo)同時(shí)進(jìn)入判別方程進(jìn)行分析，將判別分類(lèi)與原分類(lèi)對(duì)照，判別符合率90.9%；用前進(jìn)法篩選出6個(gè)影響膠質(zhì)瘤預(yù)后的指標(biāo)，判別函數(shù)Y=-0.644+1.386X3+1.052X5+1.248X6-2.679X10-1.042X11-2.659X12。將判別分類(lèi)與原分類(lèi)對(duì)照，判別符合率為88.3%，與全部指標(biāo)進(jìn)入判別方程得到的判別符合率接近。

表3 膠質(zhì)瘤預(yù)后危險(xiǎn)因素的多因素分析

3 討論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，其中包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活[3]以及凋亡基因的異常表達(dá)等。CPEB4是CPEBs家族中的一員，這個(gè)家族的成員主要通過(guò)控制靶基因的多聚腺苷酸化來(lái)調(diào)節(jié)其翻譯過(guò)程[4]。已有報(bào)道[5-6]認(rèn)為CPEB4是神經(jīng)細(xì)胞中的一種存活蛋白，可以調(diào)控減數(shù)分裂的細(xì)胞。Ortiz-Zapater等[1]研究發(fā)現(xiàn)CPEB4在胰腺癌及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中呈過(guò)表達(dá)，并認(rèn)為過(guò)表達(dá)的CPEB4與腫瘤的生長(zhǎng)和血管生成相關(guān)；通過(guò)對(duì)小鼠腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn)敲除CPEB4基因的腫瘤細(xì)胞其侵襲性和惡性轉(zhuǎn)移能力明顯減弱，且腫瘤的生長(zhǎng)和增殖能力也顯著減弱，腫瘤血管生成減少，小鼠存活率升高。CPEB4的過(guò)表達(dá)還存在于許多其他種類(lèi)的腫瘤中，如皮膚癌、結(jié)直腸癌、腎癌及子宮內(nèi)膜癌等[7]。然而Tian等[8]在最近的研究中發(fā)現(xiàn)，在肝癌組織中，CPEB4的蛋白及mRNA表達(dá)水平下調(diào)，CPEB4的高表達(dá)預(yù)示著肝癌患者有一個(gè)較好的預(yù)后。這種矛盾的現(xiàn)象可能與腫瘤組織的特異性有關(guān)，不同的細(xì)胞中，CPEB4通過(guò)結(jié)合不同基因3’-UTR區(qū)的CPE序列來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的下游目標(biāo)，以完成對(duì)基因翻譯過(guò)程的控制。Bcl-xL蛋白是Bcl-2蛋白家族中的重要成員，是一種抑制凋亡的蛋白，在多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)[9]，與腫瘤的生長(zhǎng)分化關(guān)系密切。該研究結(jié)果提示，CPEB4和Bcl-xL的陽(yáng)性表達(dá)率與膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān)，CPEB4和Bcl-xL表達(dá)水平的不同可能是膠質(zhì)瘤分化程度存在差異的原因之一。

影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的因素較多。多因素分析篩選出影響預(yù)后的因素有6個(gè)：術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤切除范圍、病理級(jí)別、術(shù)后化療、CPEB4和Bcl-xL表達(dá)。判別分析顯示影響膠質(zhì)瘤預(yù)后各項(xiàng)因素對(duì)預(yù)后的判別符合率(90.9%)與以上6因素對(duì)預(yù)后的判別符合率(88.3%)非常接近，提示這6個(gè)因素是預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤預(yù)后比較敏感的指標(biāo)，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

該研究結(jié)果表明術(shù)前KPS評(píng)分是影響患者生存率的主要因素，與Valduvieco等[10]的研究結(jié)果一致。術(shù)前KPS評(píng)分高說(shuō)明腫瘤發(fā)展處于初級(jí)階段且患者身體條件較好，對(duì)手術(shù)的耐受能力較強(qiáng)，因此術(shù)后具有較高的生存率。

目前膠質(zhì)瘤的治療多采用手術(shù)、放療或化療聯(lián)合的綜合治療，但手術(shù)仍是最主要的治療方法且仍是影響存活率的最主要因素。美國(guó)兒童腫瘤聯(lián)合調(diào)查組大宗病例分析[11]證實(shí)，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中，根治性切除和部分切除的5 a無(wú)瘤生存率分別為(29±6)%和(4±3)%；在間變性星形細(xì)胞瘤患者中，5 a無(wú)瘤生存率分別為(44±11)%和(22±6)%。Allahdini等[12]研究發(fā)現(xiàn)最大程度地切除腫瘤對(duì)延長(zhǎng)患者生存期有重要意義，不僅如此，Bloch等[13]還發(fā)現(xiàn)對(duì)于首次手術(shù)行次全切的膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)患者，二次手術(shù)行腫瘤全切仍能最大程度延長(zhǎng)患者生存期。該研究結(jié)果顯示腫瘤全切對(duì)患者預(yù)后有重要意義，與上述研究結(jié)論一致，因此對(duì)膠質(zhì)瘤患者，手術(shù)應(yīng)當(dāng)爭(zhēng)取全切，這是提高手術(shù)效果、減少?gòu)?fù)發(fā)的根本措施。

研究[14]顯示膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別與患者預(yù)后有關(guān)，病理級(jí)別越高，患者預(yù)后越差。該研究結(jié)果亦表明膠質(zhì)瘤病理級(jí)別與患者3 a生存率有關(guān)，與上述研究結(jié)論一致，這也符合膠質(zhì)瘤本身所固有的生物學(xué)特性。

放、化療是膠質(zhì)瘤治療的輔助手段，但是目前針對(duì)放療和化療對(duì)預(yù)后的影響仍有爭(zhēng)議。對(duì)于毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤，有文獻(xiàn)[11]認(rèn)為，未能全切者可給予一定劑量的放療，不主張化療。良性星形細(xì)胞瘤術(shù)后實(shí)性殘余腫瘤行放射治療對(duì)延長(zhǎng)生存期有肯定效果。但歐洲癌癥治療研究組織和英國(guó)醫(yī)學(xué)研究理事會(huì)[15]的研究結(jié)果認(rèn)為低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者術(shù)后放療可以提高無(wú)進(jìn)展生存期，但對(duì)生存率無(wú)影響。針對(duì)放療不敏感的膠質(zhì)瘤患者，化療是一種必要的治療方式，但目前化療方案較多，不同化療方案的預(yù)后也不盡相同。一項(xiàng)由歐洲癌癥研究治療組織和加拿大國(guó)立癌癥研究院[16]聯(lián)合進(jìn)行的Ⅲ期臨床試驗(yàn)認(rèn)為在放療基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用替莫唑胺化療后再給予6個(gè)周期的替莫唑胺輔助化療可明顯延長(zhǎng)患者生存期。該組數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明術(shù)后化療對(duì)預(yù)后影響較大，是一項(xiàng)獨(dú)立影響因素。

綜上所述，CPEB4和Bcl-xL陽(yáng)性表達(dá)與膠質(zhì)瘤惡性程度有關(guān)；術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤切除范圍、術(shù)后化療、病理級(jí)別、CPEB4和Bcl-xL的表達(dá)可作為考察膠質(zhì)瘤患者預(yù)后情況的重要指標(biāo)。

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