陳霄峰 梁小裕 郟雪萍 陳文芬 林明增 羅文達

(浙江省臺州醫(yī)院路橋院區(qū),浙江 臺州 318050)

特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是臨床上比較常見的出血性疾病。其發(fā)病機制尚未完全明確,越來越多的研究證明[1],ITP 是一個多因素參與的病理過程,可能與多種因素誘發(fā)的機體體液免疫和細胞免疫紊亂有關(guān),其中細胞免疫異常在ITP 發(fā)病機制中有重要的作用。本文應(yīng)用流式細胞儀(FCM)對ITP 患者外周血淋巴細胞亞群進行檢測,并對ITP 治療前后進行動態(tài)檢測,探討細胞免疫功能在ITP 發(fā)生發(fā)展過程及轉(zhuǎn)化中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2009年4月～2012年4月40例ITP 門診及住院患者,均符合ITP 診斷標準[2],近3個月來未行任何治療,其中男16例,女24例,年齡18～60歲,平均(37.0±10.2)歲;對照組為30例體檢健康者,男12例,女18例,年齡19～62歲,平均(36.1±9.8)歲。兩組年齡,性別差異無統(tǒng)計學意義,具有可比性。其中40例ITP 中,有32例治療有效。激素治療6周后血小板達正常時進行T 細胞亞群檢測,進行治療前后對比。

1.2 檢測方法 T 淋巴細胞亞群測定,晨起抽取靜脈血2mL,EDTA 抗凝,儀器為美國BD 公司的fascaliber 流式細胞儀,按操作規(guī)程進行總CD3,CD4,CD4/CD8,總CD19,CD16+56 的檢測。單克隆標本由美國BD 公司提供。

2 結(jié)果

從表1 可以看出,ITP組與對照組比較,CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 下降,而CD8 及CD19 升高,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

從表2 可以看出,ITP 治療前后相比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),經(jīng)過治療后ITP組與對照組比較各指標無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表1 兩組淋巴細胞亞群水平比較(±s)

表1 兩組淋巴細胞亞群水平比較(±s)

與對照組比較**P＜0.01

表2 ITP 治療前后淋巴細胞亞群水平比較(±s)

表2 ITP 治療前后淋巴細胞亞群水平比較(±s)

與治療前比較**P＜0.01

3 討論

雖然,ITP 的確切發(fā)病機制尚未完全明了,但隨著各種研究的不斷深入,目前認為ITP 是以免疫介導血小板破壞為特征,是體液免疫和細胞免疫共同參與的一種自身免疫性疾病[3]。目前很多研究表明,ITP 發(fā)病可能與多種病毒及幽門螺旋桿菌感染有關(guān)。Emmerich 等[4]報道ITP 患者的B 淋巴細胞刺激因子水平高于正常對照組,提出此因子可能是導致ITP 發(fā)生的重要因素之一。Olsson 等[5]報道ITP患者T 細胞毒性相關(guān)基因,如Apo21/Fas、granzyme B、granzyme A 和perforin 表達增加,從而證實CTL(細胞毒T 淋巴細胞)確實介導血小板破壞,并進一步證實,ITP 患者殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)家族基因增強了表達。Yamanoto 等[6]發(fā)現(xiàn)ITP 患者骨髓巨核細胞超微結(jié)構(gòu)異常,包括線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹形成的胞漿內(nèi)空泡增多及染色質(zhì)固縮等,自身抗體通過GP(糖蛋白)分子與巨核細胞結(jié)合,引起巨核細胞的成熟和功能障礙。機體正常狀態(tài)下,內(nèi)環(huán)境保持一定的穩(wěn)定性是至關(guān)重要的,免疫功能的穩(wěn)定亦如此,如果免疫功能紊亂,則導致多種疾病的產(chǎn)生。本文從細胞免疫這一方面來探討發(fā)病機制。T細胞淋巴細胞亞群之間保持正常的比例是形成正常免疫應(yīng)答的基礎(chǔ),T 淋巴細胞比例失調(diào)在自身免疫病的發(fā)生發(fā)展過程中也起重要作用[7]。本文結(jié)果顯示,患者CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 均下降,而CD19 及CD8 上升,與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),而經(jīng)過治療有效者各指標恢復(fù)正常,與對照組相比,無統(tǒng)計學意義。說明ITP 患者存在一定的T 淋巴細胞比例失調(diào)。CD3 是外周血中成熟T 淋巴細胞的特異標志物之一,代表外周成熟T 細胞的總數(shù),在無補體存在時,抑制T 細胞對靶細胞的細胞毒作用,抑制依賴白介素-2 的T細胞生長。其下降提示免疫功能下降[8]。本文中CD3 下降,亦支持這一觀點。CD4 是輔助性T 細胞的代表性抗原。CD4 下降機制可能是CD4T 淋巴細胞接受抗原提呈細胞提呈的自身抗原的刺激后活化,凋亡調(diào)節(jié)基因Fas 的表達增加,易發(fā)生活化誘導的細胞死亡而被清除。外周血CD8T 淋巴細胞比例增高則可能是由于CD4 淋巴細胞減少,CD8T 淋巴細胞反饋性升高所致[9]。本文中CD4/CD8 比例失調(diào),提示細胞功能紊亂。CD19 是B 細胞分化、活化、增殖及抗體產(chǎn)生的重要抗原。本文中CD19 升高,提示B 細胞增加激活。CD16+56 是NK 細胞的特異性標志,NK 可抑制B 細胞的增殖和抗體的產(chǎn)生,正常或亢進的NK 細胞可以減少自身抗體的產(chǎn)生。Johansson 等[10]發(fā)現(xiàn)激活的NKT 細胞能抑制ITP 的自身免疫反應(yīng)。NK 細胞活性降低,可致其對B 細胞激活、增殖、分化和抗體應(yīng)答的抑制能力下降,從而使B 細胞的異?；罨?產(chǎn)生自身抗體增加,體液免疫紊亂而發(fā)病。本文中,CD16 +56 下降,CD19 升高,亦證明了這一點。ITP 中一部分病例經(jīng)激素治療后血小板恢復(fù)正常,對其治療前后進行T細胞亞群測定,結(jié)果顯示,治療后CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 上升,CD19、CD8 下降。治療前后各指標有明顯差異,而治療后同正常組對比,無明顯差異?？赡転榧に氐纫种屏薎TP 患者T 淋巴細胞抗原的表達,下調(diào)血小板Fas 和Fas2L 蛋白的表達,減少CD4 T 淋巴細胞的清除,通過下調(diào)抗凋亡蛋白BCL-2 的過度表達,導致B 淋巴細胞凋亡比例上升[11]。說明在治療上應(yīng)用激素糾正了免疫功能紊亂,有利于疾病恢復(fù)。在臨床上作者遇到應(yīng)用激素無效,而應(yīng)用細胞免疫抑制劑環(huán)孢霉素膠囊治療有效的ITP例子,說明可能糾正了細胞免疫功能,同樣促進了疾病的好轉(zhuǎn)。

總之,ITP 發(fā)病機制復(fù)雜,細胞 免疫與體液免疫紊亂共同存在,本文僅從細胞免疫方面探討發(fā)病機制,動態(tài)觀察T 淋巴細胞亞群水平,對于ITP 發(fā)病機制探討、臨床治療、判斷療效均有一定的積極的意義。隨著研究的不斷深入,ITP 的發(fā)病機制會越來越清晰。

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