姜慧芬 張劍英 陳文虎

(浙江省腫瘤醫(yī)院,浙江 杭州 310022)

腫瘤標(biāo)志物(tumor marker,TM)用于腫瘤的輔助診斷、療效觀察、監(jiān)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后等越來越受到臨床重視[1],因此,TM 的快速準(zhǔn)確檢測有重要的臨床價(jià)值。可靠且穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品是確保TM 檢測質(zhì)量的重要保證[2]。目前國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室TM 檢測質(zhì)控品存在著單一項(xiàng)目質(zhì)控品操作繁瑣、液態(tài)質(zhì)控品穩(wěn)定性較差、進(jìn)口產(chǎn)品價(jià)格昂貴等諸多問題。鑒于上述情況,本研究中以正常人血清為基質(zhì),包含臨床實(shí)驗(yàn)室常用的15個(gè)TM 檢測項(xiàng)目凍干質(zhì)控品[3],現(xiàn)將其評價(jià)研究報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 AXSYM 全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)及配套試劑(美國Abbott 公司),ARCHITECT i2000全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)及配套試劑(美國Abbott 公司),羅氏2010 全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)及配套試劑(德國Roche 公司),FA1104 電子分析天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)。自制凍干多項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品批號為：20070201。

1.2 方法 (1)外觀：肉眼觀察自制凍干多項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品及其復(fù)溶后的物理性質(zhì);(2)瓶間差異評價(jià)：隨機(jī)抽取20 瓶同批自制凍干質(zhì)控品,平衡至室溫,分別利用分析天平精確稱量復(fù)溶前整瓶質(zhì)量和復(fù)溶倒出質(zhì)控血清后的空瓶質(zhì)量(空瓶經(jīng)去離子水洗滌并烘干后稱量),前后稱量的質(zhì)量差即為凍干質(zhì)控品的質(zhì)量;(3)室內(nèi)差異評價(jià)：隨機(jī)抽取20 瓶同批自制凍干質(zhì)控品,復(fù)溶并充分混勻,混合上述質(zhì)控品,連續(xù)檢測20次再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;(4)室間差異評價(jià)：本院及其它4 家三甲醫(yī)院共5 家醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室分別檢測自制凍干質(zhì)控品,再進(jìn)行分析;(5)穩(wěn)定性評價(jià)：置2～8℃中0、6、12 和18個(gè)月,分別隨機(jī)抽取20 瓶自制質(zhì)控品,復(fù)溶并混勻,當(dāng)日連續(xù)檢測20次,比較不同時(shí)間段自制凍干質(zhì)控品各項(xiàng)目結(jié)果的變異情況;(6)破壞性試驗(yàn)：隨機(jī)抽取自制凍干質(zhì)控品各20 瓶分別于37℃存放7 天,取出后復(fù)溶并充分混勻,當(dāng)日連續(xù)檢測20次,得到各項(xiàng)目均值和批內(nèi)變異值,并與未置37℃的自制凍干質(zhì)控品的結(jié)果進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0 統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù),進(jìn)行配對t 檢驗(yàn)和兩組獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 外觀 本凍干質(zhì)控品為乳酪色疏松體,復(fù)溶后澄明液體,無異物。

2.2 瓶間差異 1～20 號瓶自制質(zhì)控品質(zhì)量分別為：82.4mg、82.6mg、83.5mg、82.2mg、82.1mg、82.1mg、83.6mg、82.1mg、83.6 mg、82.1 mg、82.1mg、82.6mg、82.1mg、82.4mg、82.5mg、82.5mg、82.5mg、82.4mg、82.6mg、82.4mg,平均質(zhì)量為82.52mg,差異系數(shù)為0.60%。

2.3 室內(nèi)差異 自制凍干質(zhì)控品15個(gè)項(xiàng)目的均值,批內(nèi)OCV 值均小于5.0%,詳見表1。

2.4 室間差異 本院及其它4 家三甲醫(yī)院,共5家醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室(分別以H1、H2、H3、H4、H5 表示)應(yīng)用不同分析系統(tǒng)根據(jù)上述方法對不同的項(xiàng)目測定所得結(jié)果詳見表2。本實(shí)驗(yàn)室與其它4 家三甲醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室自制凍干質(zhì)控品的結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.5 穩(wěn)定性 自制凍干質(zhì)控品置2～8℃中6、12和18個(gè)月的測定結(jié)果與剛生產(chǎn)時(shí)(0月)的結(jié)果進(jìn)行比較,除了CA125 6個(gè)月、FER 18個(gè)月2項(xiàng)外(均P＜0.01),其它差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05),詳見表3。

表1 自制質(zhì)控品15個(gè)項(xiàng)目的均值和批內(nèi)OCV 值

表2 5 家不同實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果比較(±s)

表2 5 家不同實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果比較(±s)

注：A 為Abbott Architect 儀器檢測;B 為Bayer 儀器檢測;C 為Roche 儀器檢測;D 為Abbott AXSYM 儀器檢測;E 為Lumilo 儀器檢測;-為該單位沒有此項(xiàng)目檢測

表3 自制凍干質(zhì)控品于2～8℃置0、6、12 與18個(gè)月測定結(jié)果(n=20)

2.6 破壞性試驗(yàn) 自制凍干質(zhì)控品置37℃存放7天結(jié)果穩(wěn)定,與0 天結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05),詳見表4。

表4 制凍干質(zhì)控品于37℃置0、7 天結(jié)果(n=20)

3 討論

實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控(interal quality control,IQC)是質(zhì)量管理體系中的一個(gè)重要環(huán)節(jié),做好IQC 是確保TM 檢測質(zhì)量的重要保證。質(zhì)控品是開展室內(nèi)質(zhì)控工作的物質(zhì)前提,其性能特征包括一般性狀、瓶間差異、穩(wěn)定性等,與IQC 運(yùn)行有效性密切相關(guān)[4],根據(jù)物理性狀分類,質(zhì)控品主要有凍干質(zhì)控品和液體質(zhì)控品。凍干質(zhì)控品避免了液體質(zhì)控品穩(wěn)定性差、容易變質(zhì)、不易保存等缺點(diǎn)。

目前國內(nèi)尚無商品化生產(chǎn)自制凍干多項(xiàng)目TM質(zhì)控品。本研究以日常工作中檢測出的TM 高濃度血清為基礎(chǔ),將其調(diào)整至合適濃度,并以正常人血清為基質(zhì),經(jīng)精密分裝和真空冷凍干燥,自制了凍干多項(xiàng)目TM 質(zhì)控品,該凍干質(zhì)控品外觀為乳酪色疏松體,復(fù)溶后澄明液體,無異物;凈重相對變異系數(shù)為0.60%,瓶間分裝均一;自制凍干質(zhì)控品15個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)OCV 值均小于5.0%,變異程度小;本實(shí)驗(yàn)室與其它4 家三甲醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室由于開展的檢測項(xiàng)目不盡相同,由于條件所限,作者對自制質(zhì)控品的部分項(xiàng)目進(jìn)行檢測并比較,采用相同商品化進(jìn)口質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控,各項(xiàng)目檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),能滿足不同實(shí)驗(yàn)室日常質(zhì)控要求;長期穩(wěn)定性試驗(yàn)中將質(zhì)控品于2～8℃中置0、6、12 和18個(gè)月,除CA125 6個(gè)月、FER 18個(gè)月2項(xiàng)與0個(gè)月有差異外(考慮可能由于儀器、操作等因素引起),其余結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05),說明質(zhì)控品在2～8℃放置18個(gè)月基本穩(wěn)定,更長的保質(zhì)期有待進(jìn)一步研究;破壞性試驗(yàn)結(jié)果表明自制質(zhì)控品在37℃存放1周結(jié)果穩(wěn)定,已能滿足日常工作需要,延長使用時(shí)間尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上所述,自制凍干多項(xiàng)目TM 質(zhì)控品可靠且穩(wěn)定性好,能滿足日常室內(nèi)質(zhì)控的要求,且有原料來源豐富,能夠制備足夠多的同一批號產(chǎn)品;價(jià)格低廉,能有效地降低醫(yī)療成本;使用方便,一個(gè)質(zhì)控樣本就能達(dá)到對其不同檢測項(xiàng)目的監(jiān)控,克服了單項(xiàng)目質(zhì)控品操作繁瑣的弊端。因此該質(zhì)控品更適合我國國情,有利于扎實(shí)且有效地開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控,提高TM 檢測質(zhì)量。

[1]Meany D L,Sokoll L J,Chan D W.Early detection of cancer：immunoassays for plasma tumor markers,Expert OpinMed Diagn,2009,3(6)：597

[2]BenAyedM,BenHadj Hmida Y,Kassis M,et al.Quality control in tumor marker values：methlogy,results and potential problems.Tunis Med,2001,79(6-7)：341

[3]陳文虎,張劍英,張毅敏,等.多項(xiàng)目復(fù)合腫瘤標(biāo)志物凍干質(zhì)控品的制備.腫瘤學(xué)雜志,2009,15(6)：559

[4]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ).2 版.上海：上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2007：229