青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 柳永振 朱鳳華 寧雪嬌 朱連勤

霉菌毒素（mycotoxin）是真菌產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物，全球每年約有25%的作物受到霉菌毒素污染，造成的經(jīng)濟(jì)損失十分嚴(yán)重（CAST，2003）。污染嚴(yán)重且對(duì)人和動(dòng)物危害較大的霉菌毒素主要有：嘔吐毒素（deoxynivalenol，DON）、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）、T-2 毒素（T-2 toxin）、煙曲霉毒素（fumonisin，F(xiàn)UM）、赭曲霉毒素 A（ochratoxin，OTA） 以及黃曲霉毒素 B1（aflatoxin B1，AFB1）等。目前，對(duì)霉菌毒素的研究主要集中于單一毒素毒性的研究，但飼料及飼料原料中通常不僅僅存在一種毒素，而是多種毒素并存，并且聯(lián)合霉菌毒素的攝入對(duì)健康造成的不良影響比單一毒素的攝入風(fēng)險(xiǎn)更大，因此，本文就飼料中常見霉菌毒素的聯(lián)合毒性研究進(jìn)展作一綜述。

1 我國(guó)霉菌毒素的污染現(xiàn)狀

近年來(lái)，霉菌毒素的相關(guān)調(diào)查報(bào)告表明，我國(guó)飼料及飼料原料中霉菌毒素的檢出率和超標(biāo)率均達(dá)到了較高的水平，且多種霉菌毒素共存。王若軍和苗朝華（2003）研究報(bào)道，我國(guó)華南、華北和華中等地區(qū)的配合料中 ZEN、DON、FUM、AFB1、T-2毒素和OTA等6種霉菌毒素的污染較普遍，其檢出率在90%以上，其中FUM和DON的污染較為嚴(yán)重，ZEN和OTA的污染次之。敖志剛和陳代文（2008）對(duì)我國(guó)飼料及飼料原料霉菌毒素污染狀況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果表明，被檢的配合飼料樣品中ZEN、DON、FUM、AFB1和 OTA的檢出率均在95%以上，OTA和DON的檢出率高達(dá)100%，其中ZEN、FUM和DON的超標(biāo)率分別為65.3%、71.4%和83.7%，平均含量分別為241.70、1500.00 μg/kg 和 1300.00 μg/kg， 屬于重度污染。張丞和劉穎莉（2010）對(duì)全國(guó)各地的飼料和原料樣品中霉菌毒素污染狀況的調(diào)查顯示，配合飼料樣品中 ZEN、DON、FUM、AFB1和 OTA 陽(yáng)性率分別為 85.3%、97.8%、93.21%、19.6%和11.5%， 含量分別為 225、740、887、14.8 μg/kg 和7.1 μg/kg。 陳心儀（2011）研究報(bào)道，被檢玉米樣品中 AFB1、ZEN、DON、FUM、T-2 毒素和 OTA 等霉菌毒素污染均比較普遍，其中ZEN、FUM和DON屬重度污染。王金勇（2012）對(duì)全球配合飼料樣品進(jìn)行霉菌毒素的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，約90%的樣品霉菌毒素檢測(cè)呈陽(yáng)性，超過(guò)65%的樣品中存在2種或2種以上的霉菌毒素。配合飼料中AFB1、ZEN、DON、FUM 和 OTA 的陽(yáng)性檢出率分別為42%、58%、64%、64%和40%。由此可見，飼料及飼料原料中多種霉菌毒素同時(shí)存在的情況較為普遍，對(duì)于霉菌毒素危害的評(píng)估不能僅考慮單一毒素的危害，也要考慮多種霉菌毒素聯(lián)合毒性的危害。

2 霉菌毒素的聯(lián)合毒性

2.1 霉菌毒素的聯(lián)合毒性效應(yīng) 霉菌毒素間的聯(lián)合毒性非常復(fù)雜，與毒素種類和劑量、染毒宿主、作用時(shí)間等因素有關(guān)。霉菌毒素的聯(lián)合毒性效應(yīng)主要有協(xié)同效應(yīng)、加性效應(yīng)、拮抗效應(yīng)等。當(dāng)一種以上的霉菌毒素作用于動(dòng)物，對(duì)動(dòng)物的毒性與各單一毒素毒性作用的累加相等時(shí)即為加性效應(yīng)，若對(duì)動(dòng)物的毒性超過(guò)各單一毒素毒性作用的累加即為協(xié)同效應(yīng)，若對(duì)動(dòng)物的毒性低于各單一毒素毒性作用的累加即為拮抗效應(yīng)。霉菌毒素對(duì)動(dòng)物的毒性互作的協(xié)同效應(yīng)和加性效應(yīng)見表1（Katiak 和 Radka，2011）。

表1 霉菌毒素對(duì)動(dòng)物的毒性互作的協(xié)同效應(yīng)和加性效應(yīng)

2.2 兩種毒素的聯(lián)合毒性

2.2.1 AFB1和其他霉菌毒素的聯(lián)合毒性 通過(guò)對(duì)豬、肉雞、大鼠、小鼠等動(dòng)物進(jìn)行AFB1和FB1聯(lián)合染毒的毒性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)AFB1和FB1聯(lián)合時(shí)毒性增強(qiáng)，呈協(xié)同效應(yīng)或加性效應(yīng)。Harvey等（1995）將100 mg/kg FB1和2.5 mg/kg AFB1單獨(dú)和同時(shí)飼喂給生長(zhǎng)期公豬，試驗(yàn)至35 d時(shí)發(fā)現(xiàn)，AFB1組和FB1+AFB1組動(dòng)物日增重、飼料消耗顯著降低；而FB1組則無(wú)顯著變化，證明AFB1和FB1的聯(lián)合作用顯著降低了采食量和動(dòng)物日增重，并且兩者存在協(xié)同作用。孫桂菊等（2005）以灌胃的方式，單獨(dú)或聯(lián)合飼喂大鼠 AFB1（50 或 100 μg/kg）和 FB1（100 μg/kg）30 d， 結(jié)果表明，AFB1和 FB1存在聯(lián)合毒性作用，在動(dòng)物體內(nèi)存在相加作用或協(xié)同作用。Tessari等（2006）在肉雞飼料中分別添加0、50、200 mg/kg AFB1和 0、50、200 mg/kg FB1單獨(dú)和聯(lián)合染毒，試驗(yàn)周期期為8～41日齡，研究AFB1和FB1聯(lián)合染毒對(duì)肉仔雞的影響，結(jié)果表明，試驗(yàn)開始至肉雞41日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各霉菌毒素染毒組肉雞日增重降低，心臟相對(duì)重量增加，在單獨(dú)染毒200 mg/kg FB1，或與AFB1聯(lián)合染毒時(shí)，肝臟的相對(duì)重量才增加。試驗(yàn)開始至肉雞35日齡時(shí)，各霉菌毒素染毒組肉雞抗體滴度均降低，F(xiàn)B1與AFB1聯(lián)合染毒時(shí)肉雞抗體滴度更低。200 mg/kg AFB1和200 mg/kg FB1聯(lián)合染毒，肝臟膽管出現(xiàn)空泡變性及細(xì)胞增殖，腎小管出現(xiàn)水樣變性。結(jié)果證明，AFB1和FB1聯(lián)合染毒，對(duì)肉雞日增重、肝臟、免疫應(yīng)答的毒性呈加性效應(yīng)。Ribeiro等（2010）研究報(bào)道，與單一毒素染毒相比，不同濃度的FB1和AFB1同時(shí)染毒未顯著改變大鼠肝細(xì)胞存活率，但誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡存在時(shí)間和毒素的濃度呈依賴性。

Golli-Bennour等（2010）在猴腎 Vero細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)中添加單一或組合的AFB1和OTA檢測(cè)其對(duì)該細(xì)胞的毒性，結(jié)果表明，AFB1和OTA引起的細(xì)胞存活率的顯著減少呈劑量依賴性；AFB1和OTA聯(lián)合引起DNA片段化水平的增加，AFB1和OTA似乎參與細(xì)胞凋亡過(guò)程，AFB1和OTA聯(lián)合時(shí)具有加性效應(yīng)。而 Wangikar（2007、2005）研究AFB1和OTA聯(lián)合對(duì)新西蘭兔和小鼠胚胎毒性影響，結(jié)果表明，AFB1和OTA存在拮抗效應(yīng)，二者聯(lián)合可減輕對(duì)胚胎的毒害。

2.2.2 單端孢烯族霉菌毒素和其他霉菌毒素的聯(lián)合毒性 單端孢烯族霉菌毒素包括DON、T-2 toxin、ZEN等毒素，這類霉菌毒素同時(shí)存在時(shí)毒性作用往往增強(qiáng)。Feng等（2008）研究報(bào)道，1 mg/kg DON和250 μg/kg ZEN分別單獨(dú)作用于豬時(shí)是安全的劑量，但當(dāng)兩者在該劑量下同時(shí)染毒時(shí)導(dǎo)致豬發(fā)生嚴(yán)重的病變。Ficheux等（2012）通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的造血前體細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)添加DON、T-2 toxin和ZEN等霉菌毒素兩兩組合，觀察聯(lián)合毒素對(duì)骨髓的影響，結(jié)果表明，DON和T-2 toxin同時(shí)染毒時(shí)，對(duì)骨髓毒性具有協(xié)同作用；DON和ZEN、T-2 toxin和ZEN染毒時(shí)，對(duì)骨髓毒性具有加性效應(yīng)。Sugiyama等（2011）研究報(bào)道，DON和雪腐鐮刀菌烯醇組合的毒性具有加性效應(yīng)。

與單一毒素相比，DON和FB同時(shí)染毒對(duì)動(dòng)物造成的危害更大。Grenier等（2011）在仔豬日糧中添加3 mg/kg DON和6 mg/kg FB單一或兩種毒素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單一或兩種毒素對(duì)仔豬的生產(chǎn)性能無(wú)影響，對(duì)血液生化指標(biāo)影響很?。籇ON和FB同時(shí)染毒時(shí)，引起仔豬肝臟、肺臟和腎臟發(fā)生病變，并且肝臟病變最嚴(yán)重；染毒組接種疫苗后血漿中IgG水平降低，抗原刺激后淋巴細(xì)胞增殖減少，特異性免疫發(fā)生改變；染毒仔豬脾臟中細(xì)胞因子IL-8、IL-1b、IL-6和巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1 b的表達(dá)量顯著降低，結(jié)果表明，與單一毒素相比，DON和FB同時(shí)染毒，會(huì)引起仔豬更大的病理組織學(xué)變化和更強(qiáng)的免疫抑制。

Lusky等（2001）對(duì)體重為50～69 kg仔豬飼喂含OTA、ZEN和DON單獨(dú)或組合的飼料，90 d后觀察單一毒素及聯(lián)合毒素對(duì)仔豬健康狀況并檢測(cè)組織器官中毒素的殘留量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由于OTA，ZEN和DON代謝速度快，1000 μg/kg DON和250 μg/kg ZEN單獨(dú)或與其他毒素組合不能導(dǎo)致器官與組織的殘留。OTA、ZEN和DON同時(shí)染毒時(shí)并未觀察到有明確的相加或協(xié)同作用。

2.2.3 OTA和其他霉菌毒素的聯(lián)合毒性 在細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)中添加OTA和FB1，檢測(cè)毒素對(duì)C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、Caco-2細(xì)胞、Vero細(xì)胞的毒性，結(jié)果表明，OTA和FB1組合的毒性具有協(xié)同效應(yīng)（Creppy 等，2004）。 Domijan 等（2007）研究報(bào)道，大鼠口服 OTA （5 ng/kg·bw 和 50 μg/kg·bw）和FB1（200 ng/kg·bw 和 50 μg/kg·bw）或其組合，結(jié)果表明，與對(duì)照組及相應(yīng)劑量的霉菌毒素組相比，低劑量OTA+FB1組增加了肝臟和腎臟的丙二醛濃度和蛋白羰基含量，而未改變腎臟中過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶的活性；低劑量OTA+FB1組幾乎影響到所有的參數(shù)，這表明其可能產(chǎn)生氧化損傷。通過(guò)OTA和桔霉素聯(lián)合作用于雞胚的毒性試驗(yàn)，證實(shí)，OTA和桔霉素聯(lián)合呈加性效應(yīng)（Veselá 等，1983）。

2.3 三種毒素的聯(lián)合毒性 目前，對(duì)三種或更多種霉菌毒素間的聯(lián)合毒性的研究較少。通過(guò)對(duì)肉雞飼喂含OTA、FB1和T-2毒素單一或組合的飼料，試驗(yàn)至21 d，OTA、FB1和T-2毒素中任意兩種毒素組合對(duì)肉雞日增重、采食量和血清中GGT的含量的作用呈協(xié)同效應(yīng)，而與任意兩種毒素組合相比，三種毒素同時(shí)飼喂時(shí)其毒性并未增強(qiáng) （Raju 和 Deuegouda，2000）。 Kouadio 等（2007） 通過(guò)研究 FB1、ZEN、DON 兩兩或三元組合對(duì)Caco-2細(xì)胞系的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些霉菌毒素之間相互組合導(dǎo)致細(xì)胞活力降低的遞增順序?yàn)椋篎B1+ZEN＜FB1+DON＜ZEN+DON＜FB1+DON+ZEN；與單一毒素相比，F(xiàn)B1和雌二醇和/或ZEN提高了Caco-2細(xì)胞活性；ZEN或FB1和DON組合在發(fā)揮脂質(zhì)過(guò)氧化作用時(shí)呈協(xié)同效應(yīng)；10 μmol的 ZEN、DON、FB1抑制 DNA 合成的能力分別為 45%、70%和43%，而 ZEN、DON、FB1三種毒素每種濃度為 10 μmol兩兩組合抑制DNA合成的能力分別為35%、62%和65%，遠(yuǎn)低于加性效應(yīng)，濃度為分別10 μmol的ZEN、DON、FB1三種毒素組合抑制DNA合成的能力僅為25%；ZEN、DON、FB1單一毒素可誘導(dǎo) DNA 斷裂，而這些霉菌毒素聯(lián)合時(shí)對(duì)DNA的破壞程度更大，結(jié)果證明，ZEN、DON、FB1聯(lián)合時(shí)，能引起脂質(zhì)過(guò)氧化，DNA損傷、DNA片段化、DNA甲基化，并對(duì)Caco-2細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性。在細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)中添加單一或組合的DON、T-2 toxin和白僵菌素（Beauvericin，BEA）檢測(cè)其對(duì) CHO-K1細(xì)胞的毒性，結(jié)果表明，DON、T-2 toxin和BEA聯(lián)合時(shí)其細(xì)胞毒性呈協(xié)同效應(yīng)。而通過(guò)對(duì)Vero細(xì)胞的毒性試驗(yàn)表明，Vero細(xì)胞染毒后24、48 h和 72 h 時(shí) BEA+DON、BEA+T-2 toxin、DON+T-2 toxin和BEA+DON+T-2 toxin呈拮抗效應(yīng)，其中拮抗最顯著的是DON+T-2 toxin組 （Ruiz等，2011a、2011b）。

3 展望

近年來(lái)，飼料中多種霉菌毒素共存的現(xiàn)象較為普遍，隨著霉菌毒素聯(lián)合毒性研究的開展，對(duì)霉菌毒素間的毒性互作效應(yīng)的認(rèn)識(shí)不斷加深。目前，關(guān)于霉菌毒素聯(lián)合毒性研究多集中于兩種毒素之間，而三種或更多種霉菌毒素的聯(lián)合毒性的報(bào)道較少，且霉菌毒素聯(lián)合毒性的機(jī)理尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

[1]敖志剛，陳代文.2006-2007年中國(guó)飼料及飼料原料霉菌毒素污染調(diào)查報(bào)告[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2008，35（1）：152 ～ 155.

[2]陳心儀.2009-2010年中國(guó)部分省市飼料原料及配合飼料的霉菌毒素污染概況[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2011，2：7 ～ 9.

[3]孫桂菊，王少康，王加生.伏馬菌素B1與黃曲霉毒素B1對(duì)大鼠的聯(lián)合毒性[J].毒理學(xué)雜志，2005，19（3）：186.

[4]王金勇.2011年全球霉菌毒素調(diào)查報(bào)告[J].中國(guó)畜牧雜志，2012，48（14）：49～52.

[5]王若軍，苗朝華.中國(guó)飼料及飼料原料受霉菌污染的調(diào)查報(bào)告[J].飼料工業(yè)，2003，24（7）：53 ～ 54.

[6]張丞，劉穎莉.2009年中國(guó)飼料和原料中霉菌污染情況調(diào)查[J].中國(guó)家禽，2010，32（6）：67 ～ 69.

[7]Bouaziz C，Bouslimi A，Kadri R，et al.The in vitro effects of zearalenone and T-2 toxins on Vero cells[J].Food Chem Toxicol，2011，49（10）：2718 ～2724.

[8]Creppy E E，Chiarappa P，Baudrimont I，et al.Synergistic effects of fumonisin B1and ochratoxin A；are in vitro cytotoxicity data predictive of in vivo acute toxicity[J].Toxicology，2004，201（1 ～ 3）：115 ～ 123.

[9]CAST(Council for Agriculture Science and Technology）.Mycotoxins risks in plant，animal and human system.Task Force Report 139[R].CAST：Ames，IA.

[10]Domijan A M，Peraica M，Vrdoljak A L，et al.The involvement of oxidative stress in ochratoxin A and fumonisin B1 toxicity in rats[J].Molecular Nutrition&Food Research，2007，51（9）：1147 ～ 1151.

[11]Feng C，Yulin M，Chunyi X，et al.The combination of deoxynivalenol and zearalenone at permitted feed concentrations causes serious physiological effects in young pigs[J].Journal of Veteryinary Science，2008，9（1）：39 ～ 44.

[12]Ficheux A S，Sibiril Y，Parent-Massin D.Co-exposure of Fusarium mycotoxins；In vitro myelotoxicity assessment on human hematopoietic progenitors[J].Toxicon，2012，60（6）：1171 ～ 1179.

[13]Grenier B，Loureiro-Bracarense A P，Lucioli J，et al.Individual and combined effects of subclinical doses of deoxynivalenol and fumonisins in piglets[J].Mol Nutr Food Res，2011，55（5）：761 ～ 771.

[14]Golli-Bennour E E，Kouidhi B，Bouslimi A，et al.Cytotoxicity and genotoxicity induced by aflatoxin B1，ochratoxin A，and their combination in cultured Vero cells [J].Journal of Biochemical and Molecular Toxicology，2010，24（1）：42 ～ 50.

[15]Harvey R B，Edrington T S，Kubena L F，et al.Influence of aflatoxin and fumonisin B1-containing culture material on growing barrows[J].American Journal of Veterinary Research，1995，56（12）：1668 ～ 1672.

[16]Katia P，Radka B.Synergistic effects of mycotoxins discussed[J].Feedstuffs，2011，83（19）：1 ～ 3.

[17]Kouadio J H，Dano S D，Moukha S，et al.Effects of combinations of Fusarium mycotoxins on the inhibition of macromolecular synthesis，malondialdehyde levels，DNA methylation and fragmentation，and viability in Caco-2 cells[J].Toxicon，2007，49：306 ～ 317.

[18]Lusky K，G·obel R，Tesch D，et al.Untersuchungen zur Tiergesundheit，Leistung und zum Rfickstandsverhalten beim Schwein bei gleichzeitiger Aufnahme der Mykotoxine Ochratoxin A，Deoxynivalenol，Zearalenon fiber das Futter im 90-Tage-Test[J].Tierartzliche Umschau，2002，56：15 ～ 20.

[19]Raju M V，Devegowda G.Influence of esterified-glucomannan on performance and organ morphology，serum biochemistry and haematology in broilers exposed to individual and combined mycotoxicosis（aflatoxin，ochratoxin and T-2 toxin）[J].Br Poult Sci，2000，41（5）：640 ～ 650.

[20]Ruiz M J，Macáková P，Juan-García A，et al.Cytotoxic effects of mycotoxin combinations in mammalian kidney cells[J].Food Chem Toxicol，2011，49（10）：2718 ～ 2724.

[21]Ruiz M J，F(xiàn)ranzova P，Juan-García A，et al.Toxicological interactions between the mycotoxins beauvericin，deoxynivalenol and T-2 toxin in CHOK1 cells in vitro[J].Toxicon，2011，58（4）：315 ～ 326.

[22]Ribeiro D H，F(xiàn)erreira F L，da Silva V N，et al.Effects of Aflatoxin B1 and Fumonisin B1on the Viability and Induction of Apoptosis in Rat Primary Hepatocytes[J].Int J Mol Sci，2010，11（4）：1944 ～ 1955.

[23]Sugiyama K，Kawakami H，Kamata Y，et al.Effect of a combination of deoxynivalenol and nivalenol on lipopolisaccharide-induced nitric oxide production by mouse macrophages[J].Mycotox Res，2011，27：57 ～ 62.

[24]Tessari E N，Oliveira C A，Cardoso A L，et al.Effects of aflatoxin B1 and fumonisin B1on body weight，antibody titres and histology of broiler chicks[J].British Poultry Science，2006，47（3）：357 ～ 364.

[25]Veselá D，Veselˊy D，Jelínek R.Toxic effects of ochratoxin A and citrinin，alone and in combination，on chicken embryos[J].Appl Environ Microbiol，1983，45（1）：91 ～ 93.

[26]Wangikar P B，Dwivedi P，Sinha N，et al.Teratogenic effects in rabbits of simultaneous exposure to ochratoxin A and aflatoxin B1with special reference to microscopic effects[J].Toxicology，2005，215（1 ～ 2）：37 ～ 47.

[27]Wangikar P B，Sinha N，Dwivedi P，et al.Teratogenic Effects of Ochratoxin A and Aflatoxin B1Alone and in Combination on Post-Implantation Rat Embryos in Culture[J].Journal of the Turkish German Gynecological Association，2007，8（4）：357 ～ 364.