張月

（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，海南 ?？?571101）

丙環(huán)唑和戊唑醇屬于三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基抑制劑，具有保護(hù)、治療、鏟除三大功能，殺菌譜廣、持效期長[1]。丙環(huán)唑的英文通用名稱：Propiconazole，分子式：C15H17N3O2Cl2，分子量：342.2，CAS號：60207-90-1，常用于防治香蕉葉斑病、葉條斑病，殘效期在1個月左右，一般只對皮膚和眼有刺激作用，經(jīng)口誤服，可引起惡心、嘔吐等；戊唑醇的英文通用名稱：Tebuconazole，分子式：C16H22CN3O，分子量：307.8，CAS 號：107534-96-3[2]，常用于防治香蕉葉斑病、黑星病。試驗采用氣相色譜和高效液相色譜分析方法，在兩種儀器上同時檢測兩種農(nóng)藥，優(yōu)化色譜分析條件，對比兩種分析方法的回收率，為檢測單位提供更多分析方法的基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

試驗儀器：氣相色譜儀TRACE GC Ultra（NPD），高效液相色譜儀Waters2695配2489紫外檢測器，電子頂載天平，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀及各種玻璃器皿。

試驗試劑：丙酮、氯化鈉、乙腈、正己烷、二氯甲烷、甲醇（分析純）；甲醇、乙腈（色譜純）。

1.2 藥劑和香蕉樣品

試驗藥劑：丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品，100 mg/L國家標(biāo)準(zhǔn)樣品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所研制）；戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)品，100 mg/L國家標(biāo)準(zhǔn)樣品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所研制）。

香蕉樣品：供試香蕉樣品來源于?？谑行阌^(qū)永莊香蕉基地，未噴施丙環(huán)唑和戊唑醇?xì)⒕鷦?/p>

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 GC法 從100 mg/L丙環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別移取0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，貯備液濃度為5 μg/mL。從貯備液中分別移取 0.1、0.2、0.4、1.0、2 mL 于 10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，上機(jī)液濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 μg/mL。

1.3.2 HPLC法 從100 mg/L丙環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別移取0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，貯備液濃度為5 μg/mL。從貯備液中分別移取 0.1、0.2、0.4、1.0、2 mL 于 10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，上機(jī)液濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 μg/mL。

1.4 添加回收率

稱取25.00±1.00 g香蕉全果，置于150 mL燒杯中，分別滴加丙環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)品1.25×10-3mg、2.5×10-3mg、1.25×10-2mg 于香蕉樣品中，得到濃度為0.05、0.1、0.5 mg/kg的待測試樣。

1.5 樣品前處理[3]

1.5.1 GC法提取 稱取待測試樣25.00±1.00 g，置于150 mL燒杯中，加入50 mL乙腈，在勻漿機(jī)中勻漿2 min，過濾于裝有7.0 g左右氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液，蓋上蓋子，劇烈搖動2 min，在室溫下靜止30 min，待乙腈相與水相分層。

凈化：吸取10.0 mL上清液，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入2 mL正己烷溶解，將SPE弗羅里硅柱依次用5.0 mL丙酮+正己烷（體積比 10∶90，下同）、5.0 mL 正己烷預(yù)淋洗，樣品全部轉(zhuǎn)移至色譜柱上，用10 mL丙酮+正己烷分3次淋洗，洗脫液收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加正己烷定容至2.5 mL，待測。

1.5.2 HPLC法提取 稱取待測試樣25.00±1.00 g，置于150 mL燒杯中，加入50 mL乙腈，在勻漿機(jī)中勻漿2 min，過濾于裝有7.0 g左右氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液，蓋上蓋子，劇烈搖動2 min，在室溫下靜止30 min，待乙腈相與水相分層。

凈化：吸取10.0 mL上清液，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入2 mL二氯甲烷+甲醇（體積比95∶5，下同）溶解，將NH2柱用5.0 mL二氯甲烷+甲醇預(yù)淋洗，樣品全部轉(zhuǎn)移至色譜柱上，再用10 mL二氯甲烷+甲醇分3次淋洗，洗脫液收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用甲醇定容至2.5 mL，待測。

1.6 色譜條件

1.6.1 GC法 色譜柱：ZB-35（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；升溫程序：初始溫度100℃，保持0.3 min，再以30℃/min速度升溫至255℃，保持8 min，然后以35℃/min升溫至280℃，保持4 min。進(jìn)樣口溫度：250℃；NPD 檢測器溫度：300℃；高純氮氣（純度99.999%）為載氣；氮氣流速：1.5 mL/min；空氣流速：60 mL/min；氫氣流速：2.5 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL。

1.6.2 HPLC法 色譜柱：C18（150 m×4.6 mm×5 μm）；流動相：乙腈:水為 55:45；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；波長：225 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜方法

在氣相色譜分析方法中，丙環(huán)唑為雙峰，丙環(huán)唑和戊唑醇的保留時間是5.61 min和5.76 min，峰型對稱，出峰集中。標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖見圖1。

圖1 丙環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（GC法）

2.2 高效液相色譜方法

在高效液相色譜分析方法中，丙環(huán)唑和戊唑醇的保留時間是9.415 min和7.250 min，峰型對稱，出峰集中。標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖見圖2。

圖2 丙環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（HPLC法）

2.3 兩種方法的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度

丙環(huán)唑和戊唑醇在香蕉全蕉中的最低檢測濃度是0.05 mg/kg。采用外標(biāo)法峰面積定量，添加回收率用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，添加濃度及回收率結(jié)果見表1。GC方法中，用正己烷作溶劑，配制丙環(huán)唑和戊 唑 醇 混 合 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 ：0.05、0.10、0.20、0.50、1.0 mg/L，在上述儀器的條件下測定，得出丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=1.204 11×10-7x，相關(guān)系數(shù)R2=0.997；戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=1.533 67×10-7x，相關(guān)系數(shù)R2=0.997。HPLC方法中，用甲醇作溶劑，配制丙環(huán)唑和戊唑醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mg/L，在上述儀器的條件下進(jìn)行測定，得出丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=3.29×104x-6.13×102，相關(guān)系數(shù)R2=0.998；戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=1.84×104x+1.11×102，相關(guān)系數(shù) R2=1.000。

從表1中可知，GC方法中，丙環(huán)唑在香蕉中平均回收率為86.9%～111.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0%～7.4%；戊唑醇在香蕉中平均回收率為104.0%～115.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.1%～6.5%；HPLC方法中，丙環(huán)唑在香蕉中平均回收率為77.2%～93.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.1%～8.9%；戊唑醇在香蕉中平均回收率為102.0%～106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.5%～7.5%；均符合農(nóng)藥殘留分析的要求[4]。相關(guān)譜圖見圖 3～圖 6。

表1 丙環(huán)唑和戊唑醇在香蕉全蕉中的添加回收率

3 結(jié)論

試驗采用氣相色譜法和高效液相色譜法同時檢測香蕉中丙環(huán)唑和戊唑醇。其方法操作簡單，方法準(zhǔn)確度、精密度均符合農(nóng)藥殘留量檢測要求。

[1]王愛華，徐寶強(qiáng).戊唑醇使用方法[J].河北果樹，2009，（3）：41.

[2]湯 婕，岳永德，花日茂，等.香蕉中戊唑醇?xì)埩舴治龇椒ǖ谋容^研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008（35）：275-279.

[3]NY/T 761-2008.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2008.

[4]NY/T 788-2004.農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.