宋 頌，華 潔，周福軍，呂鵬月，孫燕錦，侯文彬

(1．天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193;2．天津藥物研究院，天津 300193;3．北京歐博方醫(yī)藥科技有限公司，北京 100085)

環(huán)氧合酶－2(COX－2)抑制劑成為一類新的非甾體類抗炎藥，可迅速的緩解骨關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎引起的疼痛［1］。維他昔布為新型的COX－2抑制劑，可特異性地抑制COX－2，阻止炎性前列腺素類物質(zhì)的產(chǎn)生，起到抗炎、鎮(zhèn)痛及退熱作用，適用于緩解犬骨關(guān)節(jié)炎引起的疼痛和炎癥，用于骨或軟組織圍手術(shù)期治療管理。對于因為骨關(guān)節(jié)炎造成慢性疼痛的犬類的治療，目前所使用的方法包括:抗發(fā)炎和止痛藥物、舒緩疾病的骨性關(guān)節(jié)炎藥物等。該藥用于治療犬類骨關(guān)節(jié)炎所引起的痛疼和炎癥具有口服后快速吸收，廣泛分布，生物利用度高的優(yōu)點。

目前，在我國維他昔布咀嚼片(Vitacoxib chewable tablets)尚未上市，維他昔布咀嚼片的體外溶出度研究國內(nèi)外均未見文獻報道，而溶出度是評價藥物制劑質(zhì)量的重要依據(jù)［2］。為此，對其進行了相關(guān)研究，建立了該片劑的體外溶出度測定方法。

1 儀器與試劑

1．1 儀器 UV－1601型紫外分光光度儀(日本島津)、ZRS－8G智能溶出試驗儀(天津大學(xué)無線電廠)、BP211D－電子天平(Sartorius公司)

1．2 藥品與試劑 維他昔布對照品為北京歐博方醫(yī)藥科技有限公司提供(批號:30080－098A1);維他昔布咀嚼片(天津藥物研究院自制，批號20120105，20120106，20120107);十二烷基硫酸鈉為化學(xué)純，鹽酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純，蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 對照品溶液和供試品溶液的制備

2．1．1 對照品溶液的制備 精密稱取維他昔布對照品適量，用甲醇溶解制成每1 mL含維他昔布0．25 mg的對照品儲備液，精密吸取對照品儲備液適量，用0．8%十二烷基硫酸鈉溶液稀釋制成每1 mL含維他昔布0．01 mg的溶液，即得。

2．1．2 供試品溶液的制備 精密稱取本品約30 mg，置于50 mL量瓶中，加0．8%十二烷基硫酸鈉溶液適量，超聲處理30 min，用0．8%十二烷基硫酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2 mL置10 mL量瓶，加0．8%十二烷基硫酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．2 溶出方法 按照《獸用化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》與《中國獸藥典2010年版》一部［3］中溶出度的有關(guān)內(nèi)容，維他昔布咀嚼片為片劑，選擇槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min。

2．3 溶出介質(zhì)的選擇

2．3．1 維他昔布為難溶性藥物 因此選擇了多種溶出介質(zhì)進行研究。

方法:槳法，溫度37℃，轉(zhuǎn)速:50 r/min，溶出介質(zhì)體積為 900 mL。介質(zhì):水、0．1 mol/L HCl、磷酸鹽緩沖液(pH6．8)、0．5%十二烷基硫酸鈉溶液。

以45 min為取樣時間，取樣后在244 nm的波長處測定吸光度，結(jié)果見表1。

表1 維他昔布咀嚼片在不同介質(zhì)中的溶出度結(jié)果表

結(jié)果表明，維他昔布咀嚼片在水、0．1 mol/L HCl和磷酸鹽緩沖液(pH6．8)中，均不能完全溶出，必須加入適量的十二烷基硫酸鈉來增加藥物的溶解。

2．3．2對十二烷基硫酸鈉的加入量進行進一步的研究，結(jié)果見表2。

表2 維他昔布咀嚼片在不同濃度的十二烷基硫酸鈉溶液中的溶出度結(jié)果表

結(jié)果表明，維他昔布咀嚼片在0．8%十二烷基硫酸鈉溶液中，在45 min時，溶出度已達到80%以上，符合要求，因此確定維他昔布咀嚼片的溶出介質(zhì)為0．8%十二烷基硫酸鈉溶液。

2．4 取樣時間的確定 取維他昔布咀嚼片(20120105批)6片，采用槳法，溫度37℃，轉(zhuǎn)速:50 r/min，以0．8%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，介質(zhì)體積為 900 mL，分別在 5、10、20、30、45、60 min取樣，在247 nm的波長處測定吸光度，考察其溶出曲線。結(jié)果見表3。

表3 維他昔布咀嚼片溶出度曲線結(jié)果表

結(jié)果表明，在30 min時，溶出度已達到80%以上，符合要求，因此確定維他昔布咀嚼片溶出取樣時間為30 min。

2．5 專屬性 取維他昔布咀嚼片與空白輔料分別研成粉末，取適量用0．8%十二烷基硫酸鈉溶液溶解，濾過，取續(xù)濾液制成供試品溶液。照紫外－可見分光光度法［3］在200～400 nm之間進行全波長掃描，結(jié)果顯示，維他昔布咀嚼片在247 nm的波長處有最大吸收，輔料于247 nm處無吸收，不影響測定。因此確定維他昔布咀嚼片溶出度的檢測波長為247 nm。

2．6 線性范圍 精密稱取維他昔布對照品適量，用甲醇溶解制成每1 mL含維他昔布0．25 mg的對照品溶液，精密吸取對照品溶液適量，加0．8%十二烷基硫酸鈉溶液稀釋制成每1 mL含維他昔布0．05 mg的溶液，作為對照品儲備液。精密吸取對照品貯備液0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5 mL 移入 10 mL量瓶中，加0．8%十二烷基硫酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 0．002496、0．004992、0．007488、0．009984、0．01248、0．014976、0．017472 mg/mL 的一系列溶液。在247 nm的波長處測定吸光度，將吸光度(Y)對濃度(X)結(jié)果進行回歸分析，得線性方程為 Y=50．78X+0．002(r=0．9995)，即維他昔布濃度在0．002496～0．017472 mg/mL范圍內(nèi)，與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2．7 回收率試驗 取維他昔布咀嚼片(20120105批)，研細，分別稱取9份，每份約15 mg(半量)，置50 mL量瓶中，每3份分別精密加入相當(dāng)于半量濃度的80%，100%和120%的維他昔布對照品溶液，按2．1．2項下的方法，制成樣品溶液，在247 nm的波長處測定吸光度，結(jié)果見表4。

表4 維他昔布咀嚼片含量測定加樣回收率試驗結(jié)果表

結(jié)果測得，維他昔布咀嚼片加樣回收率的平均值為102．9%，RSD 為1．36%。

2．8 重復(fù)性 取維他昔布咀嚼片(20120105批)，研細，分別稱取6份，按2．1．2項下的方法，制成樣品溶液，在247 nm的波長處測定吸光度，含量分別為 0．0554、0．0553、0．0553 、0．0565、0．0558、0．0547、0．0555 mg/mg，重復(fù)性試驗的 RSD 為1．09%，本方法重復(fù)性良好。

2．9 溶液的穩(wěn)定性 取重復(fù)性項下的樣品，分別于 0、1、2、4、8 h，在 247 nm 的波長處測定吸光度，0、1、2、4、8 h 的吸光度分別為 0．347、0．346、0．345、0．347、0．347，穩(wěn)定性試驗的 RSD 為 0．26%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．10 重現(xiàn)性試驗 取本品三批(20120105、20120106、20120107)各6片，照《中國獸藥典2010年版》一部溶出度測定法第二法槳法，0．8%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，體積為900 mL，溫度37℃，以50 r/min鐘的轉(zhuǎn)速，依法分別操作，經(jīng)5、10、20、30、45、60 min 后，取溶液 5 mL，及時補充相同體積的溶出介質(zhì)，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。在247 nm的波長處測定吸光度，結(jié)果見圖1，重現(xiàn)性良好，質(zhì)量穩(wěn)定。

圖1 三批維他昔布咀嚼片的溶出度重現(xiàn)性結(jié)果圖

2．11 均一性試驗 取本品(20120105批)6片，同“2．7”項下操作，測定其溶出度。結(jié)果見圖2，溶出均一性好，質(zhì)量穩(wěn)定。

圖2 維他昔布咀嚼片溶出均一性試驗結(jié)果表

2．12 三批樣品溶出度的測定 取本品三批(20120105、20120106、20120107)各 6 片，照《中國獸藥典2010年版》一部溶出度測定法第二法槳法，0．8%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，體積為900 mL，溫度37℃，以50 r/min的轉(zhuǎn)速，依法分別操作，30 min取樣，在247 nm的波長處測定吸光度，維他昔布咀嚼片三批樣品的平均溶出度84．87%、85．14%、86．15%，三批樣品30 min時溶出度均達到80%以上，符合《中國獸藥典2010年版》一部要求。

3 討論與結(jié)論

3．1 溶出度系指藥物從片劑或膠囊劑等固體制劑在規(guī)定條件下溶出的速度和程度［2］。是一種模擬內(nèi)服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外實驗方法。維他昔布為難溶性藥物，一般認(rèn)為，難溶性藥物、因制劑處方與生產(chǎn)工藝造成臨床療效不穩(wěn)定的藥物以及治療量與中毒量相接近的藥物，其口服制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中必須設(shè)定溶出度檢查項。藥物進入體內(nèi)，需經(jīng)過崩解、溶出才能被機體吸收而發(fā)揮藥效，因此，溶出速度的快慢會對藥效產(chǎn)生影響，它是評價藥物制劑質(zhì)量的重要依據(jù)。

3．2 在溶出介質(zhì)的選擇試驗中，選擇244nm作為紫外檢測波長測定吸光度是由于在預(yù)實驗中溶出介質(zhì)尚未確定，因而參考了原料藥的最大吸收波長244nm。在專屬性研究中，測定了維他昔布咀嚼片在選定的溶出介質(zhì)中的最大吸收波長為247nm，因此在之后的研究中采用247nm作為溶出度試驗的紫外檢測波長。

3．3 在選擇溶出介質(zhì)的研究中，先進行了預(yù)實驗，測定了維他昔布在各種介質(zhì)中的平衡溶解度，篩選出四種介質(zhì)后，進行了溶出度考察和篩選，最后確定為0．8%十二烷基硫酸鈉溶液。

3．4 謝沐風(fēng)的研究中［4］建議采用900mL作為溶出介質(zhì)體積，由于900mL與人體消化道內(nèi)的體液總體積較為接近，增加其體內(nèi)外的相關(guān)性。另外，維他昔布咀嚼片規(guī)格為30mg，根據(jù)平衡溶解度的預(yù)實驗，900mL也可以滿足漏槽條件。所以試驗中介質(zhì)體積確定為900mL。

本法通過對維他昔布咀嚼片溶出度線性關(guān)系、回收率、重復(fù)性和溶液穩(wěn)定性的方法學(xué)的驗證，確認(rèn)本方法準(zhǔn)確，可用于維他昔布咀嚼片的體外溶出度測定。

［1］ Brooks，PM，DayRO．Cox － 2Inhibitors［J］．MedicalJournalof Australia，2000，177(8):433 －436．

［2］ 尹燁華，梁文濤，余永鵬，等．恩諾沙星微囊體外溶出度的研究［J］．中國獸藥雜志，2011，2:20 －22．

［3］ 中國獸藥典委員會．中國獸藥典2010年版一部［S］．附錄26－27．

［4］ 謝沐風(fēng)．科學(xué)、客觀地制訂溶出度試驗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［C］．藥品技術(shù)審評論壇，2012，1(35):23．