胡奇豐，柳建發(fā)

血吸蟲病是世界上嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病之一?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)對(duì)人類致病的血吸蟲主要有以下3種：埃及血吸蟲、曼氏血吸蟲和日本血吸蟲［1］。我國流行的是日本血吸蟲，主要分布于長(zhǎng)江流域及以南的廣大流域，大多為我國農(nóng)業(yè)生長(zhǎng)的重要基地，人口密集。血吸蟲病嚴(yán)重危害人民的健康和經(jīng)濟(jì)發(fā)展。

日本血吸蟲病是日本血吸蟲寄生在門靜脈系統(tǒng)所引起的疾病，主要病變?yōu)楦闻c結(jié)腸由蟲卵引起的肉芽腫。目前，吡喹酮是治療血吸蟲病的首選藥物［2］，但國外報(bào)道指出，已發(fā)現(xiàn)對(duì)吡喹酮具有抗藥性的蟲株［3－4］。因此，臨床上急需一種新的抗血吸蟲病的藥物。大量研究結(jié)果顯示，臨床使用的免疫抑制劑環(huán)孢素A（CsA）不僅能有效殺滅體內(nèi)瘧原蟲、血吸蟲、絳蟲和線蟲等多種寄生蟲，具有廣譜抗寄生蟲的功能，而且對(duì)人和動(dòng)物寄生蟲都有著良好的預(yù)防和治療作用［5］。研究結(jié)果表明，CsA在體內(nèi)外對(duì)曼氏血吸蟲的抗蟲效果尤其顯著，體內(nèi)用藥效果根據(jù)相對(duì)感染的治療時(shí)間、給藥的途徑、劑量而呈現(xiàn)不同，但目前其抗蟲機(jī)制尚不明確［6－7］。而CsA對(duì)體內(nèi)抗日本血吸蟲的作用效果還未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)主要通過長(zhǎng)爪沙鼠血吸蟲模型研究CsA體內(nèi)抗蟲效果。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性長(zhǎng)爪沙鼠96只，清潔級(jí)，體重50～60g，購自浙江省動(dòng)物中心。日本血吸蟲尾蚴購自江蘇省血吸蟲病防治研究所。

1．2 主要試劑和儀器 環(huán)孢素A為瑞士Borel教授饋贈(zèng)，2．5%戊二醛和4%多聚甲醛溶液為本實(shí)驗(yàn)室制備。生物顯微鏡（CX 40）為日本OLYMPUS公司產(chǎn)品，掃描電鏡（S－3400N）和透射電鏡（H－7650）為日本日立公司產(chǎn)品。Masson染色試劑盒購自福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。蘇木素－伊紅（HE）染液由寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室提供。

1．3 實(shí)驗(yàn)方法 96只長(zhǎng)爪沙鼠隨機(jī)分8組，每組12只，A 組為正常組，B組為對(duì)照組，C、D、E、F、G和H為治療組。B、C、D、E、F、G和 H組以腹部貼片法感染日本血吸蟲尾蚴，每鼠感染120±2條尾蚴，建立血吸蟲病動(dòng)物模型。于感染后（Day 0）對(duì)C、D和 E 3組分別給予3種不同劑量（10，20，50 mg／kg·d）的環(huán)孢素A治療，連續(xù)5d，于背部皮膚注射給藥。于感染后第3周（Day 21）對(duì)F、G和H三組給予同樣劑量的環(huán)孢素A治療，連續(xù)5天。5周后解剖全部沙鼠，經(jīng)門靜脈灌注收集成蟲，計(jì)數(shù)蟲荷，計(jì)算減蟲率。每組蟲體根據(jù)性別分為雌雄兩組，用2．5%戊二醛固定后，掃描電鏡（SEM）和透射電鏡（TEM）觀察蟲體表面損害情況。病理學(xué)觀察：取沙鼠肝臟和腸壁制作常規(guī)病理切片，切片厚度為4 μm，然后進(jìn)行HE染色觀察蟲卵肉芽腫面積大小，Masson染色觀察肝臟纖維化程度。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS17．0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用方差分析檢驗(yàn)（檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0．05）。

2 結(jié) 果

2．1 減蟲率計(jì)算

減蟲率計(jì)算公式＝模型組檢獲蟲數(shù)－治療組檢獲蟲數(shù)×模型組檢獲蟲數(shù)100%

從表1可以看出，和模型組相比，感染后立即給藥（Day 0）的沙鼠，低劑量給藥組（C）和中劑量給藥組（D）蟲體減少不明顯（P＞0．05），而高劑量給藥組（E）蟲體數(shù)顯著減少（P＜0．05）；感染后3周給藥的沙鼠（Day 21），低劑量給藥組（F）蟲體無明顯減少（P＞0．05），而中劑量組（G）和高劑量組（H）減蟲效果顯著（P＜0．01）。

表1 減蟲率Tab．1 Worm reduction rate

2．2 肝臟大體觀察 肉眼觀察肝臟大體可見正常組沙鼠肝臟顏色鮮艷，呈紅褐色，質(zhì)地柔軟，表面光滑，無任何病理癥狀（Fig．1A）。模型組沙鼠肝臟顏色變灰褐色，表面有大量粟粒狀白色斑點(diǎn)，質(zhì)地變硬，表面粗糙（Fig．1B）。經(jīng)CsA治療后，低劑量組的沙鼠肝臟與模型組呈現(xiàn)相似的病理癥狀（Fig．1C，1F）。中劑量組蟲卵結(jié)節(jié)減少，顏色雖較正常暗淡，但和模型組相比已有明顯改善（Fig．1D，1G）。高劑量組治療效果顯著，幾乎未見蟲卵結(jié)節(jié)，顏色、質(zhì)地與正常肝臟相近（Fig．1E，1H）。各治療組肝臟大體觀察結(jié)果表明，CsA治療呈劑量依賴性，用藥時(shí)間對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果無顯著影響。

圖1 肝臟大體觀察A：正常組；B：模型組；C：低劑量組（Day 0）；D：中劑量組（Day 0）；E：高劑量組（Day 0）；F：低劑量組（Day 21）；G：中劑量組（Day 21）；H：高劑量組（Day 21）Fig．1 Liver observationA：Normal group；B：Model group；C：Low does group（Day 0）；D：Mid does group（Day 0）；E：High does group（Day 0）；F：Low does group（Day 21）；G：Mid does group（Day 21）；H：High does group（Day 21）

2．3 肝臟HE染色 光鏡下觀察可見正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈及肝細(xì)胞呈放射狀排列，肝細(xì)胞無腫脹變性壞死，無任何病理癥狀（Fig．2A）。而模型組肝組織內(nèi)蟲卵散布沉積，部分匯管區(qū)內(nèi)蟲卵成堆聚集，匯管區(qū)及蟲卵周圍大量淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，形成大面積的蟲卵肉芽腫，肝組織損傷嚴(yán)重，肝細(xì)胞大量凝固性壞死（Fig．2B）。經(jīng)CsA治療后，低劑量組與模型組無明顯差異，大面積的蟲卵肉芽腫連接成片（Fig．2C，2F）。中劑量組可見肉芽腫面積有所減小，肝組織損傷減輕（Fig．2D，2G）。高劑量組肉芽腫面積顯著減小，肝組織完整幾乎無損傷，蟲卵數(shù)量明顯減少，零散分布，無大面積聚集區(qū)域（Fig．2E，2H）。HE實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CsA治療時(shí)間和肝臟肉芽腫大小之間并無顯著聯(lián)系，只呈劑量依賴關(guān)系。

2．4 腸壁HE染色 正常組腸壁組織結(jié)構(gòu)層次清楚，腸絨毛完整清晰（Fig．3A）。模型組腸壁黏膜下層發(fā)現(xiàn)大量蟲卵沉積，黏膜破碎，腸壁內(nèi)蟲卵密度較高，蟲卵周圍出現(xiàn)肉芽腫反應(yīng)（Fig．3B）。經(jīng)CsA治療后，低劑量組與模型組無明顯差異（Fig．3C，3F）。中劑量組可見蟲卵減少，肉芽腫面積減小（Fig．3D，3G）。高劑量組只有很少蟲卵產(chǎn)生，部分蟲卵死亡及鈣化，腸壁組織幾乎無損傷（Fig．3E，3H）。和HE結(jié)果類似，CsA治療時(shí)間和腸壁肉芽腫大小之間并無顯著聯(lián)系，只呈劑量依賴關(guān)系。

2．5 Masson染色 正常組肝臟匯管區(qū)及中央靜脈有少量膠原纖維（Fig．4A）。模型組可見肉芽腫周圍出現(xiàn)大量纖維化組織圍繞，并向四周延伸（Fig．4B）。CsA低劑量組膠原染色面積未見明顯減少（Fig．4C，4F），中劑量組纖維面積較模型組和低劑量組有所減少，但仍可見大量纖維化組織圍繞（Fig．4D，4G），在高劑量組中，膠原纖維顯著減少，只可見零星纖維化組織（Fig．4E，4H）。

2．6 掃描電鏡（SEM）觀察 正常雄、雌蟲體體壁表面呈海綿狀，具有明顯而復(fù)雜的褶嵴、凹窩、體棘和感覺乳突（Fig．5A，5E）。用藥后蟲體體壁表面主要變化是皮層褶嵴腫脹，出現(xiàn)大量泡狀物，隨藥物劑量增加而不斷擴(kuò)展加重，在中、高劑量組可見皮層大面積糜爛和破潰，致使皮層下組織顯露。在所用劑量下，藥物對(duì)雌、雄蟲體壁表層的損害作用相仿（圖5）。

圖2 肝臟肉芽腫的病理變化 （HE染色，×100）A：正常組；B：模型組；C：低劑量組（Day 0）；D：中劑量組（Day 0）；E：高劑量組（Day 0）；F：低劑量組（Day 21）；G：中劑量組（Day 21）；H：高劑量組（Day 21）Fig．2 Histopathological changes in liver granulomas（HE staining，×100）A：Normal group；B：Model group；C：Low does group（Day 0）；D：Mid does group（Day 0）；E：High does group（Day 0）；F：Low does group（Day 21）；G：Mid does group（Day 21）；H：High does group（Day 21）

圖3 腸壁肉芽腫的病理變化 （HE染色，×100）A：正常組；B：模型組；C：低劑量組（Day 0）；D：中劑量組（Day 0）；E：高劑量組（Day 0）；F：低劑量組（Day 21）；G：中劑量組（Day 21）；H：高劑量組（Day 21）Fig．3 Histopathological changes in intestine granulomas（HE staining，×100）A：Normal group；B：Model group；C：Low does group（Day 0）；D：Mid does group（Day 0）；E：High does group（Day 0）；F：Low does group（Day 21）；G：Mid does group（Day 21）；H：High does group（Day 21）

2．7 透射電鏡（TEM）觀察 正常雄、雌蟲體體表結(jié)構(gòu)完整清晰，由體被、基膜及體被下層構(gòu)成（Fig．6A，6E）。用后可見雌、雄蟲皮層細(xì)胞質(zhì)有不同程度的突起腫脹，體表結(jié)構(gòu)紊亂。在高劑量組可看到大量巨大空泡產(chǎn)生，細(xì)胞質(zhì)破潰或溶解（圖6）。

3 討 論

CsA是從真菌中提取的一種具有強(qiáng)效免疫抑制力的環(huán)狀多肽［8］，在體外可抑制許多寄生蟲的生長(zhǎng)［9］。已知CsA引起的蟲體損壞與藥物的一種結(jié)合蛋白——親環(huán)蛋白（cyclophilin）有關(guān)。親環(huán)蛋白是一類蛋白質(zhì)家族，存在于所有的真核生物和原核生物中，可抑制肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶活性，以及在不同程度上結(jié)合免疫抑制劑CsA［10］。親環(huán)蛋白與CsA結(jié)合形成的復(fù)合物可抑制鈣調(diào)磷酸酶活性，但該抑制作用不參與抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑［11］。另外還發(fā)現(xiàn)NF－AT樣轉(zhuǎn)錄因子是一種對(duì)CsA敏感的蛋白家族，它可能的作用與調(diào)節(jié)宿主體內(nèi)寄生蟲的生長(zhǎng)和分化有關(guān)，且具有編碼Sm28GST蛋白分子的功能。研究證明經(jīng)CsA處理曼氏血吸蟲的幼蟲，其Sm28GST蛋白表達(dá)受到抑制［12］。現(xiàn)已知親環(huán)蛋白－CsA復(fù)合物可抑制NF－AT樣轉(zhuǎn)錄因子的去磷酸化作用，使轉(zhuǎn)錄因子不能轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，從而阻斷細(xì)胞轉(zhuǎn)錄相關(guān)的基因復(fù)制［13］。上述研究結(jié)果為了解CsA抗血吸蟲作用提供了一種新視野。

圖4 肝臟膠原面積的變化 （Masson染色，×100）A：正常組；B：模型組；C：低劑量組（Day 0）；D：中劑量組（Day 0）；E：高劑量組（Day 0）；F：低劑量組（Day 21）；G：中劑量組（Day 21）；H：高劑量組（Day 21）Fig．4 Changes of liver collagen（Masson staining，×100）A：Normal group；B：Model group；C：Low does group（Day 0）；D：Mid does group（Day 0）；E：High does group（Day 0）；F：Low does group（Day 21）；G：Mid does group（Day 21）；H：High does group（Day 21）

圖5 蟲體體壁SEM觀察A：正常雄蟲；B：雄蟲（低劑量組）；C：雄蟲（中劑量組）；D：雄蟲（高劑量組）；E：正常雌蟲；F：雌蟲（低劑量組）；G：雌蟲（中劑量組）；H：雌蟲（高劑量組）Fig．5 Worm surface observation by SEMA：Male（Normal）；B：Male（Low does group）；C：Male（Mid does group）；D：Male（High does group）；E：Female（Normal）；F：Female（Low does group）；G：Female（Mid does group）；H：Female（High does group）

最近Page等［14］從馬來絲蟲中分離出一個(gè)cDNA克隆，該克隆表達(dá)一種和親環(huán)蛋白類似的N末端區(qū)和親水性C末端區(qū)。原核表達(dá)結(jié)果表明，該蛋白具有肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶活性。該蛋白與CsA結(jié)合的位點(diǎn)中，組氨酸取代了色氨酸，因此馬來絲蟲對(duì)CsA的耐藥性顯著增加。其可能的作用機(jī)制為，組氨酸取代色氨酸后，親環(huán)蛋白類似物與CsA的親和力降低，影響NF－AT樣轉(zhuǎn)錄因子的去磷酸化作用，從而使蟲體對(duì)CsA的耐藥性增加［15］。上述研究均表明寄生蟲中親環(huán)蛋白的存在和功能與CsA的抗蟲作用有緊密聯(lián)系［16］。

圖6 蟲體體壁TEM觀察A：正常雄蟲；B：雄蟲低劑量組；C：雄蟲中劑量組；D：雄蟲高劑量組；E：正常雌蟲；F：雌蟲低劑量組；G：雌蟲中劑量組；H：雌蟲高劑量組Fig．6 Worm surface observation by TEMA：Male（Normal）；B：Male（Low does group）；C：Male（Mid does group）；D：Male（High does group）；E：Female（Normal）；F：Female（Low does group）；G：Female（Mid does group）；H：Female（High does group）

目前國外已對(duì)CsA抗血吸蟲的研究取得初步進(jìn)展，認(rèn)為CsA可直接作用于曼氏血吸蟲的早期，干擾蟲體生存［17］。單獨(dú)使用CsA可減少蟲荷數(shù)并優(yōu)先作用于雌蟲，而單獨(dú)使用抗血清對(duì)蟲荷數(shù)無顯著影響，若兩者聯(lián)合使用則可顯著地減少蟲荷數(shù)。CsA還損壞蟲體表面，暴露蟲體特異性抗原［18］。掃描電鏡下觀察旋毛蟲發(fā)現(xiàn)，經(jīng)CsA處理之后，成蟲體表組織損壞，外層起皺脫落，特別是皮下毛孔增厚，出現(xiàn)不規(guī)則排列。CsA對(duì)蟲體表皮的破壞和其作用機(jī)制有重要聯(lián)系［19］。小口膜殼絳蟲經(jīng)CsA處理后，蟲體表面形成突起，節(jié)片腫脹。研究結(jié)果表明CsA能使蟲體表面細(xì)胞膜滲透性改變，但具體機(jī)制還未被闡明［20］。CsA同樣能干擾絳蟲表皮的正常功能，使其攝取葡萄糖的功能受損［21］。而CsA及其類似物均能在體外引起寄生蟲表面和線粒體的損壞［22］。

我國是日本血吸蟲病的流行區(qū)。當(dāng)日本血吸蟲尾蚴接觸到人或哺乳動(dòng)物皮膚后，尾蚴尾部脫落形成童蟲，童蟲在皮下組織停留短暫時(shí)間后轉(zhuǎn)移入體內(nèi)，最后匯集于肝門靜脈，大概21d后變成成蟲。童蟲和成蟲的抗原成分均可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)。所以本實(shí)驗(yàn)分別選取感染后（Day 0）與第3周（Day 21）給予CsA藥物治療，以觀察CsA對(duì)童蟲和成蟲的作用效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)CsA治療后，肝臟和腸壁中的蟲卵減少，肉芽腫面積減小，纖維化程度減輕，且該治療效果和CsA給藥劑量正相關(guān)。電鏡結(jié)果顯示CsA對(duì)雌、雄蟲體表面皮層均有損害作用，表明CsA對(duì)童蟲和成蟲均有殺傷作用，且呈劑量依賴性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明CsA能抑制T淋巴細(xì)胞參與調(diào)節(jié)的免疫反應(yīng)，而不影響B(tài)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能［23－24］。CsA 通過結(jié)合親環(huán)蛋白抑制T淋巴細(xì)胞增殖，而T淋巴細(xì)胞參與調(diào)節(jié)的免疫反應(yīng)介導(dǎo)了蟲卵肉芽腫的產(chǎn)生，導(dǎo)致肝纖維化形成。所以CsA選擇性的抑制作用可能是減輕肝纖維化程度的原因。

總而言之，CsA在抗寄生蟲方面的有著明顯的作用，而且沒有免疫抑制力的環(huán)孢素類衍生物在某些寄生蟲病上也有很大的臨床應(yīng)用潛力［25］。CsA對(duì)日本血吸蟲具有明顯的抗蟲效果，能有效減少宿主體內(nèi)的蟲卵數(shù)，對(duì)童蟲和成蟲均有滅殺作用，減少肝臟和腸壁蟲卵數(shù)，減輕肝臟纖維化作用，作用效果呈劑量依賴型。綜上所述，CsA具有明顯的抗日本血吸蟲功能，但具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步闡述。我們可以進(jìn)一步應(yīng)用分子生物學(xué)的方法，對(duì)于其具體的作用機(jī)制進(jìn)行更深入的研究。

［1］Engels D，Chitsulo L，Montresor A，etal．The global epidemiological situation of schistosomiasis and new approaches to control and research［J］．Acta Trop，2002，82（2）：139－146．DOI：10．1016／S0001－706X（02）00045－1

［2］Fenwick A，Savioli L，Engels D，etal．Drugs for the control of parasite disease：current status and development in schistosomiasis［J］．Trends Parasitol，2003，19（11）：509－515．DOI：10．1016／j．pt．2003．09．005

［3］Fallon PG，Sturrock RF，Capron A，etal．Diminished susceptibility to praziquantel in a Senegal isolate of Schistosoma mansoni［J］．Am J Trop Med Hyg，1995，53（1）：61－62．

［4］Fallon PG，Mubarak JS，F(xiàn)ookes RE，etal．Schistosoma mansoni：Maturation rate and drug susceptibility of different geographic isolates［J］．Exp Parasitol，1997，86（1）：29－36．DOI：10．1006／expr．1997．4149

［5］Chappell LH，Wastling JM．Cyclosporin A：antiparasite drug，modulator of the host－parasite relationship and immunosuppressant［J］．Parasitology，1992，105：25－40．

［6］Bueding E，Hawkins J，Cha YN．Antischistosomal effects of Cyclosporine A［J］．Agents Actions，1981，11（4）：380－383．

［7］Millership JJ，Chappell LH，F(xiàn)allon PG．Synergistic action of cyclosporin A and polyspecific rabbit anti－sera against murine Schistosomamansoni［J］．Parasite Immunol，1996，18（2）：71－77．

［8］Borel JF，Baumann G，Chapman I，etal．In vivo pharmacological effects of ciclosporin and some analogues［J］．Adv Pharmacol，1996，35：115－246．

［9］Page AP，Kumar S，Carlow CK．Parasite cyclophilins and antiparasite activity of cyclosporin A［J］．Parasitol Today，1995，11（10）：385－388．

［10］Yang Y，Moir E，Kontopidis G，etal．Structure－based discovery of a family of synthetic cyclophilin inhibitors showing a cyclosporin－A phenotype in Caenorhabditis elegans［J］．Biochem Biophys Res Commun，2007，363（4）：1013－1019．DOI：10．1016／j．bbrc．2007．09．079

［11］Roberts HC，Sternberg JM，Chappell LH．Characterization of calcineurin from Hymenolepism icrostomaand H．diminutaand its interaction with cyclosporin A［J］．Parasitology，1997，114（3）：279－283．

［12］Serra EC，Lardans V，Dissous C．Identification of NF－AT－like transcription factor in Schistosoma mansoni：its possible involvement in the antiparasitic action of cyclosporin A［J］．Mol Biochem Parasitol，1999，101（1－2）：33－41．

［13］Clipstone NA，Crabtree GR．Identification of calcineurin as a

key signalling enzyme in T－lymphocyte activation［J］．Nature，19923576380695－697．DOI10．1038357695a0

［14］Page AP，Landry D，Wilson GG，etal．Molecular characterization of a cyclosporine A－insensitive cyclophilin from the parasitic nematode Brugia malayi［J］．Biochemistry，1995，34（36）：11545－11550．

［15］Ellis PJ，Carlow CK，Ma D，etal．Crystal structure of the complex of brugia malayi cyclophilin and cyclosporin A［J］．Biochemistry，2000，39（3）：592－598．

［16］Roberts HC，Sternberg JM，Chappell LH．Hymenolepis diminuta and H．microstoma：uptake of cyclosporin A and drug binding to parasite cyclophilins［J］．Parasitology，1995，111（5）：591－597．

［17］Pons HA，Adams S，Stadecker MJ．Schistosoma mansoni：the basis for the antischistosomal effect of cyclosporine A［J］．Exp Parasitol，1988，67（2）：190－198．

［18］Millership JJ，Chappell LH，F(xiàn)allon PG．Synergistic action of cyclosporin A and polyspecific rabbit anti－sera against murine Schistosoma mansoni［J］．Parasite Immunol，1996，18（2）：71－77．

［19］Boulos LM，Abu－Samra LM，el－Azzouni MZ．Cyclosporin A in experimental trichinosis scanning electron microscopic study［J］．J Egypt Soc Parasitol，1992，22（3）：767－773．

［20］Wastling JM，MacKenzie K，Chappell LH．Effects of cyclosporin A on the morphology and tegumentary ultrastructure of Hymenolepis microstoma in vivo［J］．Parasitology，1992，104（Pt 3）：531－538．

［21］Wastling JM，Chappell LH．Cyclosporin A：drug treatment in vivo affects the kinetics of［14C］glucose transport in Hymenolepis microstoma in vitro［J］．Parasitology，1994，108（2）：223－228．

［22］McLauchlan PE，Roberts HC，Chappell LH．Mode of action of cyclosporin A against Hymenolepis microstoma （Cestoda）：relationship between cyclophilin binding and drug－induced damage［J］．Parasitology，2000，121（6）：661－670．

［23］McLauchlan PE，Roberts HC，Chappell LH，etal．Effects of the new anti－lymphocytic peptide cyclosporin A in animals［J］．Immunology，1977，32（6）：1017－1025．

［24］Thomson AW，Whiting PH，Simpson JG．Cyclosporine：immunology，toxicity and pharmacology in experimental animals［J］．Agents Actions，1984，15（3－4）：306－327．

［25］Bell A，Roberts HC，Chappell LH．The antiparasite effects of cyclosporin A：possible drug targets and clinical applications［J］．Gen Pharmacol，1996，27（6）：963－971．DOI：10．1016／0306－3623（95）02148－5