盧 寧，佟繼銘，張樹峰

(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德 067000)

大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖[1]。大黃藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是中藥組方中應用范圍最大、使用頻率最高的幾種重要中藥之一，已作為一種世界性藥物載入19個國家的藥典中[2]。大黃的化學成分主要有蒽醌類、二蒽酮類、苯丁酮苷類、二苯乙烯苷類、鞣質類、多糖類等，具有明顯的瀉下、解熱和抗炎作用[3-4]?，F(xiàn)代研究表明，大黃具有抗菌、抗病毒、延緩衰老等作用[5]。據(jù)統(tǒng)計，約有800多種中藥制劑中含有大黃，一般認為大黃毒性較低，臨床應用比較安全，大多數(shù)降脂減肥、排毒養(yǎng)顏類中成藥中也含有大黃，以致應用大黃的時間過長，導致大黃相關的不良反應發(fā)生率增高[6]。本課題組前期研究探討了大黃對雌性大鼠生殖系統(tǒng)的影響，結果發(fā)現(xiàn)長期使用大黃可導致大鼠卵巢指數(shù)降低，卵巢內(nèi)各級卵泡數(shù)量減少、閉鎖卵泡數(shù)增多，卵泡內(nèi)細胞排列紊亂;大鼠子宮指數(shù)降低，內(nèi)膜腺體數(shù)量減少、腺腔不規(guī)則，肌纖維稀疏。說明長期使用大黃對卵巢、子宮的組織結構均有一定的損傷，且隨用藥時間延長逐漸加重。本研究旨在探討長期使用大黃對雌性大鼠血清雌二醇(E2)、黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平的影響，為客觀評價大黃的毒性及臨床合理用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 大黃(Rheum palmatum L)，安國市長安中藥材有限公司，批號:20090902，經(jīng)承德醫(yī)學院中藥研究所劉翠哲研究員鑒定為掌葉大黃的干燥根莖;大鼠E2(批號:DRE20048)、LH(批號:DRE20139)、FSH(批號:DR E20049) ELISA 試劑盒，上海索寶。Multiskan MK3酶標儀，美國Thermo。

1.2 大黃水提取物的制備 大黃藥材粉碎為粗粉，10倍水浸泡兩次，合并提取液、過濾，40℃濃縮至生藥量含量為0.4g/ml備用。

1.3 實驗動物分組及處理 8周齡雌性Wistar大鼠9只，體重180-220g，SPF級，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號:SCXK(京)2009-0008。大鼠隨機分組，每組10只:正常對照組，大黃水提取物1.0g/kg和2.0g/kg劑量組;大黃各劑量組再分為用藥30、40、50 60d組，分別灌胃給予不同劑量的大黃水提物30d、40d 50d和60d。

1.4 指標檢測 各組大鼠于給藥結束后第2d腹主動脈采血，3500r/min離心10min取血清，-20℃冰箱保存，采用ELISA法檢測大鼠血清E2、LH和FSH的水平。

1.5 統(tǒng)計分析 使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，結果以(±s)表示，行t檢驗、方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

與正常對照組比較，各給藥組大鼠血清E2水平降低LH、FSH水平升高;大黃給藥劑量為2.0g/kg時，給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯低于正常對照組，LH FSH水平明顯高于正常對照組(P＜0.01，P＜0.05)。不同作用時間比較:大黃1.0g/kg劑量組，與給藥30d比較給藥60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05);大黃2.0g/kg劑量組，與給藥30d 40d比較，給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05)。不同給藥劑量、相同給藥時間比較:與1.0g/kg劑量組同時間點比較，2.0g/kg劑量組給藥給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05)。見附表。

附表 大黃對雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影響( ±s，n=10)

附表 大黃對雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影響( ±s，n=10)

與正常對照組比較:aP＜0.01，bP＜0.05;與同劑量30d比較:cP＜0.05，與同劑量40d比較:dP＜0.05;與1.0g/kg組同時間點比較:eP＜0.05

組別 給藥時間(d) E2(ng/L) LH(ng/L) FSH(IU/L)正常對照組 -- 49.88±6.64 1363.60±250.5 5.75±0.95 30 47.8.±5.60 1364.90±200.6 5.75±1.35大黃 40 47.35±5.70 1367.3±208.9 5.75±1.2(1.0g/kg) 50 46.95±5.95 1376.20±226.1 5.85±1.15 60 46.31±8.66c 1399.05±205.1c 5.95±1.05c 30 46.61±5.89 1368.05±211.8 5.95±1.01大黃 40 44.66±8.97 1512.81±230.5 6.20±1.45(2.0g/kg) 50 37.35±5.94acde 1630.55±245.35bcde 6.65±0.75bcde 60 35.90±4.53acde 1646.41±163.8bcde 7.10±1.10bcde

3 討論

黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)是腦垂體前葉分泌的糖蛋白激素，能促進卵泡成熟[7];FSH在卵泡期刺激卵泡發(fā)育并調控E2及其它雌性激素的產(chǎn)生，與黃體生成素(LH)協(xié)同作用導致排卵[8]。隨著年齡增長絕經(jīng)期的到來，卵巢功能降低，雌激素分泌減少，對LH和FSH的反饋抑制作用減弱，導致血中FSH、LH水平升高[9]?；AFSH值是衡量卵巢儲備功能常用的指標，但臨床上常發(fā)現(xiàn)，年輕不孕婦女(年齡＜35歲)或基礎FSH值正常者，也存在卵巢低反應現(xiàn)象[10-11]。

本研究結果顯示，長期使用大黃可使成年雌性大鼠血清E2水平降低，LH、FSH水平升高，其中大劑量(2.0g/kg)給藥50d、60d組變化最為明顯，與正常對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義?？梢?，E2、LH、FSH水平的改變與大鼠卵巢損傷具有一定的聯(lián)系。如果卵巢發(fā)育不良或早衰，卵巢本身出現(xiàn)排卵異常或不排卵，分泌的雌激素水平會比較低，從而刺激機體分泌更多的LH和FSH。但由于卵巢功能不良，F(xiàn)SH水平再高卵泡也不能發(fā)育，從而導致雌激素水平的進一步降低。

本研究中E2、LH和FSH水平的改變可充分證明，長期使用大黃可影響雌性大鼠的性激素水平，本研究可為臨床合理用藥提供一定的實驗依據(jù)。

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