陳李燊 江淑萍

紅霉素及其制劑是目前臨床中常用的抗生素，紅霉素是第一個(gè)藥用的十四元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類多組分抗生素［1］。紅霉素腸溶膠囊作為治療對(duì)青霉素過敏感染患者的替代用藥，其測(cè)定方法為抗生素微生物檢定法，此法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)［2］。本文采用HPLC測(cè)定紅霉素腸溶膠囊的含量，簡(jiǎn)單方便、快速準(zhǔn)確。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

L2400高效液相色譜儀(日本日立公司)；BS110S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；紅霉素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：20120315)；紅霉素腸溶膠囊(齊魯制藥有限公司，批號(hào)分別為：20120405，20120409，20120501，0.25 g)；甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Poroshell 120(4.6×250 μm，5 μm)；流動(dòng)相：0.067 mol/L、pH 為 6.5(三乙胺調(diào))的磷酸二氫銨溶液－乙腈(56：44)，檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，流速：0.8 mL/min，柱溫：室溫。進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定紅霉素對(duì)照品1.9 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，備用。取1 ml加甲醇定量至2 ml容量瓶中，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取本品5粒，研細(xì)，混勻，精密稱定細(xì)粉適量(約相當(dāng)于膠囊1粒)，置10 mL量瓶中，加2 mL甲醇溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液制備 按照處方比例，制成除紅霉素外的其他組分的陰性樣品，按2.3方法制成陰性對(duì)照品。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別取濃度為0.19 mg/ml，0.095 mg/ml，0.063 mg/ml，0.0475 mg/ml，0.038 mg/ml的對(duì)照品溶液20 μl，按上述色譜條件測(cè)定，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得方程為：Y=5088212X-681234，r=0.9997，結(jié)果表明山奈素在 0.76 ～3.8 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液20 μl，同一色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果：紅霉素的峰面積RSD=1.01%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品溶液6份，照2.3方法制備，依次進(jìn)樣。結(jié)果：山奈素的含量RSD=0.92%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別在2、4、6、12、24 h內(nèi)進(jìn)樣，結(jié)果RSD=0.97%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.5.5 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的紅霉素膠囊6份(每份相當(dāng)于膠囊4粒)，分別加入精密稱定的山奈素對(duì)照品0.5610 mg。按2.3方法制備，進(jìn)樣，計(jì)算，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.6 專屬性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μl，進(jìn)樣，記錄色譜圖，紅霉素的保留時(shí)間為10 min，分離良好，陰性對(duì)照在相應(yīng)時(shí)間無峰。

3 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.3制備溶液，進(jìn)樣，紅霉素含量結(jié)果如下：第一批：20110405：0.1645(mg/粒)；第二批：20110409：0.1641(mg/粒)；第三批：20110501：0.1647(mg/粒)。

4 討論

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取紅霉素對(duì)照品適量加用流動(dòng)相溶解，在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描［3］，結(jié)果在210nm處有最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。

4.2 流動(dòng)相的選擇 試驗(yàn)中曾考察過乙腈-水，乙腈-甲醇，磷酸二氫銨溶液-乙腈(56∶44)等溶劑系統(tǒng)，均沒實(shí)現(xiàn)良好分離，最終選擇0.067 mol/L、pH為6.5(三乙胺調(diào))的磷酸二氫銨溶液-乙腈(56∶44)作為流動(dòng)相。

［1］ 洪建文，劉振龍，彭潔，等．紅霉素腸溶片質(zhì)量分析．藥物分析雜志．2102，32(4)：729-731.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(二部)．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：302．

［3］ 常一丁，劉艷紅，案國(guó)華．HPLC法測(cè)定紅霉素腸溶片中紅霉素的含量．當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2008，40(2)：42-43.