李 晉 王秉新 (武警總醫(yī)院臨床教研室，北京 100039)

很多口腔急癥都會(huì)造成牙列或牙槽骨局部缺損，或長(zhǎng)期牙缺失等造成牙槽嵴吸收變窄變平，使修復(fù)治療及正畸治療難以實(shí)施，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和心理健康〔1〕。重建缺損牙槽突的方法主要有自體骨移植、引導(dǎo)性骨組織再生、牽引成骨等。近年來(lái)，應(yīng)用具有骨誘導(dǎo)性、骨傳導(dǎo)性以及骨生成性的植入材料充填骨缺損，引導(dǎo)骨再生已成為研究的熱點(diǎn)〔2，3〕。Bio-Oss骨粉是一種自體骨替代物質(zhì)及骨組織再生支架，是很好的骨移植材料，而B(niǎo)io-Gide膜是一種可吸收生物膜，被宿主吸收不需取出，為骨細(xì)胞提供附著載體，不僅利于成骨，而且能夠加速骨缺損愈合〔4〕。兩者聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)骨缺損及再生有積極促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)動(dòng)物自身對(duì)照，觀察Bio-Oss/Bio-Gide在兔下頜牙槽骨臨界骨缺損修復(fù)中的成骨效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康成年新西蘭大白兔8只，雌雄各半，體重2.0～2.7 kg，4～6月齡，由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.2 藥品及試劑 Bio-Oss骨粉，Bio-Gide骨膜(北京雅特盛邦科技有限公司);無(wú)水CaCl2分析純(北京天然生物有限公司);3.8%枸櫞酸鈉(北京康普匯維科技有限公司);速眠新Ⅱ(北京豐臺(tái)區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所);利多卡因(山東華魯制藥有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 建立兔下頜牙槽骨臨界骨缺損模型 動(dòng)物稱重，以速眠新Ⅱ按0.30 ml/kg的劑量，肌肉注射麻醉。常規(guī)消毒，鋪巾，于下頜第一磨牙近中牙槽嵴頂及頰舌側(cè)局部麻醉，暴露下頜第一磨牙牙頸部及近中牙槽嵴頂骨質(zhì)，高速渦輪牙鉆機(jī)鉆骨，使骨段恰好分離，撬斷骨連續(xù)，大約深6 mm，去骨完成后，消除尖銳骨嵴，使其平整，手術(shù)形成長(zhǎng)×寬×高為5 mm×4 mm×6 mm的骨缺損〔5，6〕。整個(gè)手術(shù)過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止感染。

1.2.2 分組及干預(yù) 采取自身對(duì)照，隨機(jī)選擇一側(cè)下頜骨，以Bio-Oss/Bio-Gide修復(fù)骨缺損為實(shí)驗(yàn)側(cè);另外一側(cè)只給予生理鹽水不進(jìn)行修復(fù)設(shè)為對(duì)照側(cè)。實(shí)驗(yàn)側(cè):先給予Bio-Oss骨粉混合(約0.05g/術(shù)區(qū))，形成凝膠狀，再覆蓋 Bio-Gide骨膜約6 mm×6 mm，覆蓋范圍超出骨缺損邊緣2 mm以上〔7〕，褥式縫合固定骨膜，間斷縫合牙齦。對(duì)照組給予等量的生理鹽水同上方法及步驟植入縫合。

1.2.3 術(shù)后處理 連續(xù)1 w給予青霉素40萬(wàn)單位，肌肉注射，1次/d預(yù)防感染。觀察感染狀況，因兩側(cè)下頜骨均有創(chuàng)傷，對(duì)照觀察創(chuàng)傷恢復(fù)狀況，適量給予流質(zhì)飲食，持續(xù)1～2 w，視其飲食及創(chuàng)傷恢復(fù)情況，再恢復(fù)正常喂食。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 于分別于1、4、7、10 w處死動(dòng)物，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處死2只，取下頜植骨區(qū)包括周?chē)例X、牙齦，10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫鈣，脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，行蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察牙周缺損愈合情況。

1.2.5 觀察指標(biāo) 定性分析:新骨形成組織學(xué)觀察，植骨材料的吸收降解情況。定量分析:隨機(jī)取2張切片選擇3個(gè)視野，測(cè)定兩組新骨形成面積占視野總面積的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大體標(biāo)本觀察 新西蘭大白兔均存活，直到觀察點(diǎn)處死。缺損區(qū)軟組織愈合均良好，兩側(cè)均未見(jiàn)感染及糜爛。實(shí)驗(yàn)側(cè)2只Ⅰ級(jí)愈合，1只Ⅱ級(jí)愈合，1只Ⅲ級(jí)愈合，對(duì)照側(cè)2只Ⅱ級(jí)愈合，2只Ⅲ級(jí)愈合。

2.2 Bio-Oss、Bio-Gide修復(fù)前后臨界骨缺損模型改變 實(shí)驗(yàn)建立的臨界骨缺損模型，對(duì)照組自行修復(fù)11 w后，缺損區(qū)只見(jiàn)短而小的骨小梁，骨髓腔彌散稀薄，甚至局部缺如，未形成骨橋連。見(jiàn)圖1a。Bio-Oss/Bio-Gide修復(fù)術(shù)后1 w，可見(jiàn)復(fù)合材料周?chē)幸槐有鹿牵晒羌?xì)胞排列規(guī)則有序，纖維結(jié)締組織包繞的新骨和骨粉顆粒明顯可見(jiàn)，成骨活躍(圖1b);術(shù)后4 w時(shí)，較對(duì)照側(cè)新骨形成多，成骨細(xì)胞多見(jiàn)，成骨活躍(圖1c)。術(shù)后7 w時(shí)，新骨形成逐漸增多，骨邊緣規(guī)則，骨小梁連接成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，植骨材料逐漸減少，吸收邊緣可見(jiàn)(圖1d);術(shù)后10 w時(shí)，大片的骨組織形成，骨板排列更加規(guī)則，且血供豐富，植骨材料可見(jiàn)更少，吸收更多(圖1e)。

2.3 缺損區(qū)組織形態(tài)學(xué)計(jì)量結(jié)果 實(shí)驗(yàn)側(cè)每個(gè)時(shí)間的新生骨面積百分比均大于對(duì)照側(cè)(P＜0.01)，且隨時(shí)間延長(zhǎng)，新骨生成逐漸增多。見(jiàn)表1。

圖1 Bio-Oss、Bio-Gide修復(fù)前后臨界骨缺損模型

表1 實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)新生骨面積百分比(%，±s)

表1 實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)新生骨面積百分比(%，±s)

修復(fù)時(shí)間 實(shí)驗(yàn)側(cè) 對(duì)照側(cè) P值1 w 10.23±1.46 7.17±0.94 ＜0.01 4 w 16.28±1.31 12.43±0.98 ＜0.01 7 w 21.45±1.27 16.01±1.03 ＜0.01 10 w 26.33±1.64 20.35±1.12 ＜0.01

3 討論

骨量充足不僅能滿足口腔美學(xué)的要求，還為種植體提供了生物力學(xué)方面的支持。為解決種植區(qū)骨量不足問(wèn)題，臨床多采用自體骨移植、同種異體骨移植和異種骨移植來(lái)補(bǔ)充植骨區(qū)的骨量不足〔8，9〕。但不論是自體骨移植還是異體骨移植均有一定缺陷，如自體骨移植來(lái)源有限、異體骨移植會(huì)存在骨缺損區(qū)排斥反應(yīng)等。因此，目前誘導(dǎo)成骨成為口腔臨床醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)〔10〕，在新骨形成的同時(shí)，誘導(dǎo)材料逐漸被生新骨取代，與宿主相容。

大量研究表明，Bio-Oss骨粉的多孔狀結(jié)構(gòu)能為新骨生長(zhǎng)提供良好的空間支架，對(duì)維持間隙起重要作用。Bio-Oss骨粉是凍干的小牛骨通過(guò)脫有機(jī)質(zhì)制成，具有良好的生物相容性，已成為公認(rèn)的良好的骨替代材料以及組織工程支架材料〔11〕。而B(niǎo)io-Gide骨膜是一種膠原可吸收膜，在骨缺損部位具有引導(dǎo)組織再生功能及骨修復(fù)和膜屏障的雙重作用，對(duì)重建的組織起支持作用，引導(dǎo)骨再生〔12〕。本實(shí)驗(yàn)選擇 Bio-Oss骨粉結(jié)合 Bio-Gide骨膜，修復(fù)骨缺損，誘導(dǎo)骨再生，正是利用了Bio-0ss骨粉作為骨移植材料填充拔牙窩及骨缺損區(qū)，利用Bio-Gide膜可吸收性并誘導(dǎo)新骨形成的兩大優(yōu)勢(shì)，很好地解決了牙槽骨的缺損和修復(fù)。目前，也有一些實(shí)驗(yàn)將一些生長(zhǎng)因子與Bio-Oss/Bio-Gide或骨形成蛋白+Ⅰ型膠原+天然珊瑚等混合后對(duì)牙槽組織進(jìn)行修復(fù)，利用復(fù)合材料的協(xié)同性可能更利于新骨的成長(zhǎng)。

總之，Bio-oss/Bio-Gide復(fù)合材料修復(fù)牙槽骨的損傷，具有良好的生物組織相容性，并具有刺激骨再生、誘導(dǎo)成骨的效果，為口腔臨床種植牙缺損提供了良好前景，但骨種植區(qū)的感染或相關(guān)不良反應(yīng)還有待于進(jìn)一步長(zhǎng)時(shí)間的觀察。

1 Kasten P，Vogel J，Geiger F，et al.The effect of platelet-rich plasma on healing in critical-size long-bone defects〔J〕.Biomaterials，2008;29(29):3983-92.

2 許 杰，鄧再喜，馬志偉，等.應(yīng)用引導(dǎo)組織再生術(shù)修復(fù)外傷后牙槽骨缺損的臨床研究〔J〕.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011;27(5):699-702.

3 丁建勇，魏 琳，郭家平，等.不同類(lèi)型骨移植材料修復(fù)牙周牙槽骨缺損〔J〕.中國(guó)組織工程研究，2012;16(16):3033-6.

4 Tawil G，Mawla M.Sinus floor elevation using a bovine bone mineral(Bio-Oss)with or without the concomitant use of a bilayered collagen barrier(Bio-Gide):a clinical report of immediate and delayed implant placement〔J〕.Int J Oral Maxillofac Implants，2001;16(5):713-21.

5 王 榮，劉亦然，范勇斌，等.Bio-oss骨膠原修復(fù)牙槽骨缺損區(qū)后對(duì)牙齒移動(dòng)影響的臨床初探〔J〕.口腔頜面修復(fù)學(xué)雜志，2012;13(4):243-5.

6 鄭衛(wèi)東，葛巍立，謝志堅(jiān).下頜骨缺損牽張成骨動(dòng)物模型的建立〔J〕.口腔醫(yī)學(xué)，2007;27(9):463-5.

7 馮 波，施 斌.Bio-OSS骨粉及Bio-Gide膜在上前牙區(qū)即刻牙種植術(shù)中的應(yīng)用〔J〕.中國(guó)口腔種植學(xué)雜志，2004;9(1):19-22.

8 Cao HQ，Meng XM，Liu DQ，et al.Killing effect of coexpressing cytosine deaminase and thymidine kinase on rat vascular smooth muscle cells〔J〕.Chin Med J(Engl)，2004;117(10):1464-70.

9 Oltramari PV，de Lima-Navarro R，Henrigues JF，et al.Orthodontic movement in bone defects filled with xenogenic graft:An experimental study in minipigs〔J〕.Am J Orthod Dentofacial Orthop，2007;131(3):302.

10 ?zkan Y，Ako?lu B，Kulak-?zkan Y.Maxillary sinus floor augmentation using bovine bone grafts with simultaneous implant placement:a 5-year prospective follow-up study〔J〕.Implant Dent，2011;20(6):455-9.

11 胡秀蓮，邱立新，林 野，等.可吸收性Bio-Gide膜治療下頜角區(qū)局部骨缺損實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)口腔種植學(xué)雜志，2002;7(1):10-2.

12 劉恒太，李建斌，隨麗娜.臨床應(yīng)用Bio-oss治療牙周骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.醫(yī)藥論壇雜志，2008;29(4):5-6.