朱劍波,邱細(xì)敏,郭思維,張 為,楊小紅,王 瓊,李 威
(湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410006)
奧美沙坦酯是一種強(qiáng)效和特異性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑,該藥對(duì)不同程度的高血壓病人均有很好的療效,其代謝產(chǎn)物奧美沙坦是生理活性的藥物[1]。奧 美 沙 坦 酯(Olmesartan Medoxomi I)由日本S a n k y o(三共公 司)和 美 國(guó)Fo r e s t La b o r a t o r i e s 開(kāi)發(fā),2002年5月以商品名Benicar在美國(guó)上市,同年8月在德國(guó)獲批準(zhǔn)并在10月初上市。多項(xiàng)臨床表明其降壓效果和預(yù)防靶向器官的損傷作用更為理想,該藥無(wú)論單獨(dú)使用或與其他藥物合用,均有較好的降壓效果,且耐受性良好,顯示出很好的應(yīng)用前景。2008年,奧美沙坦酯全球性銷(xiāo)售額已達(dá)到了21.57 億美元,同比上一年增長(zhǎng)了14.01%,是一個(gè)快速增長(zhǎng)的品種。其突出特點(diǎn)是半衰期較長(zhǎng),一天服用一次,即可以在一天內(nèi)有效控制血壓,因此服用較為方便。同時(shí)奧美沙坦酯與其他的血管緊張素II 受體拮抗劑類(lèi)藥物相比,該藥的劑量小、起效快,服用方便,降壓作用更強(qiáng)而持久,不良反應(yīng)的發(fā)生率低(小于1%),具有明顯的優(yōu)點(diǎn)[2-4]。本課題采用新的合成方法(正在申請(qǐng)專(zhuān)利)獲得的新的仿制藥奧美沙坦酯避開(kāi)了日本三共公司的發(fā)明專(zhuān)利,將其國(guó)產(chǎn)化,必將大大降低廣大患者的治療成本。
新的合成工藝帶來(lái)了新的中間產(chǎn)物,該法引入了6 個(gè)中間雜質(zhì),其結(jié)構(gòu)如圖1。為有效控制該奧美沙坦酯在生產(chǎn)及貯存中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì),建立了奧美沙坦酯有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定的高效液相色譜法。試驗(yàn)證明:本法使各有關(guān)物質(zhì)與主藥均能完全分離,方法專(zhuān)屬性強(qiáng),重復(fù)性好,靈敏度高,可用于生產(chǎn)質(zhì)量控制[5-7]。
圖1 奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式
島津高效液相色譜儀;紫外檢測(cè)器;超聲清洗器;電子分析天平XP205(梅特勒公司);酸度計(jì)PHS-3C(上海鵬順科技有限公司)。
奧美沙坦酯化學(xué)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,含量為99.5%);乙腈(色譜純);其他試劑為分析純;水為重蒸餾水。
色譜柱:ODS-C8 柱(4 .6mm×150 mm,5μm),紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng):256nm,檢測(cè)器溫度:25℃,流動(dòng)相A;磷酸緩沖鹽 (1.36 g 磷酸二氫鉀,加人1000mL 水溶解,加入2mL 三乙胺,用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)PH 至2.8)流動(dòng)相B;乙腈,按表1 進(jìn)行梯度洗脫。
表1 梯度洗脫條件
分別精密稱(chēng)取奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)適量,加80%乙腈水溶液溶解并稀釋制成1.0 mg/mL的混合溶液,精密進(jìn)樣10ul,記錄色譜圖,如圖1.其中3 為主成分峰。
圖1 奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)的分離色譜圖
精密稱(chēng)取奧美沙坦酯標(biāo)準(zhǔn)品適量,加80%乙腈 水 逐 級(jí) 稀 釋 配 成0.2μg/mL,2μg/mL,20μg/mL,0.1mg/mL,0.2mg/mL,0.5mg/mL的 溶 液,分 別 進(jìn) 樣10μL,記錄色譜圖。結(jié)果如圖2.以?shī)W美沙坦酯原料濃度為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),其回歸方程為:y=21535x+49822;R2=0.9997。結(jié)果表明,奧美沙坦酯原料在濃度為0.2μg/ml~500μg/mL的范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。
圖2 奧美沙坦酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
取奧美沙坦酯對(duì)照品經(jīng)降解所得產(chǎn)物進(jìn)行HPLC 分離檢測(cè)(圖3)。結(jié)果表明經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、高濕和光照破壞所產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)與主藥峰達(dá)
到完全分離,本法專(zhuān)屬性良好,如圖3。
圖3 降解產(chǎn)物分解圖譜
取奧美沙坦酯對(duì)照溶液,加80%乙腈水逐級(jí)稀釋?zhuān)葱旁氡?:1 時(shí)的進(jìn)樣量為最低檢測(cè)線(xiàn),結(jié)果奧美沙坦酯的檢測(cè)線(xiàn)為0.4ng
精密配置奧美沙坦酯溶液,精密連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算主峰面積的RSD。結(jié)果峰面積的RSD 為0.3%。
取同一批號(hào)樣品6 份,在同一條件下,分別配置成同一濃度溶液,分別進(jìn)樣10μL,記錄色譜圖。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。
取同一批號(hào)樣品適量,加80%乙腈水溶解,配制成為0.2mg/mL,分別放置0,2,4,6,8 小時(shí)后,精密進(jìn)樣10μL,記錄色譜圖,結(jié)果主峰面積的RSD 為0.22%。
分別考察流動(dòng)相pH 值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測(cè)波長(zhǎng)變化±5nm、流速相對(duì)值變化±20%以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí),儀器色譜行為的變化,每個(gè)條件下各測(cè)試兩次。結(jié)果表明各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0,雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線(xiàn)分離,各條件之間雜質(zhì)含量絕對(duì)值在±0.1%以?xún)?nèi)。并分別在各條件下,平行配置6 份溶液,分別進(jìn)樣。結(jié)果表明各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)(n=6)的RSD 不大于2.0%。
2.10.1 質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%主成分自身對(duì)照法
取奧美沙坦酯適量,加乙腈超聲溶解并稀釋制1 mg/mL的溶液,作為供試品溶液;精密量取1 mL,置100 mL 量瓶中,用乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照溶液;精密量取對(duì)照溶液10 L,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,調(diào)節(jié)儀器靈敏度,使主峰的峰高為滿(mǎn)量程的25%;再精密量取供試品溶液10 L,注人液相色譜儀,記錄色譜圖,如有雜質(zhì)峰,除空白溶劑峰外,量取雜質(zhì)峰面積,與對(duì)照溶液主峰面積比較并計(jì)算(三批樣品平行進(jìn)行)。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 奧美沙坦酯中有關(guān)物質(zhì)的含量
2.10.2 奧美沙坦酯含量測(cè)定
取奧美沙坦酯原料藥適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1mg的溶液,作為供試品溶液;另取奧美沙坦酯對(duì)照品適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;取溶液10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表3。
表三批樣品含量測(cè)定結(jié)果
在選擇色譜條件時(shí),首先參照了文獻(xiàn)[1],在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行的一系列的改變。第一,取混合對(duì)照溶液,用紫外檢測(cè)器檢測(cè)并分析紫外光譜圖。結(jié)果顯現(xiàn)奧美沙坦酯與其相關(guān)物質(zhì)均在波長(zhǎng)256 nm 處有較大吸收,同時(shí)在該波長(zhǎng)下,梯度洗脫時(shí)空白干擾小,因此選擇波長(zhǎng)256 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。第二,選擇流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí),在文獻(xiàn)參考的基礎(chǔ)上進(jìn)行了一系列的摸索。第三,在有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方面,目前一般文獻(xiàn)都是用的C18 柱,C8 柱用的較少,本課題通過(guò)比較C18和C8 柱發(fā)現(xiàn),在能有效的分離的情況下用C8 柱可以大大縮短分析時(shí)間,提高分析效率,并且基線(xiàn)更平穩(wěn)。除此之外,在方法學(xué)考察方面,本課題對(duì)其方法進(jìn)行了耐用性試驗(yàn),更完善的說(shuō)明該方法的可靠性和實(shí)用性。
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