張美鑫　翟立峰等

摘 要： 【目的】研究明確我國梨樹腐爛病菌致病力的分化狀況?！痉椒ā坷骐x體枝條經(jīng)打孔法造成傷口后接種梨樹腐爛病菌，通過接種在5個梨系統(tǒng)（白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨）不同品種上觀測和比較不同來源菌株的致病力差異，并根據(jù)各菌株的綜合致病力強弱劃分為不同類型，分析致病力分化與菌株來源間的相關(guān)性?！窘Y(jié)果】研究發(fā)現(xiàn)來源于我國14省市5個梨系統(tǒng)的91份梨樹腐爛病菌株在不同梨品種上的致病力均存在顯著性差異，但同一菌株在5個梨品種上的癥狀反應(yīng)程度有異。根據(jù)各供試菌株在不同梨品種上的綜合致病力強弱可將其劃分為3個類型，其中強致病力菌株16份，占17.6%；中致病力菌株70份，占76.9%；弱致病力菌株5份，占5.5%。來源于不同地區(qū)和梨系統(tǒng)的菌株之間其致病類型的分布比例存在明顯的差異，這種差異可能與其梨系統(tǒng)的抗病性相關(guān)?！窘Y(jié)論】來源于我國不同地區(qū)和梨系統(tǒng)的梨樹腐爛病菌存在明顯的致病力分化，其綜合致病力可劃分為強、中、弱3個致病類型，以中等致病力菌株為優(yōu)勢群體。

關(guān)鍵詞： 梨樹腐爛病菌； 菌株； 致病力分化

中圖分類號：S661.2 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980？穴2013？雪04-0657-08

梨是我國的大宗水果，栽培范圍非常廣泛，除海南省外，全國各省市區(qū)均有種植。梨樹腐爛病在我國梨產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，尤以西北、華北、東北等地區(qū)更為普遍，其主要危害梨樹主干、主枝及側(cè)枝，造成樹皮壞死腐爛[1]，導致樹勢衰弱、果實產(chǎn)量下降和品質(zhì)降低，流行年份造成大量死樹甚至毀園，因缺乏有效的控制辦法，目前病情仍有不斷擴大趨勢，對梨產(chǎn)業(yè)造成嚴重威脅[2-3]。梨樹腐爛病菌為弱寄生菌，在田間通過傷口（剪鋸口、裂口、日灼、凍傷）侵入寄主樹體[4]，采用田間活體和室內(nèi)離體測定梨樹腐爛病菌的致病力均需要在接種部位造成傷口。已有研究表明，桉樹、蘋果樹等腐爛病菌采用離體測定可正確評價病菌的致病力和種質(zhì)資源的抗性[5-6]。

由于我國南北梨區(qū)栽培的梨種類和所采用的砧木不同，各地的主栽品種也有異，因此系統(tǒng)研究來源于我國不同地區(qū)和不同梨系統(tǒng)的梨樹腐爛病菌的遺傳多樣性和致病性，對于了解梨樹腐爛病的發(fā)生規(guī)律和致病機制及制定有效的防治對策具有重要意義。

本實驗室前期研究證實，在一年生離體枝條和盆栽活體梨苗上傷口接種梨樹腐爛病菌的致病力測定結(jié)果一致[7]。本研究采用不同梨品種的離體枝條，經(jīng)打孔法造成傷口后接種來源于我國不同地區(qū)和梨系統(tǒng)的梨樹腐爛病菌株，觀測和比較其致病力的差異，依據(jù)供試菌株在5個梨品種上的綜合致病力強弱劃分為不同類型，并分析致病力分化與菌株來源間的相關(guān)性，為了解我國梨樹腐爛病菌的遺傳多樣性和致病性提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 致病力測定方法

不同梨品種的離體枝條用無菌水洗凈晾干，經(jīng)75%酒精消毒后將其剪成15 cm小段，兩端用石蠟封口。用5 mm打孔器在枝條中央打孔，并用鑷子將枝條韌皮部去除，從各分離株在PDA平板上生長2 d時的菌落邊緣打取5 mm的菌絲塊接種于傷口處，并在菌絲塊上面覆蓋滴有無菌水的脫脂棉保濕，以空白PDA培養(yǎng)基接種作為對照。接種后的枝條置于塑料盤中（長39 cm，寬27 cm，高3 cm），且盤底鋪滴有無菌水的滅菌紗布，盤口覆保鮮膜。每一接種處理重復5次，試驗重復2次，即91份供試菌株在每個品種上均接種10個離體枝條小段，5個梨品種共需接種4550個離體枝條小段。接種2 d后，將棉花和菌絲塊去掉并觀察其發(fā)病情況，接種4 d時測定枝條上的病斑長度（LD）。參照周玉霞等[8]的致病力分級方法，將梨腐爛病菌菌株致病力強弱分為3個等級： LD≧29.4 mm為強致病力；29.4 mm﹥LD﹥17.7 mm為中致病力； LD≦17.7 mm為弱致病力。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用SPSS.16.0軟件進行分析， 處理間的差異顯著性采用Duncans multiple Range Test。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試菌株在5個梨品種上的致病力測定結(jié)果

2.1.5 菌株在‘南果梨上致病力的測定結(jié)果 供試菌株在‘南果梨品種上病斑長度的測定結(jié)果見圖5。按上述分級標準分級和進行統(tǒng)計分析的結(jié)果顯示，91份供試菌株中表現(xiàn)為弱致病力的菌株71份，占所有菌株的78.0%，中等致病力的菌株20份，占22.0%。

以上研究結(jié)果顯示，來源于我國14省市5個梨系統(tǒng)的91份供試梨樹腐爛病菌株在不同梨品種上的致病力均存在顯著性差異，但同一菌株在5個梨品種上的癥狀反應(yīng)程度也有異，這暗示著不同梨品種對梨樹腐爛病的抗性存在差異。

2.2 供試菌株的綜合致病力

2.3 菌株致病力的分化與其來源間的關(guān)系

2.3.1 來源于不同梨系統(tǒng)菌株致病類型的分布比例 來源于不同梨系統(tǒng)的梨樹腐爛病菌株3種致病類型的分布比例見圖6。從圖6可以看出，來源于白梨和沙梨的菌株存在3種致病類型（SP、MP和WP型），來源于秋子梨的菌株存在2種致病類型（SP和MP型），而來源于西洋梨、新疆梨的菌株僅存在一種致病類型（MP型）。結(jié)果顯示，梨樹腐爛病菌致病力的分化與菌株的梨系統(tǒng)來源間存在一定的相關(guān)性，來源于抗病性較強的秋子梨的菌株中強致病的較多，白梨和沙梨次之，而來源于抗病性較差的西洋梨中強致病的株較少。

2.3.2 來源于不同地區(qū)菌株致病類型的分布比例 來源于不同地區(qū)的梨樹腐爛病菌株的3種致病類型分布比例見圖7。從圖7可以看出，存在3種致病類型的地區(qū)有黑龍江、河南（SP、MP和WP型），存在2種致病類型的地區(qū)有遼寧、北京、河北、山西、安徽和福建（SP和MP型）及甘肅、云南 （ MP和WP型），存在1種致病類型的地區(qū)有山東、新疆、陜西（MP型）及吉林（SP型）。結(jié)果顯示，梨樹腐爛病菌致病力的分化在菌株的地區(qū)來源之間也存在差異，但這種差異與我國南北梨區(qū)地理氣候的差異之間無明顯的相關(guān)性。

3 討 論

梨樹腐爛病在我國的發(fā)生危害程度因梨的栽培區(qū)域和種類不同有異。在西北和東北梨區(qū)發(fā)生危害較重，在華北梨區(qū)次之，在華中、華東、華南和西南梨區(qū)較輕。栽培品種屬于秋子梨的發(fā)生危害較輕，屬于白梨、沙梨和新疆梨的較重，屬于西洋梨的最重[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)我國梨樹腐爛病病原菌存在2種不同的菌落類型，其rDNA-ITS核苷酸序列分析顯示均為V. mali var. pyri，兩類型的致病性無差異[8]，但與蘋果上的腐爛病病原菌（V. mali var. mali）[9]明顯不同。在梨枝條上梨樹腐爛病菌的致病力強于蘋果樹腐爛病菌，而在蘋果枝條上蘋果樹腐爛病菌的致病力強于梨樹腐爛病菌。通過對來源于不同梨系統(tǒng)和不同地區(qū)的菌株的致病力進行比較，分析其致病力分化狀況，可為了解梨樹腐爛病的發(fā)生規(guī)律和致病機理提供有價值的信息。

目前已有報道證實，植物病原菌和寄主在長期共進化的過程中，其致病力也在不斷變異[10-12]。本研究發(fā)現(xiàn)來源于我國14省市5個梨系統(tǒng)的91份梨腐爛病菌菌株在不同梨系統(tǒng)上的致病力均存在顯著性差異，但不同梨品種對同一菌株的癥狀反應(yīng)也有異。根據(jù)各供試菌株在不同梨品種上的綜合致病力強弱可將其分為3個類型，以中等致病類型菌株最多。這與李喜玲等[13]關(guān)于灰葡萄孢在草莓上的致病力分化及彭斌[14]關(guān)于蘋果輪紋病菌在枝干上的致病力分化的研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)梨樹腐爛病菌致病類型的分布比例在來源于不同地區(qū)和梨系統(tǒng)的菌株之間存在明顯的差異，且這種差異與梨系統(tǒng)的抗性有明顯的相關(guān)性，來源于抗病性較強的秋子梨的菌株中強致病的較多，但與我國南北梨區(qū)地理氣候的差異之間無明顯的相關(guān)性。王玲等[15]對皖鄂地區(qū)水稻紋枯病菌致病力分化的研究和Neeraja等[16]對印度地區(qū)水稻紋枯病菌致病力分化的研究也發(fā)現(xiàn)致病類型的分布與菌株的地區(qū)來源之間無明顯的相關(guān)。本研究結(jié)果對于制定該病的綜合防治規(guī)程具有重要的意義，但深入了解我國梨樹腐爛病菌的致病性，還需進一步探究梨樹腐爛病菌致病基因的表達及其與寄主之間的分子互作關(guān)系。

4 結(jié) 論

來源于我國不同地區(qū)和梨系統(tǒng)的梨樹腐爛病菌存在明顯的致病力分化，其綜合致病力可劃分為強、中、弱3個致病類型，以中等致病力菌株為優(yōu)勢群體。

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