王 航，王洪鴿，盧亞藝，唐 棣，吉莉莉，湯 承＊

（1.西南民族大學生命科學與技術學院，四川成都610041；2.四川省獸藥監(jiān)察所，四川成都610041）

金蕎麥為蓼科植物金蕎麥（Fagopyrum dibotrys）的干燥根莖，味微辛、澀，性涼，具有清熱解毒、排膿祛瘀之功效，臨床用于治療肺膿腫、麻疹肺炎、扁桃體周圍膿腫［1］。其有效成分為原花色素類縮合鞣質及其前體的混合物，包括（-）- 表兒茶素［（-）-epicatechin］及其衍生物的單體、二聚體和多聚體［2］。金蕎麥乙醇提取物為一類含原花色素的縮合性單寧混合物，主要由（-）-表兒茶素及其二聚體組成，其中（-）- 表兒茶素單元的質量分數占65% ～70%［3］。金蕎麥醇提物對豬胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌、金黃色葡萄球菌和沙門菌有較強的抑菌效果，而對副豬嗜血桿菌、多殺性巴桿菌、大腸埃希菌的抑菌效果相對較弱［4-9］。金蕎麥醇提物可明顯抑制C57／BL6小鼠Lewis肺癌生長［10］，有促進白細胞上升，保護粒細胞的作用［8］；金蕎麥醇提物也可以對雞脾淋巴細胞的增殖活性呈明顯的時效及量效關系［11］。何美珊等［12］對不同產地金蕎麥飲片醇提物中（-）-表兒茶素含量進行測定，表明金蕎麥根具有免疫調節(jié)活性。但還未見不同產地金蕎麥超微粉醇提物中（-）-表兒茶素的含量進行測定的報道，本研究旨在了解我國不同產地金蕎麥中（-）-表兒茶素含量是否存在差異，為金蕎麥相關制劑的研究提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 LC-10AT 型高效液相色譜儀日本島津公司產品，CPA2250 型電子天平，德國Sartorius公司產品，WK-150 型小型超微粉碎機，RE-52AA型旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠產品，SH13-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有限公司產品。

1.1.2 試劑 乙腈、乙醇、磷酸均為分析純；（-）-表兒茶素對照品，成都瑞芬思生物科技有限公司產品，批號B-020-111023，HPLC≥98%。

金蕎麥8個金蕎麥飲片待檢樣本分別來自四川（批號120510）、內蒙古（批號120909）、云南（批號120920）、貴州（批號120602）、江蘇（批號120703）、江西（批號120512）、浙江（批號120701）、安徽（批號120601）。

1.2 方法

1.2.1 金蕎麥超微粉的制備 將各產地金蕎麥飲片通過小型超微粉碎機粉碎，過400目篩，制成粒徑在0.75nm 以下的超微粉。

1.2.2 （-）-表兒茶素的提取 （-）-表兒茶素的提取參考文獻［12-15］提取金蕎麥超微粉中的（-）-表兒茶素的方法。分別精確稱取不同產地的金蕎麥超微粉各2.5g于具塞錐形瓶中，準確加入500mL／L乙醇50mL，密封，稱定總重量，隨后超聲波處理30 min，室溫過夜，加熱回流1h，用500 mL／L乙醇補足損失重量，搖勻，四層紗布濾過。精密吸取濾液25mL，減壓濃縮至完全干燥，殘渣加入10mL乙腈-水（1∶9）分次洗滌，并移至10mL量瓶中，10 000r／min離心5min，取上清液5mL備用。

1.2.3 高效液相色譜測定表兒茶素的含量 色譜條件色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗參考文獻［12］，色譜柱為Kromasil C 柱（150 mm×4.6 mm，5μm），流動相為水（用磷酸調pH 至3.00±0.02）-乙腈（92∶8），流量為1.0mL／min，柱溫為35℃，檢測波長為278nm，進樣量為10μL。

1.2.4 對照品溶液的制備 精密稱取（-）-表兒茶素對照品3.52 mg，加入乙腈-水（1∶9）制成含（-）-表兒茶素35.2μg／mL的溶液。

1.2.5 線性關系測定 用乙腈-水（1∶9）將取1.2.4中的對照品溶液2 倍稀釋成0.55μg／mL～1.76μg／mL的對照品溶液。以（-）-表兒茶素濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.6 重復性試驗 取產地為四川的金蕎麥超微粉6份，每份2.5g，按1.2.2方法提取，按1.2.3色譜條件測定。計算（-）-表兒茶素含量。

1.2.7 精密度測定試驗 取質量濃度為1.76 μg／mL的（-）-表兒茶素對照品溶液重復進樣6次，按1.2.3色譜條件測定，計算平均峰面積。

1.2.8 回收率試驗方法 采用加樣回收法，取已知含量的金養(yǎng)麥超微粉（產地四川）6份，每份1.25g，分別精密加入6.0μg／mL（-）-表兒茶素對照品溶液1mL。按1.2.2 方法提取（-）-表兒茶素，按1.2.3色譜條件測定，計算其峰面積。

2 結果

2.1 線性關系測定結果

回歸方程為Y＝519 812.36X＋2 018.12，r＝0.999 2（n＝5），X表示（-）-表兒茶素質量濃度（μg／mL），Y為峰面 積，（-）-表兒茶素在0.55 μg／mL～17.6μg／mL 與峰面積線性關系良好。標準品與供試品樣品的色譜圖見圖1。圖中x軸表示出峰時間，y軸表示電信號響應值（mv）。

圖1 （-）-表兒茶素HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of（-）-epicatechin

2.2 精密度測定結果

測得（-）- 表兒茶素峰面積平均值為913 360.3mAU＊s，RSD 為0.74%。表明儀器精密度良好。

2.3 重復性試驗結果

（-）-表兒茶素含量平均值為7.419 8μg／g，RSD 為1.70%，表明該方法重復性好。

2.4 回收率試驗結果

結果表明（-）-表兒茶素平均回收率93.86%，RSD 為3.10%。表明此方法檢測（-）-表兒茶素含量可靠、穩(wěn)定。

2.5 樣品含量測定

8個產地金麥超微粉（-）-表兒茶素含量結果見表1。

表1 金蕎麥超微粉中（-）-表兒茶素含量（μg／g，n＝3）Table 1 Determination of（-）-epicatechin in Fagopyrum dibotrys（μg／g，n＝3）

3 討論

中藥材在長期特定的氣候條件和土壤條件等環(huán)境中生長，其有效成分含量也大不相同，本試驗最終樣品含量結果表明不同產地金蕎麥中（-）-表兒茶素含量確有不同，（-）-表兒茶素含量也受到不同產地等因素的影響。

本試驗中所得到到金蕎麥超微粉醇提物中的（-）-表兒茶素含量在6.45μg／g～8.81μg／g之間，低于金蕎麥飲片醇提物中所檢測到的含量［12］。分析其原因有以下幾點：一是因（-）-表兒茶素對溫度敏感，在金蕎麥超微粉的制備過程中溫度升高，極易使（-）-表兒茶素氧化分解［16］。二是制備超微粉過程中因超微粉粒徑過小，與空氣接觸面積變大，使有效成分極易與空氣接觸導致氧化［17］。

目前，金蕎麥和其他大部分中藥飲片在生產、流通、使用中很難準確分析、定量其中的有效成分，嚴重影響了中醫(yī)臨床用藥的安全、有效?，F代高效液相色譜技術能快速、準確的檢測微量物質的含量，為中藥成分的鑒別、定量提供快速、準確的檢測手段。為以（-）-表兒茶素含量的多少來制定金蕎麥超微粉的質量控制標準提供了科學依據。

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