林存智，孫 勇，王 軍，蔣捍東

新甲型H1N1流感輕癥患者血清免疫學(xué)特征分析及臨床意義研究

林存智，孫 勇，王 軍，蔣捍東

目的 探討新甲型H1N1流感輕癥患者血清免疫學(xué)特征，指導(dǎo)臨床治療。方法 選擇新甲型H1N1流感輕癥患者26例，取外周血清2 ml，采用ELISA方法進(jìn)行單核細(xì)胞趨化蛋白－1(MCP－1)、白介素6(IL－6)、白介素8(IL－8)、白介素10(IL－10)的檢測。同時選取普通感冒患者32例，取外周血清2 ml，做對照研究。結(jié)果兩組患者外周血清中IL－8水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (t=6.12，P＜0.05)，而MCP－1、IL－6和IL－10水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (t=0.56～1.52，P＞0.05)。結(jié)論 新甲型H1N1流感輕癥患者和普通感冒患者外周血清免疫學(xué)特征基本相似，臨床治療方案也基本一致。

流行性感冒，人;流感病毒A型，H1N1亞型;細(xì)胞因子;免疫學(xué)特征

2009年4月北美地區(qū)出現(xiàn)新甲型H1N1流感患者，短短幾個月播及全球200多個國家和地區(qū)，造成全球大流行。我國疫情形勢由初期的輸入性為主逐漸變?yōu)榫硟?nèi)感染為主，由散發(fā)患者向聚集性疫情發(fā)展，由城市逐漸向農(nóng)村蔓延，流行后期重癥患者急劇增加。我國采取了防、控、治并舉的措施，有效遏制了疫情的進(jìn)一步蔓延。2010—2011年冬春季不斷出現(xiàn)散發(fā)患者，2012年春季同樣存在散發(fā)的新甲型H1N1患者，中華人民共和國衛(wèi)生部官方網(wǎng)站公布傳染病消息顯示2012年4月份國內(nèi)確診新甲型H1N1流感患者111例，無死亡患者。因此，為正確理解和治療新甲型H1N1流感輕癥患者，現(xiàn)將新甲型H1N1流感輕癥患者的免疫學(xué)特征報道如下，并與普通感冒患者進(jìn)行對照研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 患者選擇 選取新甲型H1N1流感輕癥患者26例，男19例，女7例;年齡19～22歲，平均年齡為 (20.6±1.5)歲。選取普通感冒患者32例，男23例，女9例;年齡為17～25歲，平均年齡為 (22.5±2.2)歲。兩組患者年齡、性別間具有均衡性，且均無其他基礎(chǔ)疾病。

1.1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 新甲型H1N1流感診斷標(biāo)準(zhǔn)為中華人民共和國衛(wèi)生部2009年頒布的第三版診療方案［1］;普通感冒診斷根據(jù)蔡柏薔等［2］主編的《協(xié)和呼吸病學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。

1.2 研究方法

1.2.1 血清細(xì)胞因子檢測方法 取確診的新甲型H1N1流感輕癥患者外周血2 ml，2 000 r/min離心，離心半徑14 cm，10 min，留取血清，冷存－20℃冰箱備用;用同樣的方法留取32例普通感冒患者血清2 ml，離心，冷藏備用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 單核細(xì)胞趨化蛋白－1(MCP－1)試劑盒由欣博盛生物科技有限公司提供，白介素6(IL－6)，白介素8(IL－8)，白介素10(IL－10)試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。實(shí)驗(yàn)操作均按照試劑盒提供的實(shí)驗(yàn)操作說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料以 (±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組患者外周血清免疫學(xué)特征比較，IL－8水平兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)，其余細(xì)胞因子表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05，見表1)。

表1 新甲型H1N1流感輕癥和普通流感患者外周血細(xì)胞因子表達(dá)±s，pg/L)Table 1 The expression of cytokines in the two groups

表1 新甲型H1N1流感輕癥和普通流感患者外周血細(xì)胞因子表達(dá)±s，pg/L)Table 1 The expression of cytokines in the two groups

注:MCP－1=單核細(xì)胞趨化蛋白－1，IL－6=白介素6，IL－8=白介素8，IL－10=白介素10

組別 例數(shù)MCP－1 IL－8 IL－6 IL－10 H1N1流感 26 147.0±50.3 743.5±68.3 8.5±0.9 197.9±160.1普通感冒 32 132.0±45.7 641.0±59.5 8.8±0.6 175.0±150.3 t＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 1.19 6.12 1.52 0.56 P值值

3 討論

新甲型H1N1流感是由變異后的甲型H1N1流感病毒株所引起的急性呼吸道傳染病，有以下流行病學(xué)特點(diǎn)及臨床特征:(1)通過飛沫、氣溶膠、直接接觸或間接接觸傳播，患者在發(fā)病前一天就具有傳染性［3］;(2)人群普遍易感;(3)隱性感染:無癥狀感染者，也具有傳染性［1］;(4)臨床表現(xiàn)與普通流感相似［4］。普通感冒是一種輕度、能自限的上呼吸道感染。常見病原菌有鼻病毒、冠狀病毒、流感病毒和副流感病毒，其中以鼻病毒和冠狀病毒最常見。在寒冷季節(jié)多發(fā)，發(fā)病機(jī)制為:病毒進(jìn)入鼻孔，隨后感染上呼吸道的上皮細(xì)胞，48 h內(nèi)病毒復(fù)制高峰，持續(xù)3周。但這兩種由不同病毒引起的疾病卻存在一定程度的免疫機(jī)制相似性。

流感病毒侵入機(jī)體后，刺激機(jī)體產(chǎn)生一定的免疫反應(yīng)，從而對機(jī)體的細(xì)胞因子分泌產(chǎn)生一定影響。IL－6由淋巴樣和某些非淋巴樣細(xì)胞產(chǎn)生，其生物學(xué)活性刺激細(xì)胞生長和促進(jìn)多種細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞分化，如B細(xì)胞分化和Ig的分泌、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 (CTL)分化，協(xié)同白介素2(IL－2)增強(qiáng)CTL中穿孔素基因的表達(dá)，并增加T細(xì)胞IL－2的產(chǎn)生和IL－2受體的表達(dá)，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和NK細(xì)胞分化。IL－8是由單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是一種具有趨化活性的細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞定向遷移，增加炎性反應(yīng)。

單核細(xì)胞趨化蛋白屬趨化因子CC亞家族，分子量多為8～10 kD的蛋白組成。包括MCP－1～3，可由炎性遞質(zhì)刺激的單核/巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、B細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等分泌，對單核/巨噬細(xì)胞有趨化和激活作用。MCP－1也可介導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞趨化和激活。MCP－1是β亞家族的代表，可趨化單核細(xì)胞。主要功能是招募血液中的單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等進(jìn)入感染發(fā)生的部位。

IL－10由活化胸腺細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、角朊細(xì)胞和正常B細(xì)胞、活化單核細(xì)胞、外周血T細(xì)胞產(chǎn)生。IL－10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子。病毒感染早期，IL－10的產(chǎn)生是機(jī)體控制和限制病毒感染所致炎性反應(yīng)的重要機(jī)制之一［5］。IL－10主要抑制白介素12(IL－12)和干擾素－γ(IFN－γ)分泌，從而促進(jìn)Th2型細(xì)胞分化，而且它是B細(xì)胞終分化因子。在B細(xì)胞對抗流感病毒抗原時，IL－10起關(guān)鍵作用，有助于在感染中和感染后產(chǎn)生保護(hù)性抗體。本研究結(jié)果與某些國外研究報道相似，如Nakajima等［6］對2009甲型H1N1流感死亡患者尸檢發(fā)現(xiàn)，與正常人比較其血清肺組織中 IL－10、IL－6、MCP－1水平均升高。

新甲型H1N1流感與普通感冒雖然由不同的病原體感染所致，但臨床癥狀具有一定的相似性。本研究表明機(jī)體對病毒的免疫反應(yīng)同樣存在一定的相似，外周血清中IL－10、IL－6和MCP－1表達(dá)水平無差異性，而IL－8表達(dá)具有一定的差異性，臨床治療的方案基本一致。普通感冒一般應(yīng)用抗病毒的中成藥和對癥治療即可康復(fù)，而新甲型H1N1流感輕癥患者，同樣也可以對癥治療，應(yīng)用中成藥或中成藥湯劑治療，與抗病毒治療的療效相似［7］。

毛會軍等［8］研究報道，感染新甲型HINl病毒后，外周血清中IL－10、IL－8與正常人比較均升高，而單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的IL－8卻顯著升高，與本研究的結(jié)果相似。但是否與單核/巨噬細(xì)胞吞噬病毒有關(guān)，值得以后進(jìn)一步研究。

志謝:感謝青島市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室汪照國主任提供新甲型H1N1流感患者血清標(biāo)本，感謝青島市胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科江國峰主任協(xié)助進(jìn)行實(shí)驗(yàn)標(biāo)本檢測。

1 中華人民共和國衛(wèi)生部.甲型H1N1流感診療方案 (2009年試行版第三版)［J］.中華臨床感染病雜志，2009，3(2):257－259.

2 蔡柏薔，李龍蕓.協(xié)和呼吸病學(xué)［M］.北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2011:815－816.

3 王星，杜鐘珍，李莉，等.甲型H1N1流感的臨床特點(diǎn)研究［J］.實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20(4):603.

4 程文，章隆輝，汪克文.新型甲型H1N1流感危重癥臨床分析［J］.實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20(11):1792.

5 Graham MB，Dalton DK，Oiitinan D，et al.Response to influenza infection in mice with a targeted disruption of the interferon－γ gene［J］.J Exp Med，1993，178(5):1725 －1732.

6 Nakajima N，Ham S，Sato Y，et al.The first autopsy case of pandemic influenza(A/H1N1 rxlm)virus infection in Japan:Detection of a high copy number of the virus in typeⅡalveolar epithelia cells by pathological and virological examination［J］.Jim J Infect Dis，2010，63(1):67－71.

7 林存智，王軍，鄒少木，等.甲型H1N1流感病例臨床特征分析［J］.中華傳染病雜志，2010，28(2):117－118.

8 毛會軍，陳良，沈芳.2009流行性感冒患者血清細(xì)胞因子的變化特點(diǎn)［J］.感染與微生物，2011，6(1):18－22.

Sero－immunity Characteristics of Mild Cases Infected with Influenza A H1N1 Virus

LIN Cun－zhi，SUN Yong，WANG Jun，et al.Department of Respiratory Medicine，Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College，Qingdao 266003，China

ObjectiveTo explore the sero－immunity characteristics of mild cases infected with influenza A H1N1 virus.MethodsA total of 26 mild cases with the new influenza A H1N1 and 32 cases with common cold were selected.2 ml peripheral blood was drawn from each subject and was tested by ELISA for monocyte chemo－attractant protein－1，interleukin－6，interleukin－8，and interleukin－10.Test results of the two groups were compared.ResultsThe expression of interleukin－8 was significantly different between the two groups(t=6.12，P＜0.05)，while the expression of monocyte chemo－attractant protein－1，interleukin－6 and interleukin－10 was not significantly different(t=0.56－1.52，P＞0.05).ConclusionThe sero－immunology characteristics of the mild cases with the new influenza A H1N1 virus and common cold cases are basically similar，so the therapeutic regimen can also be similar.

Influenza，human;Influenza A virus，H1N1 subtype;Cytokines;Immunology characteristic

R 373.13

A

10.3969/j.issn.1007－9572.2013.03.019

青島市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (09－1－1－51－nsh)

266003山東省青島市，青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科 (林存智，孫勇);青島市胸科醫(yī)院呼吸科 (王軍);上海仁濟(jì)醫(yī)院呼吸科 (蔣捍東)

蔣捍東，200127上海市，上海仁濟(jì)醫(yī)院呼吸科;

E－mail:jianghd@163.com

2012－11－07;

2012－12－29)

(本文編輯:邢煜)