李 鵬 喬 森

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東 濟(jì)寧272011）

乳腺癌是威脅女性健康的重要疾病，在美國(guó)，乳腺癌是女性中最常見的癌癥，也是造成死亡的第二大癌癥，發(fā)病率僅次于肺癌，已成為女性健康的第一殺手［1］。腫瘤一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移擴(kuò)散意味著腫瘤病變已經(jīng)發(fā)展到晚期，必須采用化療等全身性治療手段來解決，但化療又有骨髓抑制、肝腎損傷、消化道反應(yīng)等毒副作用［2］。

三陰性乳腺癌表達(dá)肌上皮細(xì)胞角蛋白（Cytokeratins，CK5／6）和CK17，CK5／6為該型乳腺癌的特征性標(biāo)志物。腫瘤細(xì)胞中低氧誘導(dǎo)因子－1α（hypoxia－inducible factor－1α，HIF－1α）數(shù)量上升，使癌細(xì)胞內(nèi)含氧量下降，細(xì)胞轉(zhuǎn)而用低效的酵解方式來生成ATP，這使腫瘤生物量變大，更加缺氧，形成惡性循環(huán)。

本研究探討CK5／6和HIF－1α在乳腺癌和正常乳腺組織中的表達(dá)特點(diǎn)，并結(jié)合臨床病理資料分析其與臨床特征的關(guān)系，可為揭示乳腺癌，尤其是三陰性乳腺癌的生物學(xué)特性，開展乳腺癌的獨(dú)特治療方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本來源

乳腺癌標(biāo)本來自我院2009年5月至2011年5月經(jīng)病理活檢確診的48例三陰性乳腺癌患者及212例非三陰性乳腺癌患者（乳腺癌組），正常乳腺組織標(biāo)本來自同期病理活檢未發(fā)現(xiàn)癌變的50例正常人（正常組）。兩組患者在年齡及月經(jīng)狀態(tài)方面無顯著性差異。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，抗原修復(fù)后封閉非特異性抗原，加入一抗4℃過夜，加生物素標(biāo)記的二抗室溫孵育30min。PBS沖洗切片，加鏈霉菌抗生物素－過氧化物酶溶液孵育20min。加入DAB溶液并在顯微鏡下觀察，抗體標(biāo)記的陽性部位準(zhǔn)確后，終止顯色。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判讀 0～2分為（－），3分為弱陽性（＋），4～5分為中度陽性（?），6～7分為強(qiáng)陽性（?）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中CK5／6、HIF－1α的表達(dá)

正常組及乳腺癌組的CK5／6的表達(dá)見圖1，兩組患者CK5／6的表達(dá)有顯著差異（P＜0.05）。見表1。

三陰性乳腺癌及非三陰性乳腺癌患者CK5／6的表達(dá)見圖1，三陰性乳腺癌及非三陰性乳腺癌患者CK5／6的表達(dá)有顯著差異（P＜0.05）。見表2。

圖1 兩組中CK5／6的表達(dá)（SP×400）

表1 正常組與乳腺癌組CK5／6的表達(dá)比較（n，%）

表2 三陰性乳腺癌及非三陰性乳腺癌CK5／6的表達(dá)比較（n，%）

正常組及乳腺癌組HIF－1α的表達(dá)見圖2，兩組患者HIF－1α的表達(dá)有顯著差異（P＜0.05）。見表3。

三陰性乳腺癌及非三陰性乳腺癌患者的HIF－1α的表達(dá)見圖2，兩組患者HIF－1α的表達(dá)有顯著差異（P＜0.05）。見表4。

圖2 3組細(xì)胞中HIF－1α的表達(dá)（SP×100）

表3 兩組中HIF－1α的表達(dá)比較（n，%）

表4 三陰性及非三陰性乳腺癌HIF－1α的表達(dá)比較（n，%）

2.2 CK5／6、HIF－1α的表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系

三陰性乳腺癌組中CK5／6、HIF－1α的表達(dá)與臨床病理資料的相關(guān)性見表5。CK5／6在三陰性乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤分期、腫瘤大小和淋巴結(jié)累及情況均無關(guān)；HIF－1α高表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分期、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

表5 三陰性乳腺癌組中CK5／6、HIF－1α表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系

2.3 CK5／6、HIF－1α表達(dá)的相關(guān)性

采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)三陰性乳腺癌組織中CK5／6、HIF－1α表達(dá)的相關(guān)性。48例三陰性乳腺癌中，CK5／6和HIF－1α表達(dá)呈正相關(guān)，見表6。

表6 三陰性乳腺癌組中CK5／6、HIF－1α表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

乳腺癌是多因素共同作用的結(jié)果［3－7］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)CK5／6、HIF－1α在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的表達(dá)，并分析其表達(dá)與臨床病理資料的相關(guān)性，為開發(fā)新的乳腺癌標(biāo)志性指標(biāo)進(jìn)行基礎(chǔ)研究。

當(dāng)腫瘤細(xì)胞快速分化、增殖時(shí)，一些在正常組織中不表現(xiàn)的細(xì)胞組分大量出現(xiàn)，如作為細(xì)胞支架的角蛋白成為腫瘤標(biāo)志［8］。由于角蛋白有多種類型［9］，所以也就形成了多種腫瘤標(biāo)志［10］，這一類標(biāo)志的分子組成往往是不含糖或脂的多肽鏈［11］，由于其體現(xiàn)了腫瘤共有的增殖特性，因而器官特異性差，是和多種腫瘤標(biāo)志有關(guān)的廣譜腫瘤標(biāo)志，在鱗狀細(xì)胞癌，如膀胱癌、肺癌陽性表達(dá)率較高［12］。

本組發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌組中CK5／6的表達(dá)與腫瘤分期、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)，表明CK5／6在三陰性乳腺癌中的表達(dá)狀態(tài)是由其基底樣表型所決定的，即CK5／6的表達(dá)反映了腫瘤的起源，而并不隨腫瘤自身的進(jìn)展而改變。

HIF是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子［13］。它作為一種核轉(zhuǎn)錄因子，在總體上調(diào)控細(xì)胞對(duì)氧的反應(yīng)狀況。研究發(fā)現(xiàn)HIF－1α在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展不同階段的表達(dá)呈上升趨勢(shì)［14－16］，過度表達(dá)提示預(yù)后不良。本文發(fā)現(xiàn)，乳腺癌中HIF－1α陽性表達(dá)率顯著高于正常乳腺組織，且三陰性乳腺癌中的陽性表達(dá)率高于非三陰性乳腺癌，揭示三陰性乳腺癌的腫瘤致病機(jī)制與缺氧誘導(dǎo)基因表達(dá)調(diào)節(jié)相關(guān)。

本組還發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌組中HIF－1α的表達(dá)與腫瘤分期、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，表明HIF－1α的表達(dá)反映了腫瘤自身的進(jìn)展，其陽性率越高預(yù)示著預(yù)后會(huì)越差。在48例三陰性乳腺癌中，CK5／6和HIF－1α表達(dá)呈正相關(guān)，預(yù)示HIF－1α可能間接或直接調(diào)解細(xì)胞角蛋白CK5／6表達(dá)而參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等過程。

綜上所述，CK5／6和HIF－1α在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮舉足輕重的作用。本文結(jié)論有助于進(jìn)一步研究腫瘤細(xì)胞凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移的分子水平調(diào)控機(jī)制，可為乳腺癌臨床診斷提供依據(jù)。

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