麻卲等

Bax是一種促凋亡基因，可以通過(guò)激活Caspase信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、破壞ATP合成功能、改變細(xì)胞氧化還原反應(yīng)等機(jī)制發(fā)揮促凋亡作用。增殖細(xì)胞核抗原Ki-67隨著宮頸病變程度的升高而呈上升趨勢(shì)，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后關(guān)系密切。

資料與方法

研究對(duì)象：樣本原發(fā)性宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和正常宮頸組織均來(lái)自鄭州市第一人民醫(yī)院病理科，所有病例均經(jīng)過(guò)病理組織學(xué)證明。病例年齡36～71歲，平均49.6歲，按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FlCO）宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期；宮頸鱗癌30例，宮頸上皮內(nèi)瘤變組90例（其中CINⅠ 30例，CINⅡ 30例，CINⅢ 30例），正常宮頸組20例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行化療和放療。所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)10%的福爾馬林中性溶液浸泡，常規(guī)脫水、透明、侵蠟，然后石蠟包埋。

方法：采用免疫組織化學(xué)S.P法.實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。以檸檬酸緩沖液高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)。DAB顯色，用公司出售陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。

結(jié)果判定：Bax及ki-67表達(dá)陽(yáng)性均為細(xì)胞漿呈棕黃色或棕褐色顆粒.每例均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野（X400）。用半定量積分法判斷結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分。6%～25%為1分，26%～50%為2分，5I%～75%為3分，>75%為4分。陽(yáng)性強(qiáng)度黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)積分相乘t0分為陰性（-），1～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中度陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。結(jié) 果

Bax、ki-67蛋白在宮頸癌新輔助化療前、后的表達(dá)：Bax蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要存在于細(xì)胞漿內(nèi)，隨著宮頸病變程度的升高其表達(dá)成下降趨勢(shì)，新輔助化療后較化療前明顯升高。宮頸癌組0.032±0.003，CIN組0.065±0.016，正常宮頸組0.172±0.023，3組比較（P值均<0.05），見表1。

Ki-67蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要存在于細(xì)胞核，呈棕黃色，其在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌組織中均有表達(dá)，隨著宮頸病變程度的升高其呈上升趨勢(shì)。宮頸癌組65.32±0.003，CIN組17.35±0.26，正常宮頸組9.12±0.23，3組比較（P值均<0.05），見表1。

討 論

宮頸病變從CIN到原位癌再到浸潤(rùn)癌是一個(gè)多階段、多步驟的連續(xù)過(guò)程，歷時(shí)5～10年，腫瘤的發(fā)生不僅與細(xì)胞的過(guò)度增殖有關(guān)，而且與腫瘤細(xì)胞異常凋亡有關(guān)。宮頸病變中不僅有癌細(xì)胞的過(guò)度增殖，而且存在細(xì)胞凋亡減少[1]，增值指數(shù)及治療前凋亡指數(shù)低的患者，癌的復(fù)發(fā)率較低，生存率較高。多因素分析表明增值指數(shù)和凋亡指數(shù)是兩個(gè)重要的預(yù)后因素。

Bax基因位于染色體19q13，屬水溶性蛋白，其蛋白主要位于細(xì)胞漿中，當(dāng)?shù)蛲霭l(fā)生時(shí)它從細(xì)胞漿轉(zhuǎn)移到線粒體與線粒體膜結(jié)合，再與位于線粒體的bcl-2相互作用而發(fā)揮誘導(dǎo)凋亡作用[2]，對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控起著重要作用。Bcl-2可以抑制多種組織的細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞生存而參與腫瘤的發(fā)生，是目前公認(rèn)的抗凋亡基因。本研究表明，Bax蛋白表達(dá)在宮頸癌組織中的表達(dá)低于CIN組，CIN組低于正常宮頸組，與王曉琴等[3]報(bào)道一致。結(jié)果提示Bax在正常組織中的高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡，不致引起細(xì)胞異常增殖從而引發(fā)腫瘤的形成。宮頸癌組織的表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞增殖不能得到有效控制。細(xì)胞凋亡減少，致使腫瘤向惡性轉(zhuǎn)化。

Ki-67抗原（Ki-67 antigen），簡(jiǎn)稱為Ki-67，能識(shí)別存在于G0晚期以外的細(xì)胞周期核抗原，由于其半衰期短，脫離細(xì)胞周期后迅速降解，已成為目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記之一，Ki-67參與細(xì)胞周期的調(diào)控，理論上可作為診斷和預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)治療的敏感度及其結(jié)局等方面的標(biāo)志物，在腫瘤的分級(jí)、增生程度、預(yù)后的預(yù)測(cè)中均有一定的意義。本研究表明其表達(dá)隨宮頸癌臨床分期的升高而增高，從宮頸炎到上皮內(nèi)瘤變?cè)俚綄m頸癌，其表達(dá)水平呈逐步上升趨勢(shì)，所以ki-67是診斷宮頸病變的一個(gè)有效的參考指標(biāo)。

同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)Bax的表達(dá)與ki-67的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性，提示腫瘤的發(fā)生不單是因?yàn)榧?xì)胞的異常增殖，同時(shí)也存在細(xì)胞的凋亡受阻，通過(guò)檢測(cè)組織中兩者的表達(dá)不但有利于良惡性病變的區(qū)分，并且對(duì)放化療及預(yù)后具有評(píng)估意義。

參考文獻(xiàn)

1 鄭秀惠，陳竹欽，李力，等.252锎中子放療對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（19）：1957-1959.

2 Hocenberg D，Nunez C，Millian C，et al.Bcl 2 is an inner mito-chondrial memberaneproten that blocks programmed cell death.Nature，1990，348，6299：334.

3 王曉琴，戴穹，楊志惠.bcl.2、Ki-67和bax蛋白在官頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)醫(yī)療前沿，2008，3（2）：27-28.