王宏麗 劉偉 陳延春 劉昱池

【摘 要】目的：探討AngⅡ、TNF-α在腎妊娠合并急性腎衰竭患者合并心血管并發(fā)癥體內(nèi)的變化及藥物干預(yù)作用；方法：（1）研究項目的目的意義及主要研究技術(shù)內(nèi)容的國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢；（2）正常對照組；妊娠合并腎衰竭透析病人組；透析病人伴有心血管系統(tǒng)并發(fā)癥組各18人；（3）透析病人為透前采血，正常對照組為清晨采血，采用健康組與妊娠合并急性腎衰竭對比，每周透析4次進行血清TNF-a、AngⅡ表達研究。結(jié)果：為妊娠合并急性腎衰竭患者合并心血管并發(fā)癥患者的藥物治療提供實驗數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。結(jié)論： AngⅡ、TNF-α在腎妊娠合并腎衰竭患者的變化研究完成后將會有廣泛的推廣應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】妊娠合并腎衰竭；TNF-a AngⅡ

血管緊張素Ⅱ主要在內(nèi)皮細胞及肺巨噬細胞產(chǎn)生，脂肪組織也可以產(chǎn)生，而外周血單個核白細胞表達和產(chǎn)生血管緊張素Ⅱ的相關(guān)文獻較少。Joachim jankowski等取正常人外周血單個核白細胞，用10mg/lLPS刺激2小時后用色譜法和質(zhì)譜法鑒定了上清液中血管緊張素Ⅱ存在，同時用放免法檢測，兩者具有良好的相關(guān)性，他們得到的數(shù)據(jù)是活化后每106個白細胞每分鐘可以在上清液中產(chǎn)生9.9±6.6fmol血管緊張素Ⅱ。同時，他們也證明了，外周血單個核細胞中有所有的血管緊張素Ⅱ前體物質(zhì)，并且具有生物學(xué)功能。Christof ulrich通過臨床研究也表明，透析腎功能正常組、透析妊娠合并腎衰竭組、透析腎衰伴有心血管并發(fā)癥組病人單核細胞ACE表達逐漸增加。Zhao等通過轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothe—lial growth factor，VEGF）可溶性受體1基因來阻滯VEGF的作用，觀察到血管壁炎癥反應(yīng)及重塑減輕，又將AngⅡ注入野生型大鼠體內(nèi)，利用免疫組化和組織病理的方法檢測到局部VEGF表達增多，從而證明了Ang II介導(dǎo)的VEGF產(chǎn)生在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。

1 主要研究內(nèi)容

1.1樣本量計算 根據(jù)文獻12查到的數(shù)據(jù)，由完全隨機設(shè)計兩整體均數(shù)假設(shè)檢驗的樣本量估算公式：n=2×（S/D）2×（μα+μβ） 2計算得每組需最少病例數(shù)18人。

1.2病例選擇 選取正常對照組、妊娠合并腎衰竭組、透析病人伴有心血管系統(tǒng)并發(fā)癥組各18人，各組間年齡、性別、ACEI和ARB類藥應(yīng)用情況相匹配。透析病人組選擇BMI（body mass index）、LBM（lean body mass）偏小，血白蛋白偏低，CRP偏高的病人。有急性感染的病人排除。

2 研究方法

2.1分組：正常對照組；妊娠合并腎衰竭透析病人組；透析病人伴有心血管系統(tǒng)并發(fā)癥組各18人；

2.2采血：透析病人為透前采血，正常對照組為清晨采血。每人約10～20ml。分離后可得單核細胞數(shù)約3.5×104～7.0×104；

2.3單核細胞分離：采用梯度離心法；

2.4分離出的單核細胞種于24孔培養(yǎng)板上。設(shè)干預(yù)組與非干預(yù)組，各組間保證活細胞濃度與干預(yù)的LPS濃度相同。10ng/ml LPS干預(yù)單個核細胞10～12小時；

2.5干預(yù)后取培養(yǎng)的上清液用放免法檢測AngⅡ、TNF-α濃度。購買TNF-α放免檢測試劑盒。AngⅡ在醫(yī)院檢測；干預(yù)后的細胞用流式細胞術(shù)檢測ACE表達。

3 可行性分析

3.1本課題需要的臨床觀察病例均可從長春市婦產(chǎn)科醫(yī)院、長春市中心醫(yī)院腎病科和透析室中選取。本單位婦產(chǎn)科實驗室、模擬醫(yī)院實驗室和長春市中心醫(yī)院檢驗科能夠承擔(dān)本研究的所有檢驗項目；

3.2實驗所需藥品及試劑盒均可購買到；

3.3本課題組具有相關(guān)工作基礎(chǔ)，既本單位婦產(chǎn)科、模擬醫(yī)院實驗室、長春市婦產(chǎn)科醫(yī)院、吉林大學(xué)二院和長春市中心醫(yī)院腎病內(nèi)科和透析室的教授、副教授，又有從事基礎(chǔ)研究的博士、碩士隊伍組成部分，并且均有臨床、基礎(chǔ)的科研研究經(jīng)歷，研究經(jīng)驗豐富。

4 討論

妊娠合并腎衰竭透析病人處于一種慢性炎癥狀態(tài)，炎癥加重了營養(yǎng)不良，而兩者又是促心血管并發(fā)癥的因素。血管緊張素Ⅱ在炎癥和動脈硬化中的作用已得到確認，因此血管緊張素Ⅱ也可能在腎衰透析病人的炎癥，及炎癥-營養(yǎng)不良-動脈硬化中起到重要作用。LPS可以使正常人外周血單個核白細胞血管緊張素Ⅱ表達增加，透析病人易接觸到細菌內(nèi)毒素，同時單個核白細胞又處于預(yù)激活狀態(tài)，所以，LPS激活透析病人外周血單個核細胞后也會有ACE、血管緊張素Ⅱ表達增加，并且伴有心血管并發(fā)癥的病人可能會表達更多。

妊娠合并急性腎衰竭患者合并心血管并發(fā)癥的比較多見，在血液透析患者中尤其發(fā)病率高。其機制尚不完全清楚，本研究主要探討AngⅡ、TNF-α在腎妊娠合并急性腎衰竭患者合并心血管并發(fā)癥體內(nèi)的變化及藥物干預(yù)作用，為妊娠合并急性腎衰竭患者合并心血管并發(fā)癥患者的藥物治療提供實驗數(shù)據(jù)及理論依據(jù)，同時可為廣大患者減少經(jīng)濟負擔(dān)。因此本項研究完成后將會有廣泛的推廣應(yīng)用價值。

參考文獻：

[1] 王宏麗.楊鑫。規(guī)律血液透析患者血清單個核白細胞TNF表達，《中國傷殘醫(yī)學(xué)》 2012，12：76-78

[2] 孫惠力，甘華。單核細胞對血液透析患者免疫功能影響的分子機制。中華實用醫(yī)學(xué)，2003，05（10）：76-78