唐海蓉 陳仕均 劉興友 銀梅 王選年 潘耀謙 李敬璽

摘要：將152只4日齡雄性AA+肉雞隨機分為4組，每組38只，分別在飼料中添加0（對照組）、500（試驗Ⅰ組）、1 000（試驗Ⅱ組）、1 500 mg/kg（試驗Ⅲ組）的甲砜霉素，自由采食，試驗期2周，對睪丸進行病理形態(tài)學觀察。2周后測量體重、睪丸重、睪丸臟器系數(shù)，并作睪丸石蠟切片測量曲精細管面積和觀察甲砜霉素對肉雞睪丸的病理組織學影響。結(jié)果表明，各試驗組肉雞體重和曲精細管面積以及試驗Ⅱ、Ⅲ組試驗雞的睪丸重極顯著低于對照組（P<0.01），試驗Ⅰ組試驗雞的睪丸重和睪丸臟器系數(shù)極顯著大于對照組（P<0.01）；各試驗組肉雞曲精細管出現(xiàn)不同程度的生精細胞數(shù)量減少，精原細胞和睪丸支持細胞發(fā)生水泡變性，甚至壞死，結(jié)締組織增生。結(jié)果表明，用甲砜霉素添加量500 mg/kg及以上的飼料持續(xù)飼喂肉雞，可對肉雞的睪丸造成損傷，并且這種損傷在一定范圍內(nèi)存在顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：肉雞；甲砜霉素；睪丸；組織結(jié)構(gòu)

中圖分類號：S852.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）08-1880-03

甲砜霉素又名硫霉素，是氯霉素類的第二代廣譜抗菌藥，其對大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌等都具有良好的抗菌作用[1-3]。因此，在中國廣泛使用。但在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖戶違規(guī)濫用抗生素，不僅加劇了細菌對甲砜霉素的耐藥性，而且加劇了其在動物機體內(nèi)的殘留量。國內(nèi)外研究表明，甲砜霉素具有一定毒副作用。目前，關(guān)于甲砜霉素對試驗動物小白鼠和大鼠危害的研究較多[4-6]，但對于經(jīng)濟食用動物危害的研究較少，僅見于鯉魚[7]和肉雞[8，9]，且其研究主要涉及甲砜霉素對血液生化指標、免疫器官的病理組織學，以及其在動物性產(chǎn)品中的殘留及其檢測等[10，11]方面。而關(guān)于甲砜霉素對肉雞睪丸的影響鮮有報道。本試驗通過研究不同水平的甲砜霉素對肉雞睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響，旨在探討甲砜霉素中毒的機理以及為臨床合理利用甲砜霉素提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲砜霉素為湖南湘藥制藥有限公司生產(chǎn)，純度為99.7%，批號：20050212；Leica-RM2235型切片機（德國萊卡公司）； Axiostar plus數(shù)碼顯微鏡（德國Zeiss公司）。

1.2 試驗動物分組

試驗于2010年在河南科技學院動物科學學院實訓中心進行。將152只4日齡雄性AA+肉雞（購自內(nèi)黃縣牛召鄉(xiāng)碾子頭村種雞場）稱重后隨機分為4組，每組38只，按甲砜霉素添加量分為0（對照組）、500（試驗Ⅰ組）、1 000（試驗Ⅱ組）、1 500 mg/kg （試驗Ⅲ組）。自由采食與飲水，采用3層半重疊肉雞一次育成籠舍飼，飼養(yǎng)過程嚴格遵循《AA+肉雞飼養(yǎng)管理手冊》。

1.3 檢測指標

肉雞飼養(yǎng)2周。每日觀察并記錄臨床癥狀，對發(fā)病死亡雞即時進行剖檢。每周稱重1次，記錄各組平均體重。于受試驗后2周從各組隨機抽取6只雞，分別稱體重和采血后，放血致死，剖檢并肉眼觀察睪丸的一般病變后稱重，根據(jù)臟器系數(shù)=臟器濕重/體重，計算其臟器系數(shù)。采取定期撲殺或采集死亡雞的睪丸，用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片及H.E常規(guī)染色，在普通光學顯微鏡下觀察病理組織學變化。每張切片選取30個近圓形的曲精細管，由尼康NIS-Elements D圖像處理軟件測量曲精細管面積。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計。各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差表示，用單因子方差分析檢驗各組的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲砜霉素對肉雞性狀及曲精細管面積的影響

由表1可以看出，不同劑量甲砜霉素均能抑制肉雞體重增長，降低睪丸曲精細管面積；各試驗組與對照組之間，試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ、Ⅲ組之間差異極顯著。500 mg/kg的甲砜霉素對睪丸重量和睪丸臟器系數(shù)有促進作用，顯著大于對照組；1 000 mg/kg和1 500 mg/kg的甲砜霉素對睪丸重量和睪丸臟器系數(shù)具有一定抑制作用，睪丸重量極顯著低于對照組，睪丸臟器系數(shù)與對照組之間差異不顯著，組間差異不顯著。

2.2 甲砜霉素對肉雞睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可知，對照組曲精細管形成完整的管腔，曲精細管上皮由支持細胞、精原細胞和少量初級精母細胞構(gòu)成，上皮呈多層排列，部分細胞處于分裂狀態(tài)，支持細胞數(shù)量較多（圖1-A）。與對照組相比，試驗Ⅲ組雞睪丸的曲精小管管壁完整，但小管直徑較小，曲精細管內(nèi)細胞多呈單層排列，且排列松散，生殖細胞數(shù)量較少，多為支持細胞、精原細胞、極少量的初級精母細胞；大部分生殖細胞呈現(xiàn)空泡變性，部分支持細胞核濃縮深染。曲精細管間結(jié)締組織大量增生（圖1-B）。試驗Ⅱ組睪丸的大部分曲精細管管壁完整，但管腔直徑較小，生精細胞多為單層排列，數(shù)量極少，僅見少量的精原細胞，且部分精原細胞從基膜脫落到管腔內(nèi)，支持細胞多呈濃縮深染。間質(zhì)結(jié)締組織輕度增生（圖1-C）。試驗Ⅰ組睪丸的曲精細管管壁完整，但管腔直徑較小，生精細胞排列為2或多層，部分支持細胞輕度空泡變性，局部可見核濃縮（圖1-D）。另外，各試驗組均罕見核分裂相。

3 小結(jié)與討論

研究表明，甲砜霉素可影響動物食欲，引起胃腸炎癥，阻礙動物對營養(yǎng)物質(zhì)攝入、消化和吸收[6-9]。本試驗中，各試驗組肉雞的體重極顯著低于對照組，試驗Ⅲ組顯著低于試驗Ⅰ組，試驗Ⅱ組極顯著低于試驗Ⅰ組，試驗Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著。結(jié)果表明，500 mg/kg及以上的甲砜霉素劑量長時間持續(xù)混飼，將顯著降低肉雞的生長性能，延緩體重增長，且在一定范圍內(nèi)存在劑量效應(yīng)關(guān)系。這與Maita等[6]關(guān)于甲砜霉素對大鼠和筆者關(guān)于甲砜霉素對鯉魚[7]的體質(zhì)量影響的報道一致。

睪丸臟器系數(shù)在一定程度上可反映睪丸的功能情況。當睪丸功能受損時，睪丸通過自身組織學形態(tài)的改變進行功能代償，以滿足機體的需要。本試驗中， 試驗Ⅰ組的睪丸明顯腫脹，臟器系數(shù)顯著大于對照組，表明日糧中500 mg/kg的甲砜霉素添加量可造成睪丸功能的下降。而試驗Ⅱ、Ⅲ組劑量較大，導致睪丸重量與體重下降。病理組織學檢查結(jié)果也表明， 試驗Ⅱ、Ⅲ組試驗雞的睪丸曲精細管面積顯著減小，生精細胞數(shù)量減少，精原細胞和睪丸支持細胞發(fā)生水皰變性，甚至壞死，結(jié)締組織增生，試驗Ⅰ組病變程度較輕。

綜上所述，營養(yǎng)缺乏可能是引起試驗組肉雞體重降低、睪丸重量改變、組織結(jié)構(gòu)損傷的原因之一。同時，甲砜霉素可顯著損傷腎臟，使血清蛋白隨尿液流失；顯著損傷肝臟，使肝臟合成蛋白質(zhì)減少，從而導致試驗組肉雞出現(xiàn)水腫或細胞水皰變性[8]。另外，由于甲砜霉素能阻斷造血干細胞的線粒體合成，導致造血干細胞的增生分裂停止，引起細胞的呼吸鏈電子傳遞障礙[9]，使ATP合成減少，從而使精原細胞和睪丸支持細胞發(fā)生水皰變性，甚至壞死。由于精原細胞具有增值分化為精母細胞的潛能；睪丸支持細胞具有營養(yǎng)生精細胞，合成雄激素蛋白、促進精子發(fā)生等功能，且同神經(jīng)細胞一樣沒有增殖分裂的潛力，因此一旦受損甚至死亡，所有生殖細胞都會死亡，因此上述兩種細胞的變性死亡必然導致精原細胞分裂受阻，曲精小管中生精細胞的數(shù)量減少，曲精小管變小，結(jié)締組織增生。本試驗結(jié)果與Maita等[6]關(guān)于甲砜霉素能影響生精細胞發(fā)育的研究結(jié)果一致，但與其關(guān)于睪丸支持細胞未受損傷的結(jié)果相反，可能與試驗周期和藥物劑量大小不同有一定關(guān)系。

本試驗中，甲砜霉素對肉雞睪丸的影響與其對肉雞生產(chǎn)性能的影響基本一致。有報道顯示，血清中雄激素的水平與肉雞的生長發(fā)育有密切聯(lián)系[12]，甲砜霉素是否對睪酮的分泌有顯著的影響還需進一步試驗來證實。

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