何倩　楊建　武潔

【摘 要】為了從山楂不同提取部位發(fā)現(xiàn)治療糖尿病慢性并發(fā)癥的天然物質(zhì)，對其21種不同提取物對人醛糖還原酶篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：葉的正丁醇提取物對人醛糖還原酶抑制作用最強(qiáng)。山楂葉、果、籽的水提物部位對人醛糖還原酶抑制作用優(yōu)于對照品槲皮素。

【關(guān)鍵詞】山楂；醛糖還原酶；糖尿病慢性并發(fā)癥

山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）為薔薇科植物，在我國具有悠久的保健與藥用歷史。早在東晉《肘后方》中就有山楂“莖葉煮汁，洗漆瘡”的記載，廣西、江西的地方藥材標(biāo)準(zhǔn)均載有山楂葉 [1]。20世紀(jì)50年代，人們開始對山楂葉、果的化學(xué)成分進(jìn)行研究，證實(shí)其含有大量的黃酮以及綠原酸、山楂酸、膽堿、揮發(fā)油等。有研究表明山楂葉總黃酮具有降低糖尿病小鼠血糖和血脂的作用[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明糖尿病慢性并發(fā)癥（diabetic chronic complications，DCC）與多元醇通路相關(guān)，該通路的關(guān)鍵限速酶——醛糖還原酶（aldose reductase，AR）高血糖時被激活，催化葡萄糖大量轉(zhuǎn)化為不易透過細(xì)胞膜的山梨醇，引起細(xì)胞滲透性損傷，導(dǎo)致DCC發(fā)生[3]。應(yīng)用醛糖還原酶抑制劑就成了延緩和防治DCC的關(guān)鍵因素。為尋找有效、低毒的AR抑制劑，本實(shí)驗(yàn)對山楂葉、果、籽不同提取部位進(jìn)行了篩選。

1 材料和方法

1.1 材料

UV-2401 PC紫外分光光度計（日本島津）；NADPH（sigma，純度>98%）；DL-甘油醛（ICN Biomedicals）；人AR（日本和光純藥工菐株式會社，human muscle）；槲皮素（中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。山楂標(biāo)本由新疆醫(yī)科大學(xué)生藥教研室鑒定并存放。

1.2 提取

山楂葉、果、籽分別用水、甲醇和氯仿回流提取3次。水提部分用正丁醇萃取，甲醇提取部分用乙酸乙酯萃取。得到水總提物，正丁醇層，正丁醇不溶層，甲醇提取物，乙酸乙酯層，乙酸乙酯不溶層，氯仿提取物7個部分，各部位真空干燥后用DMSO配成3.3g/L的樣品溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

酶活性測定，反應(yīng)體系：700μL pH6.2的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（buffer），100μL 1.5mmol/L NADPH，100μL 100mmol/L DL-甘油醛，3μL 3×10-2U/L的人AR與97μL buffer。25℃混勻20s后反應(yīng)180s，340nm處吸光值（ΔA）的下降值表示人AR的活性。山楂各部位對人AR的抑制是指在上述反應(yīng)體系中加入3μL樣品后酶活性的降低程度?？瞻诇y定：樣品用DMSO溶劑，人AR用buffer代替；對照測定：樣品用DMSO溶劑；陽性對照用1mg/mL的槲皮素，目前槲皮素被公認(rèn)為衡量其他醛糖還原酶抑制劑作用的陽性對照藥物。人AR抑制率（%）=[1-（ΔA樣品-ΔA空白）/（ΔA對照-ΔA空白）] ×100%[4]。

2 結(jié)果

山楂不同提取部位對人醛糖還原酶的抑制作用見表1，從表1可以看出其不同提取部位對人醛糖還原酶活性抑制強(qiáng)度。

3 討論

國內(nèi)外許多學(xué)者致力于尋找強(qiáng)有力的AR抑制劑，中藥民族藥在治療糖尿病慢性并發(fā)癥中有著千年的歷史，因此從中藥中尋找較強(qiáng)的AR抑制劑具有重要優(yōu)勢。本文研究了山楂葉、果、籽的21種不同提取部位對AR的抑制活性，實(shí)驗(yàn)采用人醛糖還原酶作為藥物篩選的酶源，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，可信度高。本文確定了山楂中對醛糖還原酶抑制作用最強(qiáng)的有效部位： 山楂葉的BuOH部位，以及山楂葉、果、籽的水總體部分其對AR的抑制強(qiáng)度均優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)品槲皮素，為進(jìn)一步分離山楂有效成分指明了方向。

參考文獻(xiàn)：

[1] LEVRAT-VERNY M A，BEHR S，MUSTAD V， et al. Low levels of viscous hydrocolloids lower plasma cholesterol in rats primarily by impairing cholesterol absorption[J]. Journal of Nutrition，2000，130（2）：243-248.

[2] 葉希韻，張隆，沈菊，王耀發(fā). 山楂葉總黃酮對糖尿病小鼠糖脂代謝的影響[J].中草藥，2005，36（11）：1683-1685.

[3] Miyamoto S.Recent advances in aldose reductase inhibitors：potential agents for the treatment of diabetic complications[J].Expert Opin Ther Patents，2002，12：621-631

[4] Yasuhiro Tezuka， Rena Kasimu， Purusotam Basnet， et al.Aldose Reductase Inhibitory Constituents of the Root of Salvia miltiorhiza Bunge[J].Chem.Pharm.Bull，1997，45：1306-1311