趙新超 馬飛 樸蓮荀

【摘要】 目的：探討與研究銀杏葉提取物對(duì)小鼠腦缺氧保護(hù)作用機(jī)制。方法：采用常壓密閉缺氧造成小鼠腦缺氧模型。記錄小鼠缺氧存活時(shí)間；測(cè)量小鼠血清中丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）含量。結(jié)果：銀杏葉提取物能顯著延長(zhǎng)小鼠常壓缺氧存活時(shí)間；與正常對(duì)照組比較，生理鹽水組的MDA、NO水平明顯升高（P<0.01，P<0.001）；與生理鹽水組比較，銀杏葉提取物（50ml/kg）組的MDA、NO水平明顯下降（P<0.01）。結(jié)論：銀杏葉提取物對(duì)小鼠腦缺氧具有很好的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抑制脂質(zhì)過(guò)氧化及NO合成有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 銀杏葉提取物；腦缺氧；作用機(jī)制

【中圖分類號(hào)】R285.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007—8517（2013）18—0021—02

缺氧對(duì)機(jī)體是一種劣性刺激，可以影響機(jī)體各種代謝，特別是機(jī)體的氧化供能，最終導(dǎo)致機(jī)體的心、腦等主要器官由于能量供應(yīng)不足而死亡。銀杏葉提取物含有豐富的黃酮類和萜內(nèi)酯等活性成分，具有擴(kuò)張血管、改善血管機(jī)能、促進(jìn)血液循環(huán)和代謝、保護(hù)機(jī)體組織和抗氧化等作用。通過(guò)采用常壓密閉缺氧造成小鼠腦缺氧模型，研究銀杏葉提取物對(duì)腦缺氧保護(hù)作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物清潔級(jí)昆明（KM）種小鼠，雌雄兼用，體重（20±2）g，由延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)SCXK吉2011-007）。

1.2 藥品及試劑銀杏葉提取物由延邊大學(xué)醫(yī)藥研究中心提供批號(hào)：20110702。丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所批號(hào)分別為：20120401；20120327）。其余試劑均為分析純。

1.3 儀器設(shè)備Baekman高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)）；SUN-RISE酶標(biāo)儀（上海金鴛醫(yī)療器械有限公司）。

2 方法

2.1 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)小鼠24只，隨機(jī)分為3組：生理鹽水組、銀杏提取物大、小劑量組，每組8只，連續(xù)灌胃14天，每日1次。每組于末次給藥后1h，將小鼠置于放入10g鈉石灰的125ml廣口瓶中密閉，造成小鼠腦缺氧模型，觀察各組小鼠存活時(shí)間。

2.2 生化指標(biāo)的測(cè)定另取32只小鼠隨機(jī)分為4組，空白對(duì)照組，生理鹽水組，銀杏提取物大（100mg/kg）、?。?0mg/kg）劑量組，每組8只。除了空白組外，灌胃給藥或同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天，每天1次。于末次給藥后1h后，小鼠置于盛有10g鈉石灰的125ml廣口瓶中，密閉缺氧10min后，取出小鼠立即取血處死，分離血清備用。按試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定血清中的MDA、NO水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS17.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間差異比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠常壓密閉缺氧存活時(shí)間的影響 由表1可知，不同劑量的銀杏葉提取物均能顯著延長(zhǎng)小鼠在密閉缺氧條件下的存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有顯著性差異（P<0.05；P<0.01）。 3.2 對(duì)小鼠腦組織中MDA、NO水平的影響由表2可知，與正?？瞻讓?duì)照組相比，生理鹽水組MDA、NO的水平顯

著增加（P<0.01）。不同劑量的銀杏葉提取物與生理鹽水組相比，均能抑制密閉缺氧小鼠血清中MDA、NO水平，

差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（JP<0.05）。

4 討論

常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)為抗整體小鼠缺氧實(shí)驗(yàn)，是篩選治療心腦組織因缺血缺氧引起功能障礙的常用方法之一。常壓密閉缺氧最終導(dǎo)致小鼠心臟和腦缺氧而死亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：銀杏葉提取物能顯著提高小鼠的常壓耐缺氧存活時(shí)間，說(shuō)明銀杏葉提取物對(duì)腦缺氧有很好的改善作用。

自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，MDA是過(guò)氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，生物體內(nèi)MDA含量越高，表明氧自由基損傷越重，對(duì)臟器、組織細(xì)胞的毒性越大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下血清中MDA含量與正?？瞻讓?duì)照組比較差異顯著，說(shuō)明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物的形成明顯增加。而給予銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中MDA水平，表明銀杏葉可顯著降低機(jī)體中脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。

另外，NO作為一種神經(jīng)遞質(zhì)在缺氧缺血性腦損傷中日益受到重視。NO既是體內(nèi)一種不可缺少的信息分子，又具有細(xì)胞毒作用，可以通過(guò)毒性作用、自由基損傷而加重腦缺氧缺血性腦損傷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下小鼠血清中NO含量顯著高于空白對(duì)照組，說(shuō)明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)NO合成明顯增加，而銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中NO水平，說(shuō)明銀杏葉能有效的抑制小鼠體內(nèi)NO合成。減輕對(duì)臟器、組織細(xì)胞的毒性，從而發(fā)揮對(duì)腦缺氧的保護(hù)作用。