郭建麗等

摘要目的：觀察枸櫞酸預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷與抑制細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。方法：建立大鼠在體缺血再灌注模型健康成年雄性D大鼠只采用隨機(jī)數(shù)字表法分為組假手術(shù)組（只穿線不結(jié)扎；ham）、缺血再灌注組（缺血分鐘再灌注1分鐘；I/R）組以及枸櫞酸預(yù)處理組（P組）。于再灌注1分鐘末采用Evans藍(lán)和，，5一氯化三苯基四氮唑（TT）雙重染色法進(jìn)行測定心肌缺血、梗死面積；提取心肌組織蛋白采用aspase-活性分光光度法檢測試劑盒檢測其活性。結(jié)果：ham組缺血面積/左心室面積；P組7.6±58明顯低于I/R組±79（P<5）；ham組梗死面積/左心室面積P組591±197顯著低于I/R組186±65（P<.5）；與ham組相比I/R組aspase-活性增加5（P<.5）；和I/R組相比P組減低（P<.5）。結(jié)論：枸櫞酸預(yù)處理可減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷其機(jī)制與下調(diào)aspase-基因表達(dá)從而抑制細(xì)胞調(diào)亡有關(guān)。

關(guān)鍵詞心肌缺血再灌注枸櫞酸細(xì)胞凋亡

心肌缺血再灌注損傷常見的臨床改變包括心肌頓抑、微血管功能失調(diào)和心肌細(xì)胞的凋亡等。細(xì)胞凋亡可能是心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)之一aspases家族蛋白酶是細(xì)胞凋亡途徑的核心成分；aspase-作為凋亡效應(yīng)蛋白是條途徑：線粒體途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)途徑、死亡受體途徑的共同下游通路在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路中占有舉足輕重的地位。枸櫞酸又名檸檬酸枸椽酸根離子可與血中鈣離子生成難解離的可溶性絡(luò)合物枸椽酸鈣降低血清鈣離子濃度；文獻(xiàn)表明缺血、缺氧時(shí)引起細(xì)胞內(nèi)酸中毒再灌注時(shí)通過H+-Na+交換和Na+-a+交換使細(xì)胞內(nèi)鈣增加進(jìn)而激活磷脂酶使膜磷脂成分受損而分解。

資料與方法

心肌缺血大鼠模型制備：采用健康成年雄性prague-Dawley（D）大鼠體重5～g。用5烏拉坦（1.g/kg）對健康成年雄性D大鼠行腹腔注射麻醉連接心電圖（Ⅱ?qū)?lián)）尾靜脈置入G套管留置針以便給藥。行氣管切開置管接動(dòng)物呼吸機(jī)控制呼吸呼吸頻率7次/分潮氣量8ml/kg吸呼比1∶。穩(wěn)定1分鐘后于胸骨左緣第、肋間開胸暴露心臟用6-無損傷縫線在左心耳右緣與肺動(dòng)脈圓錐左緣之間冠狀動(dòng)脈左前降支起點(diǎn)下mm環(huán)繞冠脈將結(jié)扎線從1根聚乙烯小管中穿出拉緊形成閉環(huán)造成缺血放松即發(fā)生再灌注。再灌注前1分鐘按照不同分組分別經(jīng)尾靜脈給予生理鹽水、枸櫞酸（.5mol/）容量1ml。

討論

197年err首次提出了凋亡的概念經(jīng)過歷年研究發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞凋亡參與了冠心痛、心律失常等心血管疾病的形成和發(fā)展過程缺血再灌注損傷時(shí)心肌細(xì)胞凋亡也明顯加重。在眾多aspase成員中caspase。被認(rèn)為是各種凋亡刺激因子激活的aspase家族中的關(guān)鍵蛋白酶與DNA斷裂、染色體凝聚和凋亡小體形成有關(guān)是直接介導(dǎo)凋亡的效應(yīng)分子。心肌梗死面積擴(kuò)大是心肌缺血再灌注損傷的一個(gè)重要特征而梗死面積的多少?zèng)Q定著缺血再灌對心肌損傷的嚴(yán)重程度。

本研究結(jié)果表明與I/R組比較P組心肌梗死面積明顯縮小提示枸櫞酸通過螯合血清中鈣離子減少進(jìn)入心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子量進(jìn)而減輕心肌缺血再灌注損傷；I/R組caspase-活性上調(diào)提示再灌注損傷和心肌梗死均能誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡同時(shí)枸櫞酸通過抑制caspase-的激活來抑制心肌缺血再灌注誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡其基本機(jī)制可能是鈣離子濃度減少使a+Mg+依賴的核酸內(nèi)切酶活化受阻從而阻斷了細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

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