張 燕 ，莫曉燕 ，曹 陽(yáng) ，胡曉燕 ，陳瑾歆 ，別 俊

(1．四川省南充市中心醫(yī)院，四川 南充 637000;2．四川省瀘州市納溪區(qū)中醫(yī)院，四川 瀘州 646300;3．四川省南充市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 南充 637000;4．川北醫(yī)學(xué)院生化教研室，四川 南充 637000)

芪膠膏是根據(jù)南充市中心醫(yī)院何進(jìn)主任中醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)方，由醫(yī)院制劑室研制而成的純中藥制劑，由黃芪、阿膠、三七、制何首烏等12味中藥組方，用于治療氣血兩虛、肝腎不足所致的少氣乏力、面色蒼白、腰膝酸軟、頭暈耳鳴等癥，臨床療效顯著[1]。為了控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)中以黃芪、三七、制何首烏薄層色譜的定性鑒別作為評(píng)價(jià)的客觀指標(biāo)。

1 儀器與試藥

CP225D型電子分析天平(麥多利斯);超聲波清洗器(功率150 W，頻率50 kHz);硅膠 G板、硅膠 GF254板(青島海洋化工廠)。芪膠膏(南充市中心醫(yī)院，批號(hào)為120001);黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)為0781-9908)、三七對(duì)照藥材(批號(hào)為120941-200506)、何首烏對(duì)照藥材(批號(hào)為120934-200507)均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 黃芪

取芪膠膏16 g，置具塞錐形瓶中，加入乙醚20 mL超聲脫脂2次，每次10 min，棄去乙醚液。置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇萃取4次，第1次40 mL，以后每次30 mL;合并正丁醇萃取液，用氨試液洗滌2次，每次30 mL;棄去洗滌液，回收正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀? mL溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1．5 cm，柱高12 cm)，以50 mL水洗脫，棄去水液;再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇80 mL洗脫;收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓浦? mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取缺黃芪的陰性樣品同法制成陰性對(duì)照品溶液。取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，在日光下檢視顯相同顏色的斑點(diǎn)，置紫外光燈(365 nm)下檢視顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);陰性對(duì)照品溶液無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 黃芪薄層色譜圖

2．2 三七

按2．1項(xiàng)下方法制備三七供試品溶液和三七陰性對(duì)照品溶液。另取三七對(duì)照藥材1 g加水20 mL，加熱回流提取2 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，自水飽和的正丁醇萃取4次起，按2．1項(xiàng)下方法制成對(duì)照藥材溶液。分別吸取三七供試品溶液10 μL、三七對(duì)照藥材溶液5 μL和陰性對(duì)照品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)此斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 三七日光下薄層色譜圖

2．3 何首烏

取芪膠膏40 g，置具塞錐形瓶中，加入乙醚30 mL超聲脫脂2次，每次10 min，棄去乙醚液，加乙醇50 mL，超聲1 h，濾過，濾液蒸干，加乙醇2 mL，取上清液即得供試品溶液。另取缺何首烏的陰性樣品同法制成陰性對(duì)照品溶液。取何首烏對(duì)照藥材0．25 g，加乙醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至2 mL作為對(duì)照藥材溶液。分別吸取供試品溶液20 μL、對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯 -冰醋酸(15 ∶1．5 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的黃色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)此斑點(diǎn)。見圖3。

3 討論

由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，提取液中溶出物質(zhì)較多，既有待測(cè)成分也有其他雜質(zhì)，常常由于相互干擾或背景污染而難以獲得滿意的分離效果。因此，供試品溶液前處理時(shí)，應(yīng)根據(jù)制劑中所含的不同成分及所需鑒別成分理化性質(zhì)的不同，選擇合適的前處理工藝。如在制備黃芪的供試品溶液時(shí)，根據(jù)制劑特點(diǎn)先選用乙醚去脂，再以水飽和的正丁醇提取，取蒸干后的樣品點(diǎn)樣，得到的薄層色譜圖中樣品的斑點(diǎn)較深，考慮可能為雜質(zhì)影響所致，遂增加過D101型大孔吸附樹脂柱以去掉部分水溶性雜質(zhì)。結(jié)果顯示，過柱后的黃芪供試品溶液的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。

圖3 何首烏日光下薄層色譜圖

三七與黃芪的主要成分均為三萜皂苷類[2]，本試驗(yàn)曾采用2010年版《中國(guó)藥典(一部)》三七藥材項(xiàng)下的展開劑三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的下層溶液進(jìn)行展開，但相鄰物質(zhì)的分離效果較差。后采用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，展開效果較好[3]。制何首烏選用對(duì)照藥材何首烏，采用2010年版《中國(guó)藥典(一部)》何首烏藥材項(xiàng)下的展開劑[3]，展開效果較差，后改用參考抗腦衰膠囊何首烏鑒別項(xiàng)下的展開劑，分離效果較好。

本試驗(yàn)通過系統(tǒng)研究，對(duì)芪膠膏樣品中黃芪、三七、何首烏建立了薄層色譜定性鑒別方法。所建立的方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于芪膠膏的質(zhì)量控制。

[1]何 進(jìn)，羅志敏，張 燕，等．芪膠生血湯治療慢性疲勞綜合征的臨床觀察[J]．西部醫(yī)學(xué)，2010，22(7):1 201-1 205．

[2]鄭虎占，董澤宏，佘 靖．中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M]．北京:學(xué)苑出版社，1998:201-202．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:11，909，164．