李明松許 青

1.貴州省安順職業(yè)技術學院，貴州 安順 561000；2.貴州省安順市人民醫(yī)院，貴州 安順 561000

高效液相色譜法測定苦參中苦參堿的含量

李明松1許 青2

1.貴州省安順職業(yè)技術學院，貴州 安順 561000；2.貴州省安順市人民醫(yī)院，貴州 安順 561000

目的：探討苦參中苦參堿的測定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC法），用Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）色譜柱，以乙腈－無水乙醇－水（80∶10∶10）為流動相，磷酸調PH＝2，流速為1.0ml/min，柱溫為50℃，檢測波長為210nm。結果：苦參堿在0.0141～0.0865 mg/ml之間與峰面積積分值呈良好的線性關系（r＝0.9962），平均加樣回收率98.15%，RSD＝1.42%。結論：HPLC法操作簡便，結果準確，可用于苦參中苦參堿的含量測定。

高效液相色譜法；苦參堿；含量測定

苦參［1］為豆科槐屬（Leguminosae）植物Sophora flavescens Ait的干燥根，性寒，味苦。具有清熱燥濕，殺蟲，利尿等功效，主要作用有以下幾點：①用于濕熱瀉痢，便血，黃疸；②用于濕熱帶下，陰腫陰癢，疥癬；③用于濕熱小便不利。本品含20多種生物堿，主要為苦參堿、氧化苦參堿，由于苦參藥材中主要含有生物堿和黃酮兩大類化學成分，其中生物堿中又以苦參堿和氧化苦參堿的含量較高，多作為控制質量的有效成分［2］。本文采用高效液相色譜法對苦參中苦參堿的含量進行測定，來檢測該法對苦參藥材的質量控制是否可行。

1 實驗儀器、藥品

苦參堿對照品（批號：110805－200306）供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所；苦參藥材購于貴陽市花果園藥材批發(fā)市場，經中藥鑒定教研室劉芃教授鑒定為豆科槐屬（Leguminosae）植物苦參Sophora flavescens Ait的干燥根；高效液相色譜儀（LC5A），日本島津；所用試劑均為分析純。

2 溶液、試液配制

2.1 對照品溶液的制備 取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對照品，精密稱定，置10m l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，得到濃度為0.4024mg·ml－1的苦參堿對照品溶液，然后精密吸取1ml對照品溶液至100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，最終得到濃度為4.024μg·ml－1的苦參堿對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 稱取苦參塊約50g，精密稱定，加入8倍量PH＝4.5的酸水，置于50℃的恒溫水浴內浸泡15 min，電爐加熱至沸，微沸30min，取出濾液；藥渣再分別煎煮兩次，每次加入8倍量的酸水，煎煮30min，合并三次濾液，濃縮至250ml左右，3000r/min離心10min，轉移到250ml容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，用10m l移液管精密吸取10m l水提液倒入分液漏斗中，加入氨水用酸度計調PH＝10左右，用60ml氯仿分三次萃取，合并氯仿層，揮干，加入甲醇溶解，定容到10m l容量瓶中，即得。

3 含量測定方法［3－4］

采用高效液相色譜法測定苦參中苦參堿的含量。

3.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）；柱溫：50℃；流動相：乙腈－無水乙醇－水（80∶10∶10），磷酸調PH＝2；流速：1.0ml/min；檢測波長210nm。

3.2 線性范圍考察 精密吸取濃度為4.024μg·ml－1的苦參堿對照品溶液0.5μl、3.5μl、6.5μl、9.5μl、12.5μl、15.5μl、18.5μl、21.5μl，按色譜條件進樣，測定峰面積。以苦參堿對照品（x，mg·m l－1）為橫座標，峰面積積分值（y）為縱座標進行線性回歸，得回歸方程為Y苦＝1.2829· 10－4X-2.1811·10－4，r＝0.9962，苦參堿在0.0141～0.0865 mg·ml－1范圍內呈良好線性關系。

3.3 穩(wěn)定性試驗 按2.2供試品溶液制備方法，制備供試品溶液，再按3.1色譜條件操作，每隔2小時進樣一次，每次進樣20μl，測定苦參堿峰面積，結果表明，供試品中苦參堿面積在8小時內基本不變，計算結果如表1，苦參堿RSD＝1.5601%。

表1 苦參堿穩(wěn)定性試驗

3.4 重復性試驗 取同一批苦參樣品按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，按3.1色譜條件下進樣，測定苦參堿峰面積，計算結果列入表2，苦參堿含量RSD%＝2.6566。3.5 加樣回收試驗 取已知濃度的苦參樣品水提液，從中分別精密吸取出9份樣品溶液，每份樣品10ml，分為三組（即A、B、C，每一組的三個樣為同一水平），在這三組中分別加入7、8、9ml濃度為0.0176 mg.ml－1的苦參堿對照品，照上述色譜條件，進樣、測定，記錄色譜圖，計算含量，求相對標準偏差，RSD＝1.4239%，結果表明，此方法具有較好的加樣回收率，結果見表3。

表2 重復性實驗

表3 苦參堿加樣回收實驗

4 討論

4.1 利用高效液相色譜法對苦參藥材中的主要成分苦參堿進行含量測定，該法操作簡便、快速準確，分離效果好，穩(wěn)定性和重復性好，可作質量控制方法。適用于對苦參藥材的質量控制。

4.2 曾采用乙腈－無水乙醇－水（90∶5∶5）作為流動相，結果峰形不太穩(wěn)定，改為乙腈－無水乙醇－水（80∶10∶10）后，苦參堿得到良好的分離。

［1］李家實.中藥鑒定學［M］.上海科學技術出版社，2001年第1版，2001：108.

［2］李家實.苦參生物堿測定［J］.北京中醫(yī)學院學報，1984，（2）：25.［3］金莉霞，崔燕巖.苦參生物堿的高效液相色譜法測定［J］.藥學學報，1993，28（2）：136.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（第1版）［M］.化學工業(yè)出版社，2005：161.

表3 不同產地穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

3 討論

3.1 檢測波長的確定 分別比較了225nm、254nm及 225nm（0～15min）和254nm（15～25min）條件下穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的峰面積，結果發(fā)現(xiàn)分段檢測其值最大，故選擇檢測波長為225nm（0～15min），用于檢測穿心蓮內酯，254nm（15～25min）用于檢測脫水穿心蓮內酯，所確定的檢測波長與國家藥典［4］收載的數(shù)據(jù)一致。

3.2 流動相的選擇 曾采用乙腈－水（65：35）、甲醇－水（60：40）等多種溶劑體系作為流動相，色譜分離效果和峰形均不理想。綜合考慮峰形、分離度、出峰時間等因素，經反復摸索，發(fā)現(xiàn)甲醇－水（65：35）作為流動相最為理想。

3.3 通過我們的研究證明，產自GAP規(guī)范化種植基地的穿心蓮藥材有效成分普遍高于普通產地，且相對較穩(wěn)定，該法是提高藥材質量的有效途徑，值得推廣。

參考文獻

［1］江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典（下冊）.［M］.上海：上?？茖W技術出版社，1986.

［2］王國才，胡永美，張曉琪，等.穿心蓮的化學成分［J］.中國藥科大學學報，2005，36（5）：405～407.

［3］謝青，陳珠靈，洪培山，等.反相高效液相色譜法同時測定穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20（5）：1194～1195.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版一部）.［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：2013.02.02）

Determ ining M atrine Content in Sophora Flavescens by HPLC

LiMing－song1，Xu Qin2
（1.Anshun Vocational and Technical College，Guizhou，561000，China；2.The people＇s Hospital of Anshun City，Guizhou，561000，China）

Objective：In order to investigate the determination ofmatrine in the sophora flavescens.Methods：By adopting the method of high－performance liquid chromatography（HPLC），using Zorbax NH3（4.6mmx1.5mm）chromatographic column，taking acetonitrile－ethanol－water（80∶10∶10）asmobile phase，modulating orthophosphoric acid as pH＝2，with the flow being 1.0ml/min，the column temperature being 50℃，and the wavelength of detection being 210nm.Results：The matrine showed a good linear relationship（r＝0.9962），with the integral value of peak－area being from 0.0141 mg/m l to 0.0865 mg/ml.The average rate of recovery was98.15%with relative standard deviation（RSD）of1.42%.Conclusion：The HPLCmethod is operated easily，and the result of detection is accurate，which can be used for the content determination ofmatrine in sophora flavescens.

high performance liquid chromatography（HPLC）；matrine；content determination

R284.1

A

1007－8517（2013）05－0019－02

2013.01.21）