徐群飛，劉淑媛，張世錕，胡 意，萬臘根

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西南昌330006)

·質(zhì)量控制·

血液分析儀顯微鏡鏡檢規(guī)則的建立與驗(yàn)證

徐群飛，劉淑媛，張世錕，胡 意，萬臘根

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西南昌330006)

目的建立并驗(yàn)證血液分析儀顯微鏡鏡檢規(guī)則。方法通過對(duì)500份血液標(biāo)本同時(shí)用血液分析儀分析和顯微鏡鏡檢，參考12條顯微鏡鏡檢陽性標(biāo)準(zhǔn)確定各項(xiàng)設(shè)定的鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率和假陰性率。結(jié)果紅細(xì)胞系、白細(xì)胞系、血小板系及三系聯(lián)合的真陽性率為99.00%、96.49%、99.00%、95.90%；假陽性率分別為12.98%、10.78%、5.86%、1.43%；真陰性率為87.02%、89.22%、94.14%、98.57%；假陰性率分別為1.00%、3.51%、1.00%、4.10%。結(jié)論紅細(xì)胞、血小板及三系聯(lián)合陽性報(bào)警要求鏡檢可作為XE-2100D血液分析儀的鏡檢規(guī)則；而白細(xì)胞陽性報(bào)警要求鏡檢可起到一定的過篩作用，但必須通過設(shè)置白細(xì)胞系其它一些鏡檢規(guī)則來彌補(bǔ)其不足,防止漏診。

血液分析儀；顯微鏡檢查；鏡檢規(guī)則

Sysmex XE-2100D血液分析儀采用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色熒光技術(shù)對(duì)外周血細(xì)胞進(jìn)行分類[1]，并可分析原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞，大大提高了工作效率，使檢驗(yàn)工作人員從繁重的工作中解放出來，但對(duì)血細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)分析依然不夠完善，遇到可疑標(biāo)本必須通過手工鏡檢來復(fù)查，而南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院為大型綜合性醫(yī)院，病種多而復(fù)雜，同時(shí)標(biāo)本量又非常多，所以，高復(fù)檢率與臨床即時(shí)檢驗(yàn)、快速檢驗(yàn)的要求相矛盾，如何根據(jù)醫(yī)院的條件制定有效的復(fù)檢規(guī)則已受廣泛關(guān)注，針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室制定血細(xì)胞顯微鏡復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)是非常有必要的[2]。同時(shí)根據(jù)CNASCL43[3]的要求，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)[4]，建立了本實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)血液分析儀Sysmex XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)需要作顯微鏡鏡檢的規(guī)則，并且我們對(duì)建立的鏡檢規(guī)則進(jìn)行了驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器儀器為日本東亞公司生產(chǎn)的SysmexXE-2100D全自動(dòng)血液分析儀和Sysmex SP-1000i全自動(dòng)血涂片制備儀；顯微鏡為Olympus CH-21雙筒光學(xué)顯微鏡。

1.2 試劑SysmexXE-2100D全自動(dòng)血液分析儀原裝配套試劑及全血質(zhì)控物；瑞氏染液，染液按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的要求配制[5]。

1.3 XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)需要作顯微鏡鏡檢規(guī)則

1.3.1 紅細(xì)胞系鏡檢規(guī)則(1)RBC、HGB超出線性范圍或無結(jié)果；(2)HGB＜70g/L或大于參考區(qū)間上限20g/L；(3)MCV＜65fl或＞105fl；(4)MCHC＞380g/ L；(5)MCHC＜300g/L，且MCV≥80fl；(6)RDW-CV首次結(jié)果＞22%。

1.3.2 白細(xì)胞系鏡檢規(guī)則(1)WBC超出線性范圍或無結(jié)果；(2)首次WBC＜2.0×l09/L或＞20.0×l09/L；(3)無DC結(jié)果或DC結(jié)果不全；(4)成熟中性粒細(xì)胞＜1.0×l09/L或＞20.0×l09/L；(5)成熟淋巴細(xì)胞＞5.0× l09/L；(6)嗜酸性粒細(xì)胞＞2.0×l09/L；(7)嗜堿性粒細(xì)胞＞0.5×l09/L；(8)出現(xiàn)NRBC陽性報(bào)警；(9)WBC結(jié)果不可靠陽性報(bào)警；(10)出現(xiàn)IG陽性報(bào)警；(11)核左移陽性報(bào)警；(12)不典型或變異淋巴細(xì)胞報(bào)警；(13)有Blasts陽性報(bào)警。

1.3.3 血小板系鏡檢規(guī)則(1)PLT超出線性范圍或無結(jié)果；(2)首次PLT＜30×l09/L或＞500×l09/L；(3) MCV＜65fl；(4)任何計(jì)數(shù)結(jié)果伴PLT聚集報(bào)警。

1.4 涂片鏡檢結(jié)果為陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)(12條國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn))[6](1)紅細(xì)胞明顯大小不等，＞1／2淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30%；(2)巨大血小板多于15%；(3)見到血小板聚集；(4)Dohle小體的粒細(xì)胞＞10%；(5)中毒顆粒中性粒細(xì)胞＞10%；(6)空泡變性粒細(xì)胞＞10%；(7)原幼細(xì)胞≥1%；(8)早幼／中幼粒細(xì)胞≥1%；(9)晚幼粒細(xì)胞＞2%；(10)異型淋巴細(xì)胞＞5%；(11)NRBC≥1%；(12)漿細(xì)胞≥1%。

1.5 鏡檢規(guī)則的驗(yàn)證方法

1.5.1 標(biāo)本每天抽取100份新鮮血常規(guī)標(biāo)本(住院病人標(biāo)本以血液科、腫瘤科為主，門診標(biāo)本為隨機(jī)選取)，共500例標(biāo)本。

1.5.2檢測(cè)方法每天用XE-2100D檢測(cè)配套質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，在控后檢測(cè)病人標(biāo)本，同時(shí)用SP-1000i制片染色，再由二名有經(jīng)驗(yàn)的工作人員進(jìn)行顯微鏡鏡檢，對(duì)照國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)觀察RBC、WBC、PLT形態(tài)有無異常，并對(duì)WBC進(jìn)行分類。

1.5.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)參照鏡檢陽性標(biāo)準(zhǔn)(12條國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn))確立XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)紅細(xì)胞系、白細(xì)胞系、血小板系鏡檢規(guī)則及三系聯(lián)合規(guī)則的真陽性、假陽性、真陰性、假陰性。其真陽性為觸犯鏡檢規(guī)則需要鏡檢而鏡檢為陽性；假陽性為觸犯鏡檢規(guī)則需要鏡檢而鏡檢為陰性；真陰性為沒有觸犯鏡檢規(guī)則同時(shí)鏡檢為陰性，假陰性為觸犯鏡檢規(guī)則而鏡檢為陽性。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法采用四格表法計(jì)算真陽性率、假陽性率、真陰性率和假陰性率。

2 結(jié)果

2.1 參照國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)，遵照紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板及三系聯(lián)合，其真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率見表1。

表1 各系規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率(%)

2.2 XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)對(duì)單一的NRBC和IG鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率見表2。

表2 單一NRBC、IG鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率(%)

3 討論

上述結(jié)果顯示紅細(xì)胞系和血小板系鏡檢規(guī)則的假陰性率均為1.00%，其假陽性率分別為12.98%和5.86%，說明XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)，我們遵照設(shè)立的紅細(xì)胞系和血小板系的鏡檢規(guī)則，對(duì)異常紅細(xì)胞和血小板檢測(cè)不容易出現(xiàn)漏診，但其假陽性率偏高達(dá)12.98%和5.86%，說明有一定的誤診率，增加了人工顯微鏡鏡檢的工作量，但我們認(rèn)為本研究中導(dǎo)致紅細(xì)胞鏡檢假陽性率高的原因與“12條國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)”中對(duì)紅細(xì)胞系僅設(shè)置了一條陽性標(biāo)準(zhǔn)即“紅細(xì)胞大小不等，＞1／2淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30%”造成的，而沒有考慮到紅細(xì)胞其它形態(tài)異常如出現(xiàn)球形紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞、靶形紅細(xì)胞及含H-J小體紅細(xì)胞等可作為陽性標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，本研究中我們就發(fā)現(xiàn)1例有靶形紅細(xì)胞而未列入真陽性的病例。

結(jié)果也顯示白細(xì)胞系和三系聯(lián)合鏡檢規(guī)則的假陰性率分別為3.51%和4.10%，符合國際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組關(guān)于假陰性率＜5.0%的規(guī)定[1]，可達(dá)到篩選的目的，假陽性率分別為10.78%和1.43%，說明其有一定的誤診率，會(huì)增加一定的工作量。

表2結(jié)果顯示XE-2100D作血細(xì)胞分析時(shí)，如遵守單一有核紅細(xì)胞(NRBC)和幼稚細(xì)胞(IG)鏡檢規(guī)則時(shí)其假陰性率分別為3.85%和67.67%，說明XE-2100D作NRBC分析具有一定的篩查，能達(dá)到國際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組關(guān)于假陰性率小于5.0%的規(guī)定，但作白細(xì)胞分析時(shí)，其對(duì)IG的漏診率太高，達(dá)不到篩選的作用，但是我們可通過設(shè)置白細(xì)胞系其它鏡檢規(guī)則來彌補(bǔ)其不足,防止漏診。

綜上所述，血液分析儀在作白細(xì)胞分析時(shí)可起到一定的過篩作用，但必須設(shè)置鏡檢規(guī)則來防止漏診，由于各系血細(xì)胞分析原理不同，我們認(rèn)為應(yīng)針對(duì)各細(xì)胞系設(shè)置鏡檢規(guī)則，同時(shí)我們建議“12條國際涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)”中應(yīng)增加紅細(xì)胞系鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，如球形紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞、靶形紅細(xì)胞及H-J小體等可設(shè)為陽性參數(shù)。

[1]伍柏青,傅新文.當(dāng)代五分類血細(xì)胞分析儀技術(shù)原理分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4):391-39.

[2]]陳小劍,王曉歐,李綿綿.XE-2100血細(xì)胞分析儀血涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定及評(píng)價(jià)[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(4):384-387．

[3]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL43醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].北京: 2012.

[4]XE-2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組.Sysmex XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2008,31(7):752-757.

[5]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:123.

[6]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al.The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J].Lab Hematol 2005,11(2):83-90.

R446

A

1674-1129(2013)06-0566-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.06.020

江西省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目，編號(hào)：20121BBG70049