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HBV母嬰宮內(nèi)垂直傳播與新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變相關(guān)性

2013-02-20 00:58,
精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志 2013年5期
關(guān)鍵詞:陽性者臍帶血畸變

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(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)實驗室,山東 青島 266071)

乙型肝炎病毒(HBV)可通過血源、性和母嬰垂直途徑等傳播,其中母嬰垂直傳播約占我國HBV感染者的30%~50%,每年約有80萬新生兒通過母嬰傳播成為HBV表面抗原(HBsAg)攜帶者。HBV母嬰垂直傳播可發(fā)生于產(chǎn)前、產(chǎn)時和產(chǎn)后等,其中,在妊娠期間病毒通過胎盤屏障引起胎兒宮內(nèi)感染是母嬰垂直傳播最重要的方式。如果出生的嬰兒為女性, 未來會以同樣的方式使其后代獲得感染,這可能是我國人群HBV感染率居高不下的重要原因之一。 因此, 研究HBV感染孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染的風(fēng)險度及其對胎兒的危害,對采取有效的干預(yù)措施阻斷HBV宮內(nèi)感染或減輕損傷具有重要的意義。本文選取83例HBV感染孕婦,檢測其新生兒臍帶血中HBsAg, 并同時檢測臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變情況,旨在探討HBV宮內(nèi)感染與新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變的相關(guān)性。 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

取淄博市婦幼保健院住院分娩HBV感染孕產(chǎn)婦83例,年齡22~40歲,其中HBsAg單項陽性者12例,HBsAg、抗-HBc雙項陽性者8例,HBsAg、HBeAg雙項陽性者24例,HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項陽性者27例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性者12例;1年內(nèi)無X線內(nèi)外照射史及化學(xué)物質(zhì)接觸史。共分娩出新生兒83例,男43例,女40例。對照組為隨機(jī)選取的20例無HBV感染的孕產(chǎn)婦及其所生新生兒。

1.2 臍帶血采集與處理

胎兒娩出后,對臍帶進(jìn)行常規(guī)消毒,用一次性注射器取臍靜脈血3 mL,立即接種入1640培養(yǎng)基,并同時保留抗凝血送檢。

1.3 檢測方法

1.3.1新生兒臍帶血HBsAg檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測新生兒臍帶血HBsAg,診斷試劑盒由英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)。操作步驟與結(jié)果判斷嚴(yán)格參照說明書的要求。以新生兒臍帶血中HBsAg陽性作為宮內(nèi)感染診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2外周血淋巴細(xì)胞染色體制備 采用廣州一生駿1640培養(yǎng)基與廣州達(dá)暉1640培養(yǎng)基兩線培養(yǎng)。臍帶血接種后置37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)69~72 h,加50 mg/L的秋水仙素40 μL搖勻,再培養(yǎng)30 min后收獲。常規(guī)低滲、預(yù)固定、固定、制片、染色。

1.4 染色體畸變的判斷標(biāo)準(zhǔn)

顯微鏡下每例標(biāo)本每線各計數(shù)50個中期細(xì)胞分裂象,觀察、記錄其染色體畸變情況,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié) 果

本文83例HBV感染產(chǎn)婦新生兒臍帶血中共檢出宮內(nèi)感染41例,感染率為49.4%;對照組20例新生兒中,未檢出HBV宮內(nèi)感染。12例HBsAg單項陽性孕婦所生新生兒,檢出HBsAg陽性者2例,占16.7%;8例HBsAg、抗-HBc雙項陽性孕婦的新生兒中,未檢出HBsAg陽性者;24例HBsAg、HBeAg雙項陽性孕婦所生新生兒,檢出HBsAg陽性者12例,占50.0%;27例HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項陽性孕婦所生新生兒,檢出HBsAg陽性者20例,占74%;12例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性孕婦所生的新生兒中,檢出HBsAg陽性者7例,占58.3%。

將83例新生兒分為宮內(nèi)感染組和未感染組,宮內(nèi)感染組41例臍帶血淋巴細(xì)胞均觀察到染色體畸變,6例染色體畸變率<3%,24例染色體畸變率為3%~5%,11例染色體畸變率>5%,其中1例染色體數(shù)目異常;未感染組29例發(fā)生染色體畸變者占69%,3例染色體畸變率<3%,19例染色體畸變率為3%~5%,7例染色體畸變率>5%;對照組14例發(fā)現(xiàn)為3%~5%畸變(70%),其畸變率均<3%。感染組臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變風(fēng)險高于非感染組及對照組(χ2=27.03,P<0.01)。

3 討 論

目前,臨床常用HBV感染的實驗室診斷的指標(biāo)仍為“兩對半”,由于其中的3種抗體(抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe)均為IgG,可通過胎盤,故臍帶血HBsAg陽性是診斷胎兒宮內(nèi)感染的一個重要指標(biāo)[1]。刁奇志等[2]的研究結(jié)果進(jìn)一步證實,臍帶血HBsAg陽性新生兒外周血HBV DNA均為陽性,并且臍帶血采集簡單,對新生兒無創(chuàng)傷,因此,用臍帶血HBV標(biāo)志物作為篩查胎兒宮內(nèi)感染指標(biāo)已得到廣泛認(rèn)可。本研究結(jié)果顯示,HBV感染孕婦胎兒獲得先天性感染的概率可高達(dá)近50%,與部分文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致。HBV先天性感染的嬰兒治愈率非常低,其成年后一旦發(fā)病,90%左右都呈慢性病程,愈后較差,與成年人HBV感染大多呈急性病程形成鮮明的反差。因此,我國防治乙型肝炎的重點在于有效阻斷母嬰垂直傳播,包括新生兒強(qiáng)制接種乙型肝炎疫苗及高效價HBV抗血清的應(yīng)用等。

核型分析結(jié)果顯示, 41例先天性感染的新生兒,其臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變發(fā)生率為100%,高于未感染組的69%,統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異,未感染組與對照組染色體畸變發(fā)生率無顯著差異;但是對照組染色體畸變率在1%~3%之間,感染組臍帶血染色體畸變率>3%的構(gòu)成比高于未感染組; 并且感染組中有1例發(fā)生染色體數(shù)目異常, 表明臍帶血染色體畸變的發(fā)生與HBV宮內(nèi)感染密切相關(guān)。 HBV導(dǎo)致染色體畸變可能機(jī)制如下。①患有乙肝的孕婦可以通過胎盤將HBV傳給胎兒,HBV通過抑制和干擾胎兒細(xì)胞 DNA的合成而導(dǎo)致某些染色體發(fā)生斷裂、重接或缺失等畸變。②基因性傳播,即在受精卵形成之前,孕婦體內(nèi)的HBV DNA已整合到卵細(xì)胞的DNA上,并使受精卵的染色體受到損害,也可能HBV在生殖細(xì)胞分裂過程中介入,由此導(dǎo)致新生兒的染色體發(fā)生畸變甚至形成嵌合型或者純合型染色體畸變(包括結(jié)構(gòu)異常和數(shù)目異常)。

本文結(jié)果顯示,未感染組臍血淋巴細(xì)胞的畸變構(gòu)成比與對照組相似,但畸變率明顯增高,其原因為:雖然卵細(xì)胞未整合HBV DNA,但是HBV感染孕婦卵細(xì)胞質(zhì)量下降,使受精卵在分裂過程中出現(xiàn)各種類型的畸變,具體原因有待進(jìn)一步探討。

正常人淋巴細(xì)胞染色體畸變率較低,大約為0.55%~ 0.58%,在受到射線、化學(xué)物質(zhì)、病毒等因素刺激后會引發(fā)染色體畸變,使畸變率增加[3];也有報道新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變率可達(dá)到1%左右[4]。本研究結(jié)果顯示,對照組新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變率為1%~3%,高于文獻(xiàn)報道的結(jié)果,分析其原因可能為:①本研究僅以孕婦有無HBV感染為分組依據(jù),未考慮其他導(dǎo)致染色體損傷的理化因素;②不同實驗室判斷標(biāo)準(zhǔn)略有差異,有一定的主觀性。有待進(jìn)一步研究探討。

[1] 趙澄泉,戴淑真,邵濟(jì)鈞. 先天性巨細(xì)胞病毒、乙型肝炎病毒和弓形體感染的研究[J]. 青島醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 1991,27(2):133-137.

[2] 刁奇志,張丹,王代永. 臍帶血乙型肝炎標(biāo)志物篩查乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染的探討[J]. 中國病原生物學(xué)雜志, 2009,4(1):14-15.

[3] 周煥庚,夏家輝,張思仲. 人類染色體[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1987:369-371.

[5] 林寶寧,趙玲玲,畢風(fēng)華. 2 269例新生兒臍帶血染色體分析[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 1997,4:35-36.

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