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(臨沂市人民醫(yī)院，山東 臨沂 276003 1 消化科； 2 檢驗(yàn)科)

肝硬化是一種常見的慢性肝臟疾病，早期可無(wú)癥狀，后期可出現(xiàn)肝功能減退、門脈高壓及多系統(tǒng)受累的表現(xiàn)，如造血系統(tǒng)的損害。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝硬化病人血小板α-顆粒膜蛋白(CD62P)的表達(dá)，探討CD62P與肝臟功能受損嚴(yán)重程度的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選取我科住院肝硬化病人30例，男25例，女5例；年齡35～68歲。肝硬化診斷均符合1995年第五次全國(guó)傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)。按Child-Pugh分級(jí)，A級(jí)10例，B級(jí)10例，C級(jí)10例。所有病例均無(wú)心、腦、腎疾病及糖尿病史，亦無(wú)急性感染。以我院保健查體中心體檢健康者20例作為正常對(duì)照組，男10例，女10例；年齡21～50歲。所有研究對(duì)象采血前1周均未服影響凝血功能的藥物。

1.2 方法

1.2.1CD62P檢測(cè) 兩組均于清晨空腹采集外周靜脈血2 mL，經(jīng)38.4 g/L枸櫞酸鈉抗凝，加入4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL，室溫固定15 min，800 r/min離心5 min，取上清液即為富含血小板血漿。取50 μL加入藻紅蛋白標(biāo)記的抗CD62P單克隆抗體(CD62P PE，美國(guó)Becton-Dickinson公司產(chǎn)品)20 μL，混勻作為測(cè)定管；另取富含血小板血漿50 μL加入磷酸鹽緩沖液(PBS)40 μL混勻作為對(duì)照管。兩管均室溫下避光作用20 min,立即加4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL混勻；加PBS液2 mL漂洗，以2 000 r/min離心5 min后棄去上清液，重復(fù)上述步驟2次，調(diào)整血小板密度為10×109/L。用流式細(xì)胞儀(FAC-Sean型，美國(guó)Becton-Dickinson公司)檢測(cè)，獲取數(shù)據(jù)用Cell Quest Plot軟件進(jìn)行分析，得出CD62P陽(yáng)性血小板百分率。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血小板表面CD62P表達(dá)比較

肝硬化組和正常對(duì)照組CD62P陽(yáng)性血小板百分率分別為(12.10±7.52)%和(2.74±1.05)%，肝硬化組顯著高于正常對(duì)照組(t=6.693，P<0.01)。

2.2 不同分級(jí)肝硬化病人血小板表面CD62P表達(dá)比較

A、B、C級(jí)肝硬化病人CD62P陽(yáng)性血小板百分率分別為(5.88±2.03)%、(9.20±4.06)%和(20.67±7.61)%，隨著肝硬化程度的加重，CD62P表達(dá)增高(F=28.370，P<0.01)。

3 討 論

CD62P又稱P選擇素，主要存在于靜止血小板表面α-顆粒膜上，對(duì)血小板活化具有高度敏感性和特異性，是體內(nèi)血小板活化的特異性指標(biāo)[1]。本研究結(jié)果表明，肝硬化病人CD62P表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，且與Child-Pugh分級(jí)相關(guān)，說(shuō)明肝硬化病人血小板高度活化，血小板有不同程度的破壞，肝硬化程度越重，血小板破壞越多。CD62P表達(dá)增高是反映血小板活化程度及功能狀態(tài)的標(biāo)志之一[2-3]。

肝硬化病人大多脾功能亢進(jìn)，血小板破壞過多，單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)會(huì)代償性分泌血小板,而血小板自身有巨型和畸形的形態(tài)變化，產(chǎn)生大體積血小板是為適應(yīng)機(jī)體凝血的需要[4]。楊愛華等[5]認(rèn)為，肝硬化病人隨著肝功能的減退和Child-Pugh評(píng)分升高，血小板平均體積明顯增大。THOMPSON 等[6]認(rèn)為，體積越大的血小板含致密體越多，有更高的活性。通過觀察肝硬化病人血小板CD62P表達(dá)，能全面分析血小板的活化程度以及功能狀態(tài)，有助于早期發(fā)現(xiàn)肝硬化造成的岀血、凝血障礙，有助于判定病情和預(yù)后，對(duì)臨床治療有重要意義。

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