謝 喬， 王文婧， 李國強， 王 英， 張曉琦， 葉文才

(暨南大學(xué)1.藥學(xué)院中藥及天然藥物研究所;2.中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及創(chuàng)新藥物研究廣東省高校重點實驗室，廣東 廣州 510632)

仔欖樹為夾竹桃科(apocynaceae)仔欖樹屬植物，別名黃羊、黃平樹、洪達木，分布于印度尼西亞、緬甸、越南、印度、斯里蘭卡、馬來西亞以及中國大陸的廣東、海南等地，常生長在低海拔至中海拔山地密林中、疏林中、山谷和水溝旁土壤肥沃濕潤地方.仔欖樹的根，味苦、性涼，有消炎止痛的功能，用于蛇毒咬傷、跌打腫痛諸癥［1］.目前對仔欖樹化學(xué)成分的研究主要集中于生物堿成分，另外也報道一些酚性物質(zhì)［2］等非生物堿類成分，但對非生物堿成分的研究到目前為止比較少，為全面研究仔欖樹各類成分及更好地開發(fā)利用仔欖樹資源，本課題組對仔欖樹葉95%乙醇(體積分數(shù))提取物的正丁醇部位進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離了11個化合物，分別鑒定為(±)-赤-3-甲氧基-4羥基苯基丙三醇(1)、(±)-蘇-3-甲氧基-4-羥基苯基丙三醇 (2)、(+)-syringaresinol-4，4'-O-bis-β-D-glucopyranoside(3)、1，3，5-三甲氧基苯 (4)、丁香酸葡萄糖苷 (5)、2，6-二甲氧基-4-羥基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (6)、3，5-二甲氧基-芐醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (7)、(2E，6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″fwdarw6')-β-D-glucopyranosyloxy)-2，6-dimethyloct-2-eno-1，2″-lactone(8)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (9)、2-甲胺基苯甲酸 (10)、D-1-O-methyl-myo-inositol(11).化合物1～11均為首次從該植物中分離得到.

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑和材料

Bruker AV-300/AV-400型超導(dǎo)核磁共振儀;Finnigan LCQ Advantage MAX質(zhì)譜儀;Jasco P-1020型全自動旋光儀;Jasco FT/IR-480 Plus Fourier Transform型紅外光譜儀(KBr壓片);Jasco V-550型紫外/可見光譜儀;Agilent 1200分析型高效液相色譜儀;硅膠GF254薄層預(yù)制板為煙臺化學(xué)工業(yè)研究所產(chǎn)品;柱層析硅膠(200～300目，80～100目，硅膠H)為青島海洋化工廠產(chǎn)品;十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)柱層析材料為Merck公司產(chǎn)品;Sephadex LH-20為 Amersham Biosciences產(chǎn)品;所用試劑均為分析純或化學(xué)純.

實驗所用仔欖樹藥材于2010年9月采于海南省尖峰嶺，經(jīng)海南大學(xué)生物工程研究中心黃世滿老師鑒定為夾竹桃科仔欖樹屬植物仔欖樹的干燥葉子.

1.2 提取分離

干燥仔欖樹葉子19.1 kg，粉碎，95%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮后至無醇味，得到總浸膏3.1 kg.向浸膏中加適量水混懸，依次用石油醚、氯仿和正丁醇萃取，回收溶劑后得到石油醚萃取物(500 g)，氯仿萃取物(1.7 kg)，正丁醇萃取物(800 g)，水層(128 g).正丁醇萃取物(730 g)以硅膠柱層析用氯仿-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，經(jīng) TLC檢識合并得到24個餾分，從薄層點板情況看餾分2，4，8～10，12～14在薄層板上的成點性較好，對這幾個餾分經(jīng)反復(fù)硅膠色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、ODS以及制備型HPLC分離純化，得到化合物1(4.3 mg)、2(4.1 mg)、3(9.6 mg)、4(3.0 mg)、5(8.2 mg)、6(6.4 mg)、7(13.3 mg)、8(20.1 mg)、9(7.3 mg)、10(3.2 mg)、11(100.7 mg).

2 結(jié)果

對分離得到的11個化合物通過光譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:

(1)化合物 1:無色油狀物 (甲醇);UV(CH3OH):280，229，205 nm;IR(KBr):3 434，1 636 cm-1;ESI-MS m/z 237 ［M+Na］+，213［MH］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.01(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.77(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-5)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，4.53(1H，d，J=6.4 Hz，H-1')，3.86(3H，s，OCH3)，3.74(1H，m，H-2')，3.65(1H，m，H-3'β)，3.59(1H，m，H-3'α).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:148.9(C-3)，147.1(C-4)，134.9(C-1)，121.1(C-6)，115.9(C-5)，112.0(C-2)，76.8(C-2')，76.3(C-1')，64.7(C-3')，56.5(OCH3).化合物1的旋光幾乎為零，故推測此化合物為外消旋體.以上數(shù)據(jù)與文獻［3］報道一致，故鑒定化合物1為(±)-赤-3-甲氧基-4-羥基苯基丙三醇((±)-erythro-guaiacylglycerol).

(2)化合物 2:無色油狀物 (甲醇);UV(CH3OH):280，229，205 nm;IR(KBr):3 420，1 632，1 521 cm-1;ESI-MS m/z 237 ［M+Na］+，213 ［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.99(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.76(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-5)，6.81(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，4.52(1H，d，J=6.4 Hz，H-1')，3.87(3H，s，OCH3)，3.67(1H，m，H-2')，3.47(1H，m，H-3'α)，3.35(1H，m，H-3'β).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:149.0(C-3)，147.3(C-4)，134.9(C-1)，120.8(C-6)，116.1(C-5)，111.7(C-2)，77.8(C-2)，75.6(C-1)，64.4(C-3)，56.5(OCH3).化合物2的旋光幾乎為零，故推測此化合物為外消旋體.以上數(shù)據(jù)與文獻［3］報道一致，故鑒定化合物2為(±)-蘇-3-甲氧基-4-羥基苯基丙三醇((±)-threo-guaiacylglycerol).

(3)化合物 3:白色球狀固體 (甲醇)，UV(CH3OH):274，215 nm;IR(KBr):3 389，2 930，1 597，1 507，1 127 cm-1;-33.4°(c 0.5，CH3OH);ESI-MS m/z 765［M+Na］+，741［M-H］-.1HNMR(400 MHz，C5D5N)δ:6.91(4H，s，H-2，6，2'，6')，6.12(2H，d，J=7.2 Hz，H-1″，H?)，3.77(12H， s， OCH3).13C-NMR(100MHz，C5D5N)δ:154.2(C-3，3'，5，5')，138.6(C-4，4')，136.3(C-1，1')，105.0(C-2，2'，6，6')，103.8(C-1″，1?)，86.4(C-7，7')，76.9(C-3″，3?)，73.5(C-2″，2?)，72.7(C-5″，5?)，72.5(C-9，9')，69.2(C-4″，4?)，63.0(C-6″，6?)，57.0(OCH3)，55.0(C-8，8').以上數(shù)據(jù)與文獻［4］報道的相符，故鑒定化合物3為(+)-syringaresinol-4，4'-O-bis-β-D-glucopyranoside.

(4)化合物4:無色顆粒(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.33(3H，s，H-2，4，6)，3.88(9H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:149.0(C-1，3，5)，108.5(C-2，4，6)，57.0(OCH3).以上核磁數(shù)據(jù)推斷化合物4為1，3，5-三甲氧基苯(1，3，5-trimethoxybenzene).

(5)化合物5:白色粉末 (甲醇)，UV(CH3OH):251，214 nm;IR(KBr):3 368，1 667，1 596，1 229 cm-1;ESI-MS m/z 383［M+Na］+，359［MH］-.1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ:7.81(2H，s，H-3，7)，6.00(1H，d，J=7.2 Hz，glc 1'-H)，4.43(1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，glc 6'α-H)，4.35(4H，m，glc 2'，3'，4'，6'β-H)，3.99(1H，m，glc 5'-H)，3.78(6H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ:169.4(C-1)，153.7(C-4，6)，139.9(C-5)，128.7(C-2)，109.0(C-3，7)，104.7(C-1')，79.3(C-3')，78.8(C-2')，76.4(C-5')，71.2(C-4')，63.0(C-6')，56.9(OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻［5］報道的數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物5為丁香酸葡萄糖苷(glucosyringic acid).

(6)化合物6:無色晶體 (甲醇)，ESI-MS m/z 355 ［M+Na］+，331 ［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.06(2H，s，H-3，5)，4.63(1H， d， J=7.2 Hz， H-1')，3.68(6H， s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:153.9(C-4)，153.2(C-2，6)，127.5(C-1)，103.5(C-1')，93.9(C-3，5)，77.0(C-3')，76.5(C-2')，74.2(C-5')， 70.0(C-4')， 61.0(C-6')， 56.1(OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻［6］報道數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物 6為 2，6-二甲氧基-4-羥基-苯酚-1-O-β-D吡喃葡萄糖苷(2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside).

(7)化合物7:無色晶體 (甲醇)，UV(CH3OH):270，207 nm;IR(KBr):3 337，2 915，1 596，1 242 cm-1;ESI-MS m/z 369 ［M+Na］+.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.68(2H，s，H-2，6)，4.90(1H，d，J=7.4 Hz，H-1')，4.46(2H，s，H-7)，3.74(6H，s，OCH3)，3.62(1H，m，H-5')，3.44(1H，m，H-3')，3.25(2H，m，H-2'，6'α)，3.18(1H，t，J=7.4 Hz，H-4')，3.05(1H，dq，J=5.4，2.0 Hz，H-6'β).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:154.1(C-2，6)，139.5(C-4)，134.2(C-1)，106.0(C-3，5)，103.8(C-1')，78.3(C-3')，77.9(C-5')，75.1(C-2')，71.1(C-4')，63.8(C-7)，62.0(C-6')，56.8(OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻［7］報道數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物7為3，5-二甲氧基-芐醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3，5-dimethoxy-benzyl alcohol 4-O-β-D-glucopyranoside).

(8)化合物8:白色針晶 (甲醇)，UV(CH3OH):216 nm;IR(KBr):3 377，2 868，1 698，1 279 cm-1;ESI-MS m/z 485 ［M+Na］+，461 ［MH］-.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.67(1H，t，J=8.2 Hz，H-3)，4.89(1H，m，H-16)，4.31(1H，d，J=8.0 Hz，H-15)，4.12(1H，d，J=7.6 Hz，H-14α)，3.99(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，3.74(1H，dd，J=12.0 Hz，H-19α)，3.69(1H，s，H-18)，3.59(1H，m，H-17)，3.48(1H，d，J=12.0 Hz，H-19β)，3.47(1H，t，J=6.8 Hz，H-8)，3.17(1H，m，H-14β，13)，3.09(1H，m，H-11)，2.90(1H，m，H-10)，2.81(1H，m，H-12)，2.24(1H，m，H-4α)，2.13(1H，m，H-4β)，1.75(3H，s，H-20)，1.46(1H，m，H-6)，1.35(2H，m，H-5，7)，0.91(3H，d，J=4.0 Hz，H-21).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:166.5(C-1)，141.9(C-3)，127.1(C-2)，101.9(C-9)，101.5(C-15)，76.5(C-11)，75.3(C-13)，73.4(C-10)，72.2(C-16)，70.7(C-17)，70.6(C-12)，69.7(C-14)，68.5(C-18)，67.5(C-8)，66.4(C-19)，34.8(C-5)，34.1(C-7)，29.1(C-6)，24.5(C-4)，22.0(C-21)，12.4(C-20).以上數(shù)據(jù)與文獻［8］報道的一致，故鑒定化合物8為(2E，6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″fwdarw6')-β-D-glucopyranosyloxy)-2，6-dimethyloct-2-eno-1，2″-lactone.

(9)化合物9:黃色粉末(甲醇)，UV(CH3OH):350，262，215 nm;IR(KBr):3 460，3 166，1 654，1 552 cm-1;ESI-MS m/z 471［M+Na］+，447［MH］-.1H-NMR(300 MHz，CD3OD)δ:8.08(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.88(2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，6.41(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.13(1H，d，J=7.5 Hz，glc 1″-H)，3.44-3.82(6H，H of glc).13CNMR(75 MHz，CD3OD)δ:179.8(C-4)，166.3(C-7)，163.2(C-5)，161.8(C-4')，159.3(C-9)，158.7(C-2)，135.8(C-3)，132.5(C-2'，6')，122.9(C-1')，116.3(C-3'，5')，105.8(C-10)，105.2(C-1″)，100.1(C-6)，95.0(C-8)，77.3(C-3″)，75.2(C-2″)，73.2(C-5″)，70.2(C-4″)，62.2(C-6″).以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道的數(shù)據(jù)一致，與文獻［10］報道的數(shù)據(jù)相符，故鑒定化合物9為山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (kaempferol-3-O-β-D-glucoside).

(10)化合物10:淡黃色針狀晶體 (甲醇)，ESI-MS m/z 152［M+H］+，150［M-H］-.1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.86(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6)，7.35(1H，dt，J=8.0，1.6 Hz，H-4)，6.69(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-3)，6.55(1H，dt，J=8.0，1.6 Hz，H-5)，2.88(3H，s，NCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:168.4(C=O)，154.0(C-2)，135.7(C-4)，133.3(C-6)，115.3(C-5)，111.8(C-3)，107.4(C-1)，29.8(NCH3).以上核磁數(shù)據(jù)推斷化合物10為2-甲胺基苯甲酸(2-methylamino-benzoic acid).

(11)化合物 11:白色晶體 (甲醇)，+3.4°(c 0.5，H2O);ESI-MS m/z 217［M+Na］+，193［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，D2O)δ:3.41(3H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，D2O)δ:81.1(C-1)，74.4(C-5)，71.8(C-3)，70.0(C-6)，69.1(C-4)，66.8(C-2)，56.7(OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻［11］報道數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物11為D-1-O-methyl-myo-inositol.

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