李向陽 錢如林 劉鳳娟 張會民 崔東 王珂

肺癌是起自肺支氣管與肺泡上皮細胞中的臨床常見疾病，屬于惡性腫瘤，對人類健康與生命有嚴重威脅，且已成為全球范圍內(nèi)惡性腫瘤中第一致死疾病[1]。肺癌發(fā)病機制較為復(fù)雜，其發(fā)病及發(fā)展過程中有許多基因參與其中[2]。非小細胞肺癌是肺癌常見類型，在所有肺癌中占比高達80%以上[3]。增殖細胞核抗原（PCNA）屬于DNA多聚酶輔助蛋白，已有臨床研究證實，PCNA可對細胞增值活性予以直接反映，是DNA復(fù)制中必不可少的附屬蛋白，可對DNA增值發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[4]，其含量變化和細胞增值間具有一定聯(lián)系。為對PCNA與非小細胞癌發(fā)病及發(fā)展間的關(guān)系進行深入探討，筆者選取本院手術(shù)切除非小細胞肺癌組織蠟塊76例，同時選取正常肺組織24例，利用免疫組化SP法對兩組組織中PCNA表達情況進行分析，現(xiàn)將相關(guān)情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2008年6月-2010年7月手術(shù)切除非小細胞肺癌組織蠟塊76例作為觀察組，所有標本均為手術(shù)過程中切取，且已經(jīng)病理確診。其中男42例，女34例，患者年齡為35～81歲，平均為（56.7±4.6）歲；其中腺癌29例，鱗癌43例，腺鱗癌4例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）于1997年制定的TNM分期標準進行分級，其中Ⅰ期18例，Ⅱ期33例， Ⅲ期25例。所有患者在手術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療。手術(shù)中同時在距離腫瘤至少5 cm處取健康肺組織24例作為對照組。

1.2 方法 采用免疫組化SP法對兩組組織中PCNA表達情況進行檢測。SP試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，鼠抗人PCNA單克隆抗體由邁新公司生產(chǎn)，嚴格按照說明書展開操作，具體操作步驟為：對切片行脫蠟水化，利用3%H2O2在室溫下進行5～10 min孵育，置于高壓鍋中行抗原修復(fù)；將一抗滴入其中，于4 ℃環(huán)境下靜置過夜，第2天加入二抗，在37 ℃下進行20 min孵育；用DAB進行顯色處理，以蘇木素作為標準對比染色結(jié)果，利用樹脂進行封片。

1.3 判定標準 通過對PCNA蛋白染色結(jié)果分析對檢測結(jié)果進行判定。PCNA陽性：染色部分位于細胞核上，為褐色或棕色染色，且染色方式為彌漫型或顆粒型（其中顆粒型較為常見）；陰性：切片中未見陽性細胞。

1.4 統(tǒng)計學處理 利用統(tǒng)計學分析軟件SPSS 14.0對相關(guān)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用字2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間PCNA表達情況對比 所有PCNA表達均于細胞核中均勻分布，陽性表達為細胞核中有棕黃色顆粒物出現(xiàn)。對照組PCNA陽性率為8.33%（2/24），觀察組PCNA陽性率為72.37%（55/76），觀察組PCNA陽性率顯著高于對照組（P<0.05）。

2.2 不同分期中PCNA表達情況 在76例非小細胞肺癌組織標本中，Ⅰ～Ⅱ期共51例，經(jīng)檢測PCNA陽性36例，陽性率為70.59%；Ⅲ 25例，經(jīng)檢測PCNA陽性19例，陽性率為76.00%。Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ患者PCNA陽性率間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.3 PCNA陽性與陰性患者1年及3年生存率對比 對觀察組76例患者展開為期3年隨訪，對1年生存率及3年生存率進行記錄。其中 55例PCNA陽性患者1年生存率為52.73%（29/55），3年生存率為16.36%（9/55）；21例PCNA陰性患者1年生存率為80.95%（17/21），3年生存率為38.10%（8/21）。對比可知，PCNA陽性患者1年及3年生存率均顯著低于PCNA陰性患者（P<0.05）。

3 討論

PCNA也叫做周期素，屬于酸性核蛋白，其分子量為36 KD。PCNA是對細胞增值活性予以直接反映的重要標志物，可在細胞增殖過程中，對G1期向S期過渡階段發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，可對DNA前導鏈與后隨鏈合成予以協(xié)調(diào)，和細胞核增殖關(guān)系密切，可作為對細胞增殖狀態(tài)予以衡量的重要客觀指標[5-6]。通常情況下，當腫瘤細胞分化程度較低時，其增殖能力相對較強，此時PCNA表達也相對較強。因此，PCNA表達可對腫瘤細胞DNA復(fù)制活躍程度予以直觀反映，從而對腫瘤惡性程度予以顯示。

肺癌組織中細胞增殖活性較為旺盛，因此其PCNA含量與正常細胞相比明顯增高。在本組研究中，對照組PCNA陽性率為8.33%，觀察組PCNA陽性率為72.37%，觀察組PCNA陽性率顯著高于對照組（P<0.05），由此可知在肺癌組織中有顯著增殖上調(diào)現(xiàn)象。同時，本次研究發(fā)現(xiàn)，雖然Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ期患者PCNA陽性率間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但隨著臨床分期推移，非小細胞肺癌組織中淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移范圍會不斷擴大，PCNA陽性表明腫瘤增殖具有較高活躍性。在76例非小細胞肺癌組織中，PCNA陽性者1年及3年生存率均顯著低于PCNA陰性患者（P<0.05）。由此可見，PCNA陽性表達說明患者預(yù)后相對較差。

因為非小細胞肺癌組織中PCNA陽性表達提示腫瘤細胞有旺盛增殖能力，這說明PCNA陽性表達水平和是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與肺癌分化程度間有密切聯(lián)系[7-9]。因此，PCNA表達可在肺癌患者接受個體化治療中發(fā)揮重要指導作用，同時有利于腫瘤預(yù)后判斷工作。在非小細胞肺癌患者病理分期為Ⅰ～Ⅲ期、可行手術(shù)切除治療時，應(yīng)展開分子靶向藥物、手術(shù)治療與化療的綜合治療過程。在術(shù)前應(yīng)利用經(jīng)皮肺穿刺及氣管鏡活檢等方式對病理予以明確，同時利用免疫組化SP法對患者PCNA表達水平進行檢測。若檢測結(jié)果顯示PCNA為陽性表達，則提示患者腫瘤惡性程度相對較高且預(yù)后較差。因此在患者無絕對禁忌證時，手術(shù)治療對其腫瘤分期降低或遠期生存率提高有重要意義。

總之，PCNA高度表達是對小細胞肺癌患者預(yù)后造成影響的重要因素，其異常表達和肺癌發(fā)病、進展與轉(zhuǎn)移間有密切關(guān)系，可作為對肺癌惡性程度與預(yù)后進行準確判斷的重要指標。

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