張成梅，史艷秋，趙秀蘭，宋文延，張翠麗，陳晶晶，紀(jì)建波，謝克勤

山東大學(xué) 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 2公共衛(wèi)生學(xué)院毒理學(xué)研究所 3醫(yī)學(xué)院診斷學(xué)研究所 4藥學(xué)院藥理研究所，濟(jì)南250012

在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中，藥物毒性是藥物研發(fā)的重要內(nèi)容之一，也是制約藥物能否走向臨床的關(guān)鍵性因素。肝臟是藥物代謝的重要器官，通過(guò)肝臟代謝后，多數(shù)藥物對(duì)人體的毒性被消除，但是也有一些無(wú)毒或低毒的物質(zhì)通過(guò)生物轉(zhuǎn)化后會(huì)變成有毒或毒性更高的物質(zhì)。因此，作為生物轉(zhuǎn)化過(guò)程的發(fā)生器官，肝臟就必然成為研究藥物毒性的重要靶器官。本研究以毒性靶器官肝臟作為研究對(duì)象，采用臨床常規(guī)血清生化法和病理法檢測(cè)，另外增加酶組織化學(xué)法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)肝臟變化情況，以比較不同檢測(cè)法對(duì)毒性反應(yīng)的敏感性，對(duì)藥物毒性早期反應(yīng)進(jìn)行判斷，分析藥物產(chǎn)生毒性的可能性，提高重要臟器敏感指標(biāo)預(yù)測(cè)毒性的準(zhǔn)確性，為藥物安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

材料和方法16只Beagle犬，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為對(duì)照組 (Veh)、低分子量褐藻多糖硫酸酯 (low molecular weight fucoidan，LMWF)低［L，200 mg/(kg·d)、中 ［M，800 mg/(kg·d)、高 ［H，3000 mg/(kg·d)劑量組，每組4只。灌胃給藥，1次/d，每周6 d，給藥13周。檢測(cè)第1次給藥前及末次給藥后的動(dòng)物血清生化指標(biāo)。末次給藥后，麻醉處死動(dòng)物取肝臟，在肝臟相同位置取1 cm3大小組織，速凍、切片及染色，進(jìn)行酶組織化學(xué)檢測(cè)。另取肝臟組織用4%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡檢查。采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用one-Way ANOVA法檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

結(jié)果給藥前及給藥結(jié)束，LMWF各劑量組動(dòng)物血清生化各指標(biāo)與Veh組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0.05)。光學(xué)顯微鏡觀察顯示，實(shí)驗(yàn)階段各組動(dòng)物肝臟未見(jiàn)病變，顯微鏡檢查所見(jiàn)基本一致，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索呈放射狀排列，肝細(xì)胞呈多邊形，核圓形居中，中央靜脈清晰，門(mén)管區(qū)含有動(dòng)、靜脈和膽小管。LMWF各組與Veh組比較，L組ATPase活性變化不明顯 (+++～++);M組ATPase活性降低(++～+);H組酶活性顆粒明顯減少，顆粒分布面積變小，隱約見(jiàn)淺棕色樹(shù)枝狀分布，斷斷續(xù)續(xù)。定量分析表明，LMWF各組與Veh比較ATPase活性降低，以H組酶活性降低明顯 (P＜0.05)。LMWF各組與Veh組比較，L、M組酶活性顆粒變化不明顯 (+++～++)，H組酶活性顆粒明顯減少 (+)。定量分析結(jié)果證實(shí)，H組較Veh組SDH活性明顯下降 (P＜0.05)。

結(jié)論肝細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化，在藥物毒性反應(yīng)較低情況下，血清生化及病理沒(méi)發(fā)生改變前已發(fā)生變化，提示酶組化檢測(cè)方法較臨床上常用的血清生化檢測(cè)敏感，可以作為一種對(duì)毒性反應(yīng)更敏感的檢測(cè)方法，更準(zhǔn)確反映肝內(nèi)代謝狀況和肝細(xì)胞受損程度，提高藥物毒性檢測(cè)的準(zhǔn)確性。