劉 源，沈好文

(江蘇省鎮(zhèn)江藥品檢驗所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003)

高效液相色譜法測定化痔靈片中沒食子酸含量

劉 源，沈好文

(江蘇省鎮(zhèn)江藥品檢驗所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003)

目的測定化痔靈片中沒食子酸含量，建立一種靈敏度高、重現(xiàn)性好的檢測方法。方法使用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，采用甲醇－0.1%磷酸溶液(10∶90)為流動相，檢測波長273 nm，柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min。結(jié)果沒食子酸質(zhì)量濃度在3.25 ～16.27 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系(r=1.000)，平均回收率為 100.17%，RSD=0.94%(n=6)。結(jié)論該法靈敏、簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，線性關(guān)系良好，可作為制劑質(zhì)量控制的的指標(biāo)之一。

化痔靈片;沒食子酸;高效液相色譜法;含量測定

化痔靈片[1]主要由黃連[2]、琥珀、苦地膽、三七、五倍子等12味 傳統(tǒng)中藥組方，有涼血、收斂、消炎的功效，用于內(nèi)外痔瘡。本品是有10多年生產(chǎn)歷史的中藥復(fù)方制劑，療效確切，市場需求量大。五倍子[3]為方中主藥，沒食子酸為五倍子中鞣質(zhì)主要成分。為更好控制化痔靈片質(zhì)量，現(xiàn)采用高效液相色譜法對制劑中沒食子酸含量[4－5]進(jìn)行測定，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;AG245型電子天平(瑞士梅特勒公司);UV－2401PC型紫外分光光度計。沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110831－200302);甲醇為色譜醇，其他試劑(AR級);化痔靈片(吉林長春制藥有限公司，批號為 090810，100101)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.1%磷酸溶液(10 ∶90);柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;檢測波長:273 nm。理論板數(shù)按沒食子酸計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

稱取沒食子酸對照品10.17 mg，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，精密量取5 mL溶液，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精取溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取樣品裝量差異項下供試品，研細(xì)，取一片量，精密加入4 mol/L的鹽酸溶液50 mL，水浴中加熱水解3.5 h，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，作為供試品溶液。取不含五倍子的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液，依法進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，陰性對照品溶液對測定無干擾。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精取對照品貯備液 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置25 mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密取10 μL進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)、對照品質(zhì)量濃度(g/L)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=30.145 X+0.065 9，r=1.000。結(jié)果表明，沒食子酸質(zhì)量濃度在 3.25 ～ 16.27 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，按擬訂的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為1.18%，表明進(jìn)樣精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h 時進(jìn)樣測定并計算。結(jié)果含量的 RSD為0.36%，表明12 h內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批號樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果沒食子酸平均含量為 0.125 mg/片，RSD為0.34%，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量。結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結(jié)果

2.4 樣品含量測定

取2.2項下供試品溶液和對照品溶液，各進(jìn)樣10 μL，以峰面積按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果沒食子酸的含量分別為36.61，35.40 mg/片，平均 36.00 mg/片。

3 討論

曾比較甲醇－0.1%磷酸溶液(15∶85)和甲醇 －0.1%磷酸溶液(10∶90)為流動相時的效果，前者因甲醇量較多且出峰太快使峰難分開?；天`片中還有黃連、琥珀、槐花等其他成分，使分離效果不好。用后者為流動相，沒食子酸出峰時間比較合適，且能與他成分峰分開，可以測定樣品中沒食子酸含量。

曾比較用50%甲醇和用流動相稀釋2.2項下的溶液，結(jié)果表明在用流動相稀釋的溶液中的最大吸收波長，在高效液相色譜法中，選擇其附近的273 nm作為檢測波長時，響應(yīng)值最大，靈敏度最高，故選擇273 nm作為測定波長。

[1]WS3－B－2294－97，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十二冊)[S].

[2]蔡小玲，秦貽強.HPLC法測定化痔靈片中鹽酸小檗堿的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010(13):18－24.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:62.

[4]許乾麗，茅向軍，熊慧林，等.HPLC測定寧泌泰膠囊中沒食子酸的含量[J].中成藥，2001(9):19－21.

[5]張建民，關(guān) 晶，徐蕭槿.高效液相色譜法測定利水通淋軟膠囊中沒食子酸含量[J].中國藥業(yè)，2009，18(21):40－41.

Determination of Gallic Acid in Huazhiling Tablets by HPLC

Liu Yuan，Shen Haowen
(Zhengjiang Municipal Institute for Drug Control，Zhenjiang，Jiangsu，China 212003)

ObjectiveTo establish highly sensitive and better reproductive determination method by determining the gallic acid content in Huazhiling Tablets.Methods The Shimadzu C18column(250 mm × 4.6 mm，5 μm)was used with methanol－ 0.1% phosphoric acid(10 ∶90)as the mobile phase，the detecting wavelength:273 nm，the column temperature:30 ℃ and the flow rate:1.0 mL/min.Results The linear relationship was good in the range of 3.25 － 16.27 μg/mL(r=1.000)，the average recovery rate was 100.17% ，RSD=0.94%(n=6).Conclusion This method is sensitive，simple and accurate with good repeatability and good linearity，and can be used as one of criteria for the quality control.

Huazhiling Tablets;gallic acid;HPLC;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2013)08－0056－02

2012－05－21;

2012－10－16)