秦 璐， 孫 悅， 朱勁華， 劉美輝

龍葵(Solanum nigrumLinn)又名天茄子、苦葵、水茄、天泡草、老鴉酸漿草、天泡果、山海椒等[1]。是廣東民間常用的道地藥材，主要藥理作用為抗腫瘤，在《廣東中藥志》、《嶺南中草藥撮要》及《廣東地產(chǎn)藥材研究》等多部廣東地方性本草著作中均有記載[2]。龍葵全草均能入藥，以干燥、色綠、肥嫩者為佳，性寒，味苦、微甘，有小毒，歸肺、胃、膀胱經(jīng)，具清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、止咳祛痰之功[2]。近年來(lái)，龍葵的抗腫瘤作用得到了海內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，對(duì)其抗癌有效成分進(jìn)行了大量的化學(xué)及藥理研究[3-4]，臨床上也廣泛運(yùn)用龍葵及其復(fù)方制劑治療各類腫瘤[5-6]。本文對(duì)其抗腫瘤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制的研究近況進(jìn)行綜述，以為相關(guān)的研究提供參考。

1 生物堿與抗腫瘤作用

中藥龍葵中富含生物堿類成分，主要有茄堿(solanine)，澳洲茄堿(solaonine)，澳洲茄邊堿(solamargine)，β-澳洲茄邊堿(β-solamargine)等。澳洲茄堿與澳洲茄邊堿水解后的苷元為澳洲茄胺(solasodine)。生物堿在龍葵嫩葉中含量較高，且隨葉的長(zhǎng)大逐漸減少；生物堿在未成熟的果實(shí)含量可達(dá)4.2%，研究表明在未成熟果實(shí)中含量最高，在果實(shí)成熟后則減少甚至消失[7]。

龍葵抗中的生物堿抗腫瘤作用已被普遍證實(shí)，賈艷菊等[8]用MTT法觀察龍葵生物堿的體外抗腫瘤作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)100～800 μg/mL的龍葵生物堿對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)均呈現(xiàn)出一定的抑制作用。李明慧等[9]觀察龍葵甾體類生物堿對(duì)荷瘤(S180)小鼠及對(duì)Lewis肺癌移植瘤小鼠的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)龍葵甾體類生物堿不僅具有抑制腫瘤增長(zhǎng)的作用，還可顯著提高荷瘤小鼠血清TNF-a、IL-2、IL-6、IL8的水平。目前，關(guān)于龍葵生物堿抗腫瘤機(jī)制研究不多，具體為以下幾種機(jī)制：(1)細(xì)胞周期阻滯：李志雄等[10]研究龍葵堿對(duì)前列腺癌LNCaP及Du145細(xì)胞系的抑制作用機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，龍葵堿可以通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)兩種細(xì)胞凋亡的發(fā)生，能將腫瘤細(xì)胞周期阻滯在S期，由此產(chǎn)生抑制增殖作用。也有研究認(rèn)為龍葵堿通過(guò)改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞核糖核酸的合成來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)[11]。(2)提高免疫：季宇彬等[12]研究龍葵生物堿對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，龍葵生物堿可提高紅細(xì)胞的膜流動(dòng)性，同時(shí)增強(qiáng)紅細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫粘附作用，從而抑制了腫瘤生長(zhǎng)。(3)抑制癌基因(蛋白)：高世勇等[13]研究發(fā)現(xiàn)，龍葵堿是HepG2細(xì)胞NAT1酶(癌基因誘導(dǎo))的非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，龍葵堿可通過(guò)作用于NAT1與PABA結(jié)合位點(diǎn)以外的其他位點(diǎn)抑制NAT1酶的活性而誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡。還有研究發(fā)現(xiàn)含有龍葵生物堿的復(fù)方中藥煎劑對(duì)小鼠肝癌(H22)、腹水型癌細(xì)胞增殖的抑制作用是通過(guò)抑制癌細(xì)胞表面的磷酸二酯酶和Na+-K+ATP酶活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的[14]。

2 多糖及多糖蛋白與抗腫瘤作用

龍葵多糖為水溶性有效成分，其由鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖等組成。多糖的提取可先將龍葵全草經(jīng)氯仿-甲醇(2∶1)脫脂、脫色后80%乙醇脫小分子糖；再以水提取，減壓蒸餾濃縮，乙醇沉淀，有機(jī)溶劑脫水；最后真空干燥得龍葵粗多糖。糖蛋白是以共價(jià)鍵與糖相連接的蛋白質(zhì)，糖肽鏈的連接方式有4類：(1)β-構(gòu)型的N-乙酰氨基葡萄糖和天冬氨酰胺的酞胺基形成的糖苷鍵，稱為N-糖苷鍵。(2)某一種單糖和含氫基的氨基酸，主要是蘇氨酸和絲氨酸等形成的糖苷鍵，稱為O-糖苷鍵。(3)以半胱氨酸為連接點(diǎn)的糖肽鍵，稱為S-糖苷鍵型。(4)是以谷氨酸、天冬氨酸的游離羧基為連接點(diǎn)的糖肽鍵，稱為酯糖苷鍵型。龍葵的糖蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜，幾乎涉及以上的所有的連接方式。糖蛋白的提取方法多采用DAEA-52-離子交換纖維素樹(shù)脂來(lái)提取，再利用凝膠色譜進(jìn)行純化[15]。此外，也有報(bào)道可采用先質(zhì)膜制備，然后用Triton X-114相分離有機(jī)溶劑萃取或CHAPS等去污劑釋放等方法來(lái)提取[16]。

目前已有較多文獻(xiàn)證實(shí)，龍葵多糖及多糖蛋白具有良好的抗腫瘤作用。李健等[17]研究龍葵多糖對(duì)小鼠荷宮頸癌(U14)生長(zhǎng)的抑制及對(duì)荷瘤小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)龍葵多糖具有抑制腹水型腫瘤U14生長(zhǎng)、延長(zhǎng)荷瘤小鼠存活時(shí)間的作用，推測(cè)該多糖可能是通過(guò)激活機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活動(dòng),進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌而發(fā)揮其抗腫瘤作用。常樂(lè)等[18]研究龍葵多糖(solanum nigrum polysaccharide,SNPS)粗提物對(duì)人胃癌MGC-803細(xì)胞株的作用及其對(duì)其細(xì)胞周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SNPS能顯著抑制MGC-803細(xì)胞的增殖，阻止胃癌細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期、阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程。高世勇等[19]考察了龍葵多糖對(duì)S180及H22荷瘤小鼠紅細(xì)胞補(bǔ)體受體1(CR1)數(shù)量及活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其能提高荷瘤小鼠紅細(xì)胞膜上唾液酸含量，以提高CR1的活性和數(shù)量，進(jìn)而改善荷瘤小鼠紅細(xì)胞的免疫粘附能力，發(fā)揮抗腫瘤的作用。Ooi等[20]報(bào)道，當(dāng)對(duì)荷瘤小鼠灌胃龍葵多糖8 d后，其血清中IFN-γ含量顯著增加，而IL-4含量顯著降低，這使得荷瘤小鼠體內(nèi)Th1/Th2向Th1亞群方向轉(zhuǎn)移，激活免疫細(xì)胞產(chǎn)生快速免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗腫瘤作用。MTT試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明，龍葵多糖劑量為1 mg/mL時(shí)并無(wú)體外抗腫瘤作用。由此可知，龍葵多糖對(duì)腫瘤的抑制作用可能是通過(guò)機(jī)體中免疫因子的激活而實(shí)現(xiàn)的。有研究表明，龍葵糖蛋白抗腫瘤可能是通過(guò)阻斷NF-κB通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。NF-κB通路的異常激活可導(dǎo)致一系列與腫瘤相關(guān)基因的異常表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。有研究采用電泳遷移實(shí)驗(yàn)和Western印跡實(shí)驗(yàn)觀察到龍葵糖蛋白能夠明顯抑制促癌劑佛波酯(IPA)刺激后腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶活性、NF-κB因子活性、Bax的表達(dá)。通過(guò)進(jìn)一步的深入研究發(fā)現(xiàn)龍葵糖蛋白主要通過(guò)抑制NF-κB因子的蛋白活性、阻斷蛋白激酶的跨膜易位，而使NF-κB因子與活化劑蛋白-1的DNA結(jié)合后活性降低，由此阻斷了NF-κB抗腫瘤細(xì)胞凋亡通路[21-22]。還有研究表明龍葵在抑制抗凋亡通路的同時(shí)，還能通過(guò)激活細(xì)胞凋亡終末剪切蛋白酶Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Lee等[23]研究發(fā)現(xiàn)，在HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞株中加入龍葵糖蛋白培養(yǎng)后，其中線粒體細(xì)胞色素C、Caspase-3和Caspase-9的酶原片斷及多聚聚合酶PARP蛋白增多，而細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)的數(shù)量沒(méi)有明顯的改變，因此認(rèn)為Caspase活化級(jí)聯(lián)與ROS無(wú)關(guān)。

3 皂苷類成分及其抗腫瘤作用

龍葵中富含甾體皂苷類成分，周新蘭等[24]將龍葵全草60%乙醇提取物經(jīng)D-101大孔樹(shù)脂柱吸附，獲得的60%乙醇洗脫部分再經(jīng)分離得到8個(gè)化合物。利用波譜分析確定這些化合物結(jié)構(gòu)分別為uttroside B(Ⅰ)、uttroside A(Ⅱ)、22α，25R-26-O-β-D吡哺葡萄糖基-22-羥基-呋甾-△^2-3β．26-二醇-3-D-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)O-[β-D-吡哺木糖基-(1→3)-O-β-D-吡哺葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅲ)、22α．25R-26O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-呋甾-△^3-3β等。

目前，有關(guān)龍葵皂苷抗腫瘤活性的報(bào)道并不多見(jiàn)，羅文娟[25]等研究發(fā)現(xiàn)從龍葵中分離的3種螺甾皂苷類化合物(分別為solamargine，degalactotigonin，solasonine)對(duì)人肝癌高侵襲轉(zhuǎn)移的細(xì)胞株FHCC298具有一定的細(xì)胞增殖抑制作用。王勝惠等[26]對(duì)荷瘤H22(肝癌腹水型)及S180荷瘤小鼠模型皮下注射龍葵皂苷醇提取物，結(jié)果提示龍葵皂苷醇提取物能明顯延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存時(shí)間，并具一定的抑瘤效果。

4 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)的大量研究表明，龍葵中多種生物活性成分具有很好的抗腫瘤作用，這些成分可通過(guò)多個(gè)環(huán)節(jié)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，阻止細(xì)胞的惡性增殖，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。但是，筆者認(rèn)為，龍葵的化學(xué)及藥理研究還應(yīng)向以下幾個(gè)方面努力：(1)目前有關(guān)龍葵抗腫瘤藥理作用的研究?jī)H限于某一單體或某一活性部位，有關(guān)整體藥效研究以及各活性成分間協(xié)同作用，抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制尚不完全清楚，有待進(jìn)一步深入的研究。(2)龍葵的提取、分離手段還需進(jìn)一步提升，當(dāng)前龍葵活性成分的提取、純化多限于小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室研究，如何進(jìn)一步擴(kuò)大提取規(guī)模，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，是龍葵走向臨床的必經(jīng)之路。(3)還需進(jìn)一步探究龍葵中活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)母核，為臨床上抗腫瘤新藥的研發(fā)提供新思路。

[1] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草[M]. 上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:7.

[2] 梅全喜. 廣東地產(chǎn)藥材研究[M]. 廣東:廣東科技出版社, 2011:247-249.

[3] Li J, Li QW, Feng T, et al. Aqueous extract of Solanum nigrum inhibit growth of cervical carcinoma (U14) via modulating immune respronse of tumor bearing mice and inducing apoptosis of tumor cells[J]. Fitoterapia, 2008, 2(7): 548-556.

[4] 丁霞, 高思國(guó), 李冠業(yè). 龍葵不同提取部位體外抗腫瘤作用的研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2011, 22(5):1244-1246.

[5] 黃東彬, 管靜. 龍葵合劑聯(lián)合化療對(duì)47例中晚期大腸癌患者生活質(zhì)量和免疫功能的影響[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2012, 8(10):37-38.

[6] 李去病, 李勛, 李森, 等. 瘤化平丸治療肺癌120例療效觀察[J]. 陜西中醫(yī), 2013, 34(2):181-183.

[7] Li J, Li QW, Gao DW, et al. Antitumor effects of total alkaloids isolated from Solanum nigrum in vitro and in vivo[J]. Pharmazie, 2008, 63(7):534-538.

[8] 賈艷菊, 代玲, 張燦. 龍葵生物堿誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡研究[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(8):51-54.

[9] 李明慧, 孫世清, 曹亮, 等. 龍葵甾體類生物堿對(duì)S180及Lewis肺癌移植瘤小鼠的影響[J].中國(guó)天然藥物, 2008, 6(3):223-226.

[10] 李志雄, 梁蔚波, 唐暉, 等. 龍葵堿對(duì)前列腺癌LNCaP及Du145細(xì)胞系的作用及機(jī)制[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 2013, 34(8):1153-1156.

[11] 季宇彬, 王宏亮, 高世勇. 龍葵堿對(duì)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞DNA和RNA的影響[J]. 中草藥, 2005, 36(8):1200-1202.

[12] 季宇彬, 萬(wàn)梅緒, 高世勇, 等. 龍葵堿對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響[J]. 中草藥, 2007, 38(3):412-414.

[13] 高世勇, 蘇怡君, 季宇彬.龍葵堿對(duì)HepG2細(xì)胞NAT1酶活性及動(dòng)力學(xué)影響的研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2011, 46(8):589-594.

[14] 安磊, 唐勁天, 劉新民, 等. 龍葵抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2006, 31(15):1225-1226.

[15] Li J, Li Q, Feng T, et al. Antitumor activity of crude polysaccharides isolated from Solanum nigrum Linne on U14 cervical carcinoma bearing mice[J]. Phytother Res, 2007, 21(9):832-840.

[16] Huang HC, Syu KY, Lin JK. Chemical composition of Solanum nigrum linn extract and induction of autophagy by leaf water extract and its major flavonoids in AU565 breast cancer cells[J]. J Agric Food Chem, 2010, 58(15):8699-86708.

[17] 李健, 韓增勝, 李青旺. 龍葵多糖抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 36(33):14589-14590,14632.

[18] 常樂(lè), 劉藝. 龍葵多糖對(duì)人胃癌MGC-803細(xì)胞增殖的影響[J]. 牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 33(4):24-26.

[19] 高世勇, 許龍波, 季宇彬. 龍葵多糖對(duì)紅細(xì)胞CR1數(shù)量及S180 A和H22荷瘤小鼠機(jī)體紅細(xì)胞免疫力的影響[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2011, 46(18):1405-1411.

[20] Ooi VE, Liu F. Immunomodulation and anti-cancer activity of polysaccharide-protein complexes[J]. Curr Med Chem, 2000, 7(7):715-729.

[21] Heo KS, Lim KT. Glycoprotein isolated from Solanum nigrum L. modulates the apoptotic-related signals in 12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate-stimulated MCF-7 cells[J]. J Med Food, 2005, 8(l):69-77.

[22] Lim KT. Glycoprotein isolated from Solanum nigrum L. kills HT-29 cells through apoptosis[J]. Med Food, 2005, 8(2):215-226.

[23] Lee SJ, Ko JH, Lim KT. Glycine- and proline-rich glycoprotein isolated from Solanum nigrum Linne activates caspase-3 through cytochrome c in HT-29 cells[J]. Oncol Rep, 2005, 14(3):789-796.

[24] 周新蘭, 何祥久, 周光雄, 等. 龍葵全草皂苷類化學(xué)成分研究[J]. 中草藥, 2006, 37(11):1618-1621.

[25] 羅文娟, 王光輝, 周新蘭, 等. 螺甾皂苷類化合物的體外抗人肝癌細(xì)胞增殖作用[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2007, 15(3):307-308.

[26] 王勝惠, 從云峰, 梁明, 等. 龍葵90%醇提取物對(duì)荷瘤肝癌小鼠生存時(shí)間及肉瘤瘤重影響[J]. 黑龍江醫(yī)學(xué), 2005, 6(29):421-424.