程潭杰

[摘要] 目的 通過對(duì)人垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1與存活劑在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)的檢測，探討二者與結(jié)腸癌生物學(xué)行為之間的關(guān)系及其機(jī)制。 方法 回顧性分析了2007年12月～2011年12月筆者所在醫(yī)院診斷為結(jié)腸癌的80例患者的臨床資料，采用免疫組織化學(xué)法SP法對(duì)本組患者結(jié)腸癌組織標(biāo)本中的hPTTG1和survivin蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測。 結(jié)果 survivin在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率為82.5%（66/80），但是在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為5.0%（1/20），差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。hPTTG1在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率為41.3%（33/80），但在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為85.0%（17/20）。結(jié)腸癌組織中，hPTTG1與survivin的表達(dá)不存在顯著的相關(guān)性（R=0.092， P>0.05）。結(jié)論 survivin與hPTTG1在結(jié)腸癌組織中具有異常表達(dá)的現(xiàn)象，提示了二者在結(jié)腸癌的發(fā)生以及發(fā)展過程中所起的重要作用，可作為結(jié)腸癌發(fā)生及發(fā)展的一個(gè)“指示物”。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)腸癌；Survivin；hPTTG1；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R735.35???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B???[文章編號(hào)] 2095-0616（2012）21-42-03

Research on the expression of hPTTG1 and survivin in colon cancer tissue

CHENG?Tanjie

Surgical Department， Fujian?Armed?Police?Frontier?Corps?Hospital， Quanzhou 362000， China

[Abstract] Objective To detect the expression of human pituitary tumor transforming gene-1 and surviving expression in colon cancer tissue， and study the relationship with colon cancer. Methods 80 cases of patients diagnosed with colon cancer were retrospectively given analysis from December 2007 to December 2011， who stayed in the author's hospital， and used immunohistochemical staining to detect the expression of hPTTG1 and survivin of this group of colon cancer tissue specimens. And then it was analyzed that the relationship between hPTTG1 and survivin expression and colon cancer clinicopathological factors and prognosis. Results Survivin in colon cancer tissue positive expression rate was 82.5% （66/80）， but the positive expression in normal colonic mucosa tissue was 5.0% （1/20）， both existed statistically significant learning differences （P<0.01）； the expression of survivin in colon cancer between gender， age， tumor location， tumor size， type， intestinal wall depth of invasion， histological grade， distant metastasis， Dukes' staging， etc. had no statistical difference （P>0.05）. hPTTG1 in colon carcinoma， the positive expression rate was 41.3% （33/80）， but it is the positive expression in normal colonic mucosa tissue was 85.0% （17/20）， indicating that hPTTG1 in normal colon mucosal tissues， the positive expression rate was significantly higher than the rate of expression in colon cancer tissue， and had a statistically significant difference （P<0.01）； the hPTTG1 expression and colon cancer tissue differentiation， Dukes stage and intestinal such as depth of invasion （P<0.05）. Colon cancer tissue， hPTTG1 and survivin expression did not exist a significant correlation （R= 0.092， P>0.05）. Conclusion Survivin in colon cancer tissue and hPTTG1 with abnormal expression of the phenomenon， which suggests the two played an important role in colon carcinogenesis and the development process. Therefore， both as colon cancer occurrence and development of an indicator.

[Key words] Colon cancer； Survivin； hPTTG1； Immunohistochemistry

結(jié)腸癌是最為常見的一種消化癌瘤，由于其發(fā)病率較高、死亡率大，對(duì)人體的健康具有較大的影響。最近研究表明，若要對(duì)結(jié)腸癌進(jìn)行準(zhǔn)確地診斷，那么就需要對(duì)人垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1（human pituitary tumor transforming gene-1，hPTTG1）與存活劑（survivin）在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確地定位與檢測。本研究主要回顧性分析了2007年12月～2011年12月筆者所在醫(yī)院診斷為結(jié)腸癌的80例患者的臨床資料，采用免疫組織化學(xué)法對(duì)hPTTG1與survivin進(jìn)行檢測、相關(guān)性分析等，現(xiàn)將具體的研究過程及結(jié)果報(bào)道如下。

1?資料與方法

1.1?一般資料

回顧性分析了2007年12月～2011年12月入住筆者所在醫(yī)院、經(jīng)病理診斷確診為結(jié)腸癌的80例患者的臨床資料，其中男47例，女33例；年齡為26～88歲，平均（69.7±6.5）歲；本組患者均有完整的3年隨訪資料，在實(shí)施手術(shù)前均沒有接受過任何的諸如放療、化療以及生物等方面的治療。對(duì)于臨床分期，主要參照美國AJCC中關(guān)于TNM分期標(biāo)準(zhǔn)來加以執(zhí)行，即A期為12例，B期為22例，C期為26例，D期為20例。上述四組分期的送檢淋巴結(jié)：A期為（19.23±8.71）枚，B期為（17.38±7.23）枚，C期為（11.22±5.42）枚，D期為（12.35±7.61）枚。參照世界衛(wèi)生組織（WHO）對(duì)分化程度加以執(zhí)行，即高～中度分化腺癌為61例，低～未分化腺癌患者數(shù)為19例。

1.2?方法

主要采用的方法為二步法對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)，儀器為SuperPic TureTM Polymer。首先運(yùn)用石蠟包埋組織切片，脫蠟，采用微動(dòng)對(duì)抗原對(duì)其加以修復(fù)，通過內(nèi)源性過氧化酶對(duì)劑孵育加以阻隔，用濃度為10%的正常血清對(duì)特異性加以封閉，約為10 min。實(shí)驗(yàn)組依次加入一抗（多抗survivin，以及單抗hPTTG1），對(duì)照組主要用PBS來代替一抗，將已知的胰腺癌切片作為survivin進(jìn)行陽性對(duì)照組，已知呈現(xiàn)陽性的腎盂腎炎切片可以作為hPTTG1的陽性對(duì)照片。最后，分別對(duì)hPTTG1與survivin的含量進(jìn)行檢測[3]。

1.3?結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)于檢測結(jié)果的判定，具有十分重要的意義，應(yīng)該給予高度地重視。檢測結(jié)果的判定首先由2位病理學(xué)醫(yī)師在獨(dú)立完成的情況之下對(duì)某些免疫組化結(jié)果進(jìn)行較為快速以及準(zhǔn)確的判斷，然后進(jìn)行思考，并在這個(gè)過程中對(duì)結(jié)果獲得共識(shí)。對(duì)于hPTTG1與survivin而言，前者多位于細(xì)胞核內(nèi)、但是在胞漿內(nèi)同樣也有一定的表達(dá)，后者多位于細(xì)胞漿之內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，其蛋白陽性反應(yīng)為淡黃到棕黃色顆粒。具體需要參照的判斷結(jié)果：在光學(xué)顯微鏡之下進(jìn)行觀察，細(xì)胞核以及細(xì)胞漿之中若出現(xiàn)淡黃色直到棕黃色的顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。對(duì)于記分主要包括上述及著色強(qiáng)度。上述兩種記分之間相乘即可以歸為陽性強(qiáng)度：0分為陰性（-），4分為弱陽性（+）、5～8分為中度陽性（++），9～12分強(qiáng)陽性（+++）[4]。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究中所出現(xiàn)的一切數(shù)據(jù)均由Excel及SPSS13.0兩個(gè)軟件加以統(tǒng)計(jì)、處理以及分析，所出現(xiàn)的數(shù)據(jù)均以（）的形式表示，采用卡方檢驗(yàn)的方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)，組間差異以P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?survivin在結(jié)腸癌以及正常結(jié)腸組織中的表達(dá)意義

survivin在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率為82.5%（66/80），但是在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為5.0%（1/20），差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

2.2?hPTTG1在結(jié)腸癌與正常結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)

hPTTG1在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率為41.3%（33/80），但是它在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為85.0%（17/20），這說明hPTTG1在正常結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率要明顯地高于結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

2.3?hPTTG1和survivin表達(dá)的相關(guān)性

hPTTG1的表達(dá)與結(jié)腸癌組織分化程度、Dukes分期以及腸壁的浸潤深度等有關(guān)。見表3。

2.4?結(jié)腸腺癌患者h(yuǎn)PTTG1和survivin表達(dá)的Kaplan-Meier生存分析

對(duì)結(jié)腸癌患者h(yuǎn)PTTG1（圖1A）和survivin（圖1B）表達(dá)的Kaplan-Meier 生存進(jìn)行分析。見圖1。

3?討論

有關(guān)研究顯示，survivin是目前作用強(qiáng)度最大的一種凋亡抑制性基因，在很多種腫瘤，尤其是惡性腫瘤，如肺癌、膀胱癌以及乳腺癌等中均能夠檢測到它的表達(dá)。而且，對(duì)具體的表達(dá)進(jìn)行有效地檢測，能夠及早地發(fā)現(xiàn)癌變情況，并及時(shí)地采取強(qiáng)有效的措施加以治療。因此，臨床上對(duì)存活劑進(jìn)行檢測，意義十分重大。存活劑具體的作用機(jī)制為：首先通過對(duì)凋亡信號(hào)進(jìn)行抑制，來對(duì)半胱天冬酶-3以及半胱天冬酶-7對(duì)處于細(xì)胞分裂周期-2與細(xì)胞分裂間期的細(xì)胞進(jìn)行抑制。survivin的表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)比較獨(dú)特，能夠確保特定的細(xì)胞抵抗一系列刺激原加以誘發(fā)，從而對(duì)細(xì)胞的凋亡起到一定的抑制性作用，從而能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的分裂增殖與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移起到一定的促進(jìn)作用[5]。相關(guān)研究表明[6-7]，在實(shí)際的非小細(xì)胞肺癌的研究過程之中發(fā)現(xiàn)survivin也可以與半胱天冬酶-3（Capase-3）同時(shí)表達(dá)陽性，提示出survivin還可以通過非Capase的具體途徑來完成抗凋亡的作用。hPTTG1與細(xì)胞的分化、增殖、凋亡密切相關(guān)，是細(xì)胞有絲分裂紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)信號(hào)通路的核心蛋白。它可能通過以下多種機(jī)制參與腫瘤的形成和發(fā)展：誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化；促進(jìn)其他原癌基因及促瘤因子的表達(dá)；干擾姐妹染色單體分離。

本研究結(jié)果顯示，survivin在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率為82.5%，明顯高于survivin在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為5.0%，且差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；結(jié)腸癌中survivin的表達(dá)在性別、年齡、腫瘤所在部位、腫瘤大小、分型、腸壁浸潤深度、組織分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes'分期等之間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；hPTTG1在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率為41.3%（33/80），但在正常的結(jié)腸黏膜組織中的陽性表達(dá)率為85.0%（17/20），二者比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；hPTTG1的表達(dá)與結(jié)腸癌組織分化程度、Dukes'分期以及腸壁的浸潤深度等有關(guān)（P<0.05）；結(jié)腸癌組織中，hPTTG1與survivin的表達(dá)不存在顯著的相關(guān)性（R=0.092，P>0.05）。綜上所述可以得知，survivin與hPTTG1在結(jié)腸癌組織中具有異常表達(dá)的現(xiàn)象，這就提示了二者在結(jié)腸癌的發(fā)生以及發(fā)展過程中所起的重要作用。因此，可以將二者作為結(jié)腸癌發(fā)生及發(fā)展的一個(gè)“指示物”。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 毛銀玲，徐剛，孟凡玲，等.P-STAT5 和Survivin 在結(jié)腸腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國腫瘤臨床，2011，38（12）：716-717.

[2] 殷江霞，孫紅芹，唐搖磊，等.直腸癌組織中hPTTG1和survivin的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011，19（5）：951-953.

[3] 王學(xué)虎，傅仲學(xué)，趙渝，等.Survivin基因的shRNA干擾對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中國腫瘤臨床，2010，37（9）：485-489.

[4] 錢敏飛，王家東.腫瘤凋亡抑制蛋白-Survivin 的研究進(jìn)展[J].中國腫瘤臨床，2004，31（11）：657-659.

[5] Jass JR，Sobin LH，Watanabe H.The World Health Organization's histologic classification of gastrointestinal tumors.A commentary on the second edition[J].Cancer，1990，66（10）：2162-2167.

[6] Lee YY，Yu CP，Lin CK，et al.Expression of survivin and cortactin in colorectal adenocarcinoma： association with clinicopathologicalparameters[J].Dis Markers，2009，26（1）：9-18.

[7] Kato H，Inoue T，Asanoma K，et al.Activation of STAT3/5 signal pathways in complete mole and repression in choriocarcinoma cell lines[J].J Reprod Med，2006，51（1）：41-48.

（收稿日期：2012-09-05）