車環(huán)宇，劉 暢，閆麗莉

(1.通化師范學(xué)院 制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002; 2.通化市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 通化 134002；3.通化東寶五藥有限公司)

消糖靈丸是部頒標(biāo)準(zhǔn)消糖靈膠囊劑的更改品種，其處方中含有化學(xué)成分格列本脲和中藥成分芍藥苷，是一種中西復(fù)方藥物，具有益氣養(yǎng)陰、清熱瀉火、益腎縮尿的功效．格列本脲又稱優(yōu)降糖，為本處方中的西藥成分．為N-[2-[4-[[[(環(huán)己氨基)羰基]氨基]磺?；鵠苯基]乙基]-2-甲氧基-5-氯苯甲酰胺，具有降血糖的功效．白芍在本處方中為主要成分之一．白芍為毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根．主要化學(xué)成分為芍藥苷及少量的芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷等．具有活血散瘀，清熱涼血等功效．兩者與本品的功能主治密切相關(guān)，均可采用高效液相色譜法進(jìn)行含量的測定，以便控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量．

1 儀器及試藥

美國SeriesⅢ型高效液相色譜儀，格列本脲對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：10135-0103，規(guī)格：供含量測定用)．芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200321，規(guī)格：供含量測定用)甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純．

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

(1)格列本脲色譜條件.色譜柱：Hypersil GoLD Dim(mm)250×4.6色譜柱，甲醇-磷酸二氫銨溶液(磷酸二氫銨1.725g，溶于300ml水，磷酸調(diào)pH3.5±0.05)(65∶35)為流動(dòng)相，流速為0.8mL·min-1室溫，檢測波長為230nm；理論板數(shù)按格列本脲計(jì)算應(yīng)不低于2000．

(2)芍藥苷色譜條件．色譜柱：依利特C18(4.6×200mm,5μm)；乙腈-0.2%磷酸(15∶85)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；室溫；檢測波長:230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500．

2.2 對照品及供試品溶液的制備

(1)格列本脲對照品及供試品溶液的制備．對照品溶液的制備：精密稱取格列本脲對照品適量，加甲醇制成每1ml含32μg的溶液，即得．供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，精密稱取1g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得．

(2)芍藥苷對照品及供試品溶液的制備．對照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含35μg的溶液，即得．供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，精密稱取1g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，在水浴中回流提取1h后，取出，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，作為供試品溶液．

2.3 方法學(xué)考察

(1)格列本脲方法學(xué)考察．①按對照品溶液制備方法，精密吸取對照品溶液2、6、10、14、18μl測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)，并計(jì)算回歸方程：Y=7676.7+2855648.4X(r=0.99996)，結(jié)果表明格列本脲0.064～0.576μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測定的要求．②精密度試驗(yàn)．精密吸取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測定其色譜峰面積值，算得RSD值為0.7%．結(jié)果表明，所用的儀器具良好的精密性．③穩(wěn)定性試驗(yàn)．取供試品溶液,依正文方法測定，算得RSD值0.3%．結(jié)果表明12h內(nèi)供試品溶液中格列本脲的含量基本穩(wěn)定．④重復(fù)性試驗(yàn)．取同一供試品，依正文方法獨(dú)立測定五次，算得RSD值為0.19%．結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性．⑤回收率試驗(yàn)．精密稱取已知含量的供試品5份，分別精密加入對照品溶液5ml，依法測定，計(jì)算回收率(見表1)．

圖1 格列本脲標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表1，測得格列本脲平均回收率為97.1%，RSD=0.5%.結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高．

(2)芍藥苷方法學(xué)考察．①按對照品溶液制備方法，精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20μl測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2)，并計(jì)算回歸方程：Y=8466.51+2668043.3X(r=0.99995)，結(jié)果表明芍藥苷0.0356～0.712μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測定的要求．②精密度試驗(yàn)．精密吸取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測定其色譜峰面積值，算得RSD值為0.4%．結(jié)果表明，所用的儀器具良好的精密性．③穩(wěn)定性試驗(yàn)．取供試品溶液,依正文方法測定，算得RSD值0.4%．結(jié)果表明12h內(nèi)供試品溶液芍藥甘的含量基本穩(wěn)定．④重復(fù)性試驗(yàn)．取同一供試品，依正文方法獨(dú)立測定五次，算得RSD值為0.47%．結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性．⑤回收率試驗(yàn)．精密稱取已知含量的供試品0.5g5份，分別精密加入對照品溶液20ml，依法測定，計(jì)算回收率(見表2)．

圖2 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表2，測得芍藥苷平均回收率為97.3%，RSD=0.6%.結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高．

2.4 結(jié)果

(1)格列本脲測定結(jié)果.依正文方法測定十批樣品，格列本脲的含量均值為0.8(mg/g)．

結(jié)果表明高效液相色譜法測定格列本脲含量，該方法專屬性強(qiáng)，方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好．

(2)芍藥苷測定結(jié)果．依正文方法測定十批樣品，芍藥甘的含量均值為1.8(mg/g).

結(jié)果表明高效液相色譜法測定芍藥苷含量，該方法專屬性強(qiáng)，方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好．

3 討論

格列本脲在三氯甲烷中略溶，在甲醇或乙醇中微溶，在水或乙醚中不溶．針對格列本脲溶解性較差的特點(diǎn)，我們呈做了大量的試驗(yàn)，結(jié)果以甲醇為溶媒效果較好．十批樣品中格列本脲的平均含量為0.8mg/g，考慮到在生產(chǎn)中受工藝波動(dòng)的影響，我們將含量限度初步規(guī)定為每1g含格列本脲(C23H28ClN3O5S)為0.72～0.9mg．

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2012.

[2]江濤濤.復(fù)方降脂滴丸的研制[D].鎮(zhèn)江:江蘇大學(xué),2006.