李 璐 李 琛 吳民華

（廣東醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，湛江524023；1廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，湛江524001）

研究表明，多種腫瘤中存在環(huán)氧化酶－2（Cyclooxy genase－2，COX－2）與磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tension homology detected onchromosome ten，PTEN）的表達(dá)異常，其表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。本研究旨在分析COX－2和PTEN在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況，探討兩基因表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系，為結(jié)腸癌早期診斷、治療以及預(yù)后評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料和方法

1.一般資料

收集2010年1月至2012年4月在我校附屬醫(yī)院因結(jié)腸癌而行根治手術(shù)切除的組織標(biāo)本56例，術(shù)后均在本院病理科診斷為結(jié)腸腺癌。病例包括男39例、女17例；年齡35－81歲，平均（59.2±6.4）歲；所有患者術(shù)前均未行放化療及免疫治療。結(jié)腸癌Duke分期：A期9例，B期17例，C期27例，D期3例；組織學(xué)分級(jí)：高分化17例，中分化27例，低分化12例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例。同期在該院內(nèi)鏡室行結(jié)腸鏡下活檢15例非腫瘤結(jié)腸黏膜組織作為對(duì)照。

2 免疫組化方法

COX－2兔抗人單抗、PTEN鼠抗人單抗、S－P染色試劑盒和DAB試劑盒均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)公司。采用免疫組織化學(xué)SP法，簡(jiǎn)述如下：4μm切片脫蠟水化，高壓鍋抗原修復(fù)3min，自然冷卻。切片加入3%過(guò)氧化酶阻斷劑10分鐘，PBS液洗。加入一抗室溫孵育30min，PBS液洗。加入二抗室溫孵育15min，PBS液洗。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。以PBS替代一抗做陰性對(duì)照。

3 染色結(jié)果判斷

COX－2棕黃色顆粒主要位于胞質(zhì)或核周，PTEN棕黃色顆粒位于胞質(zhì)或胞核。采用染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比半定量方法進(jìn)行評(píng)判。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞未著色為0分、染色部位呈淺黃色為1分、染色呈棕黃色為2分、染色呈棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞小于5%為0分、5%－25%為1分、26%－50%為2分、51%－75%為3分、大于75%為4分。結(jié)果判定：染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分的乘積5分以上者判為陽(yáng)性，4分及4分以下者判為陰性。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，兩基因表達(dá)與各病理因素的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn)，兩個(gè)基因之間表達(dá)關(guān)系采用spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.COX－2和PTEN在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)

COX－2定位于胞漿或核周，PTEN定位于胞漿或胞核，見(jiàn)圖1。COX－2、PTEN在結(jié)腸腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.14%（46／56）、51.79%（29／56），正常結(jié)腸黏膜組織中COX－2和PTEN陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.33%（2／15）、100.00%（15／15）。結(jié)腸腺癌中COX－2、PTEN表達(dá)率與正常結(jié)腸黏膜組織的表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.結(jié)腸癌組織中COX－2和PTEN表達(dá)的相關(guān)性

56例結(jié)腸癌組織中，COX－2和PTEN同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)者20例（35.7%），同時(shí)陰性表達(dá)者1例（1.8%），僅COX－2表達(dá)者26例（46.4%），僅 PTEN表達(dá)者9例（16.1%），COX－2和PTEN表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（r＝－0.357，P＝0.007）。

2.COX－2、PTEN表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征間的關(guān)系

COX－2及PTEN的表達(dá)與結(jié)腸腺癌Duke分期和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與性別、年齡和組織學(xué)分型無(wú)明顯相關(guān)。見(jiàn)表1。

圖1 A.COX－2在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)（SP法×200）； B.PTEN在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)（SP法×200）；Fig.1A：Positive expression of COX－2 in colon adenocarcinoma（SP method×200）Fig.1B：Positive expression of PTEN in colon adenocarcinoma（SP method×200）

討 論

惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段和多基因的多步驟變化過(guò)程。研究表明，COX－2和PTEN在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等各方面均起了重要作用［1－2］。

COX－2是花生四烯酸分解過(guò)程中的重要限速酶，細(xì)胞受到各種刺激因素時(shí)可迅速合成，涉及多種病理生理變化［3］。研究表明，COX－2參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展［4－5］。本研究結(jié)果顯示 COX－2在結(jié)腸腺癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)與患者性別、年齡和組織學(xué)分級(jí)無(wú)明顯相關(guān)，但在Duke分期C、D組及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中表達(dá)明顯增高，表明COX－2對(duì)結(jié)腸腺癌的局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［6－7］。

PTEN是一種具有雙特異性磷酸酯酶活性的抑癌基因，可使3，4，5－三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）去磷酸化，抑制PI3K／Akt通路，從而阻斷了Akt及其下游激酶的活性，抑制細(xì)胞增殖、遷徙和黏附，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［8］。本研究結(jié)果顯示PTEN在結(jié)腸腺癌組織中表達(dá)明顯低于正常結(jié)腸組織，PTEN蛋白表達(dá)與性別、年齡和組織學(xué)分型無(wú)明顯相關(guān)，而與Duke分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，表明PTEN的表達(dá)缺失與結(jié)腸腺癌的的發(fā)生發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)腸腺癌組織中PTEN與COX－2呈明顯負(fù)相關(guān)，有研究認(rèn)為PTEN可能通過(guò)調(diào)控Akt通路抑制了COX－2的表達(dá)，當(dāng)PTEN缺失時(shí)，Akt通路上調(diào)，COX－2的表達(dá)則明顯增高［9］。PTEN和COX－2可能協(xié)同參與了結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，PTEN表達(dá)缺失和COX－2的高表達(dá)預(yù)示腫瘤組織侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。

綜上所述，結(jié)腸癌組織中COX－2和PTEN異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)，兩者之間存在調(diào)控機(jī)制，兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)有助于結(jié)腸癌的早期診斷及預(yù)后判斷。

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