王庭欣，陳永剛，張曉瑜，夏立婭，李小亭

（1.河北大學(xué) 質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督學(xué)院，河北 保定 071000；2.黃驊市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河北 黃驊 061100）

冬棗中果糖、葡萄糖、蔗糖的高效液相色譜分析

王庭欣1，陳永剛2，張曉瑜1，夏立婭1，李小亭1

（1.河北大學(xué) 質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督學(xué)院，河北 保定 071000；2.黃驊市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河北 黃驊 061100）

為建立冬棗中果糖、葡萄糖、蔗糖的高效液相色譜分析方法，以C18柱為分離柱進(jìn)行色譜分析.色譜條件為：流動(dòng)相V（乙腈）∶V（水）＝80∶20，流速1.4mL／min，柱溫35℃.樣品加標(biāo)回收率為96%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.7%.本方法具有回收率高、靈敏度高、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于冬棗中果糖、葡萄糖、蔗糖的檢測(cè).

高效液相色譜；果糖；葡萄糖；蔗糖；冬棗

冬棗（ZizyphusjujubeMill.cv））別名凍棗、雁來(lái)紅、蘋(píng)果棗、冰糖棗等［1］，是我國(guó)著名的優(yōu)良鮮食棗品種，主要分布在河北、山東交界的渤海灣地區(qū).在其獨(dú)特的地理環(huán)境和人文環(huán)境的影響下，冬棗果肉細(xì)嫩多汁、口感甜脆、營(yíng)養(yǎng)豐富.黃驊冬棗和沾化冬棗在2002年均被國(guó)家質(zhì)檢總局批準(zhǔn)為冬棗原產(chǎn)地保護(hù)品種（后改為地理標(biāo)志產(chǎn)品）并先后制定了相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)［2-3］.近幾年來(lái)冬棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，但是同時(shí)出現(xiàn)了不同產(chǎn)地的冬棗果實(shí)品質(zhì)不一致，甚至品種混雜，將晚熟棗品種都稱為冬棗等現(xiàn)象.許多學(xué)者對(duì)冬棗品質(zhì)鑒別及保真技術(shù)進(jìn)行了探討分析［1，4］，這些報(bào)道大多集中在聚類分析或感官性狀上.本文就冬棗中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量進(jìn)行了高效液相色譜分析，旨在為冬棗保真方法提供科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

1.1 儀器

Waters600高效液相色譜儀，附Waters2424蒸發(fā)光散射檢測(cè)器.NEX UP 1000型超純水儀（韓國(guó)HUMAN公司生產(chǎn)）.色譜條件：C18柱，4.6mm×250mm，5μm；柱溫35℃；檢測(cè)器漂移管溫度85℃，噴霧器溫度34.8℃；流動(dòng)相V（乙腈）∶V（水）＝80∶20；流速1.4mL／min；進(jìn)樣量20μL.

1.2 樣品與試劑

黃驊冬棗，由河北黃驊質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提供；沾化冬棗，由山東沾化冬棗產(chǎn)業(yè)辦公室提供；乙腈，色譜純，由保定市博愛(ài)欣試劑公司提供；蔗糖、果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，Sigma公司提供.

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

冬棗去皮去核粉碎后，準(zhǔn)確稱取10g，加入30mL水，90℃水浴25min，冷至室溫后置于100mL容量瓶中定容.8 000r／min離心10min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定.

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取蔗糖、果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品各5g（精確至0.000 1g）分別置于50mL容量瓶?jī)?nèi)，制成質(zhì)量濃度為100mg／mL的工作母液.分別準(zhǔn)確吸取果糖、葡萄糖和蔗糖工作母液1mL于50mL容量瓶中定容，制備成果糖、葡萄糖和蔗糖質(zhì)量濃度均為2mg／mL的混標(biāo)溶液，用同樣的方法制備果糖、葡萄糖和蔗糖質(zhì)量濃度均為4，6，8，10mg／mL的混標(biāo)溶液.20μL進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析.

1.3.3 回收率及精密度的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取10g同一樣品2份，其中一份作本底，另一份添加果糖、葡萄糖、蔗糖進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每種糖3個(gè)水平，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品.每個(gè)水平進(jìn)樣6次，計(jì)算回收率.

使用糖質(zhì)量濃度為6mg／mL的混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算出果糖、葡萄糖、蔗糖的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差.

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

以5個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣作HPLC分析，色譜圖見(jiàn)圖1，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理.回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1.

圖1 果糖、葡萄糖和蔗糖的高效液相色譜Fig.1 HPLC chromatogra of fructose，glucose and sucrose

圖1所示，果糖、葡萄糖和蔗糖的保留時(shí)間分別為6.677，7.803，11.923min.

表1 果糖、葡萄糖、蔗糖的線性回歸方程Tab.1 Regression equation of fructose，glucose and sucrose

表1數(shù)據(jù)表明，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，3種糖對(duì)照品的峰面積與進(jìn)樣量均呈良好的線性關(guān)系.

2.2 精密度及回收率

經(jīng)精密度實(shí)驗(yàn)得出果糖、葡萄糖、蔗糖的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）依次為2.2%，1.8%和2.7%.樣品加標(biāo)色譜圖如圖2，3種糖的平均回收率為96%～102%，結(jié)果見(jiàn)表2.

圖2 樣品加標(biāo)色譜Fig.2 HPLC chromatogra of samples additive the standard

表2 回收率實(shí)驗(yàn)Tab.2 Recovery experiments of fructose，glucose and sucrose

2.3 樣品測(cè)定

將制備好的樣液20μL注入高效液相色譜，在前述測(cè)定條件下記錄果糖、葡萄糖、蔗糖的峰面積，依保留時(shí)間分別通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣液中的各組分質(zhì)量濃度，計(jì)算各組分含量，結(jié)果見(jiàn)表3.樣品色譜圖見(jiàn)圖3.

表3 冬棗中的果糖、葡萄糖和蔗糖組成標(biāo)量Tab.3 Determination of fructose，glucose and sucrose in Zizyphusjujube Mill.cv

對(duì)2個(gè)品種冬棗3種糖含量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，黃驊冬棗的果糖含量明顯高于沾化冬棗（P＜0.01）；而沾化冬棗的蔗糖含量高于黃驊冬棗；葡萄糖的含量二者無(wú)明顯差異.

圖3 樣品色譜Fig.3 HPLC chromatogra of samples

3 討論

3.1 色譜分離條件的選擇

因糖分子含有極性基團(tuán)，故選用極性較大的溶劑乙腈作流動(dòng)相.糖在乙腈中的溶解度較小，故采用乙腈和水的混合溶劑作流動(dòng)相.實(shí)驗(yàn)表明，乙腈與水體積比為80∶20時(shí)，分離效果好.實(shí)際分析時(shí)選擇流速為1.4mL／min.

3.2 樣品的檢測(cè)結(jié)果

采用了2個(gè)品種共45份冬棗樣品進(jìn)行了3種糖的高效液相色譜分析，測(cè)定結(jié)果表明，黃驊冬棗果糖含量明顯高于沾化冬棗，蔗糖含量則比沾化冬棗低，葡萄糖含量則無(wú)明顯差異.這可能是2種冬棗口味不同的主要原因.

黃驊冬棗和沾化冬棗均屬地理標(biāo)志產(chǎn)品，它們受地理因素和人文因素等多方面的影響，致使其品質(zhì)和口感有所不同.同時(shí)也給冬棗的鑒別帶來(lái)了一定的困難.本研究結(jié)果提示，2種冬棗各自具有自己的優(yōu)勢(shì)糖，能否以糖含量作為品種的鑒別指標(biāo)還有待于進(jìn)一步的探討.

［1］ 馬慶華，續(xù)九如，王貴禧，等.河北和山東冬棗果實(shí)品質(zhì)評(píng)價(jià)及AFLP分子標(biāo)記的研究［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2009，22（1）：48-54.

MA Qinghua，XU Jiuru，WANG Guixi，et al.Studies on the fruit quality and AFLPM arkers ofZiziphusjujubacv.Dongzao from Hebei and Shandong Provence［J］.Forest Research，2009，22（1）：48-54.

［2］ 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 18740—2008，地理標(biāo)志產(chǎn)品 黃驊冬棗［S］.

［3］ 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 18846—2008，地理標(biāo)志產(chǎn)品 沾化冬棗［S］.

［4］ 馬慶華，續(xù)九如，姚立新，等.不同產(chǎn)地冬棗果實(shí)品質(zhì)差異的研究［J］.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（2）：57-60.

MA Qinghua，XU Jiuru，YAO Lixin，et al.Studies on the quality difference of Dongzao jujube from different sources［J］.Journal of Agricultural University of Hebei，2007，30（2）：57-60.

Analysis of fructose，glucose and sucrose inZizyphusjujubeMill.cv by high performance liquid chromatographic

WANG Tingxin1，CHEN Yonggang2，ZHANG Xiaoyu1，XIA Liya1，LI Xiaoting1
（1.College of Quality and Technical Supervision，Hebei University，Baoding 071000，China；2.Food Quality Safety Supervision and Inspection Center，Huanghua Administration of Quality Technology Supervision，Huanghua 061100，China）

A high performance liquid chromatographic method was developed to determine of fructose，glucose and sucrose inZizyphusjujubeMill.cv.The method was adopted with acetonitrile and water（80∶20，V∶V）as the eluent.The flow rate was 1.4mL／min and column temperature 35℃.The recovery rate was in 96%—102%range and the relative standard deviation below 2.7%.This method is simple，accurate and suitable for the determination of fructose，glucose and sucrose inZizyphusjujubeMill.cv.

HPLC；fructose；glucose；sucrose；ZizyphusjujubeMill.cv.

O657.7

A

1000-1565（2012）05-0528-04

2011-11-20

質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目（200810345-2）

王庭欣（1965-），女，河北保定人，河北大學(xué)教授，主要從事食品安全與功能性食品研究.

E-mail：tingxinwang＠126.com

趙藏賞）