黃幀檜，楊 帆，張 培，丁伯平

(皖南醫(yī)學院藥理學教研室及中藥藥理國家三級實驗室，安徽蕪湖241002)

業(yè)已證明美托洛爾對腎性高血壓小鼠的心功能具有保護作用［1］。近年來又發(fā)現(xiàn)，阿伐他汀對高血壓大鼠左室重構(gòu)也具有逆轉(zhuǎn)作用［2］。而高血壓患者常合并糖尿病，對靶器官心臟損傷更大。本研究探討美托洛爾聯(lián)用阿伐他汀對腎性高血壓大鼠左室重構(gòu)以及對心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)水平的影響，為臨床上可能聯(lián)合使用這兩種藥物治療腎性高血壓伴糖尿病患者提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物模型制備及分組:清潔級雄性Sprague-Dawley大鼠50只，體質(zhì)量180～220 g［南京青龍山實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(浙)2008-0033］。觀察喂養(yǎng)1周后，隨機抽取8只為假手術(shù)組，其余42只大鼠行兩腎一夾手術(shù)(2K1C)造模。造模時，分離左腎動脈、放置內(nèi)徑為0.2mm的銀夾并打結(jié)固定。假手術(shù)組操作方法同上，但不放置銀夾。術(shù)后3 d連續(xù)給予青霉素4×105U肌注預(yù)防感染。術(shù)后4周收縮壓≥21.28 kPa者確定已形成穩(wěn)定高血壓，即為造模成功。將造模成功的34只大鼠隨機分成4組:模型組(n=8);美托洛爾組(5 mg/kg·d，n=9);阿伐他汀組(30 mg/kg·d，n=9);聯(lián)合用藥組(美托洛爾+阿伐他汀，n=8)。術(shù)后第5周開始給藥，每日上午9時將上述藥物連續(xù)灌胃6周。假手術(shù)組與模型組以等量0.9%氯化鈉注射液灌胃(0.1 mL/100 g)。

1.2 藥物和試劑:美托洛爾(阿斯利康制藥有限公司);阿伐他汀鈣(輝瑞公司);羥脯氨酸試劑盒(南京建成生物工程公司);MMP-2與TIMP-1 ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)測定:沿室間隔剔除心房和右心室，保留完整左心室及室間隔，以精密電子天平準確測量左心室及室間隔濕重，作為左心室質(zhì)量(LVM)，計算出左室重量指數(shù)LVMI(mg/g)。

1.4 心肌羥脯氨酸含量測量:將100 mg心肌組織制成勻漿，消化、水解，取上清液，使用分光光度計在550 nm處測各管吸光度。通過堿水解法測定羥脯氨酸含量，嚴格按試劑說明書操作。羥脯氨酸含量=［(測定管吸光度－空白管吸光度)/(標準管吸光度－空白管吸光度)］×標準管含量(5 mg/L)×［水解液總體積(10 mL)/組織濕重(mg)］。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠LVMI、HYP含量:模型組LVMI、HYP較假手術(shù)組顯著增加(P≤0.01)。聯(lián)用組LVMI較美托洛爾組降低(P≤0.05)，心肌HYP含量明顯降低(P≤0.01)。聯(lián)用組心肌HYP含量較阿伐他汀組降低(P≤0.05)(表1)。

表1 各組LVMI及心肌HYP含量Table 1 LVMI and contents of cardiac HYP in all groups

表2 各組心肌MMP-2、TIMP-1含量及其比值Table 2 Contents of cardiac MMP-2 and TIMP-1 and their ratios in all groups

2.2 各組大鼠心肌MMP-2、TIMP-1含量及其比值:模型組心肌MMP-2及TIMP-1含量升高(P≤0.05或P≤0.01)。聯(lián)用組在降低MMP-2含量和MMP-2/TIMP-1比值上較美托洛爾組及阿伐他汀組均有顯著性差異(P≤0.05或P≤0.01)(表2)。

3 討論

左室重構(gòu)是高血壓并發(fā)癥之一，在治療高血壓的同時防止和逆轉(zhuǎn)左室重構(gòu)已成為治療心血管疾病的重要目標。MMP-2的激活在心肌重構(gòu)中起重要作用。TIMP-1是MMP-2的天然抑制物，心肌中存在的MMP-2和TIMP-1平衡的破壞可導致心臟重構(gòu)。

本實驗用2K1C建立高血壓大鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組心肌羥脯氨酸含量明顯高于假手術(shù)組，這與文獻［3］報道一致。模型組心肌MMP-2與TIMP-1含量升高。結(jié)果顯示，心肌重構(gòu)不僅與MMP-2和TIMP-1含量變化有關(guān)，還與MMP-2/TIMP-1比值有關(guān)。

實驗結(jié)果表明，聯(lián)用組減輕左室重構(gòu)優(yōu)于模型組和單獨用藥組。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，聯(lián)用組的藥物干預(yù)作用對其降低心肌MMP-2、升高心肌TIMP-1含量及降低MMP-2/TIMP-1比值非常顯著，提示藥物聯(lián)用對減輕左室重構(gòu)的作用與其調(diào)節(jié)MMP-2和TIMP-1的平衡、降低MMP-2/TIMP-1比值有關(guān)。

［1］Harris DM，Chen X，Pesant S，et al．Inhibition of angiotensin IIGq signaling augmentsβ-adrenergic receptor mediated effects in a renal artery stenosis model of high blood pressure［J］．J Mol Cell Cardiol，2009，46:100 －107．

［2］陳紅娟，陳君柱，王興祥，等．阿托伐他汀對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織PPARs表達的影響［J］．中國病理生理雜志，2008，24:1069－1073．

［3］李征，李茹香，武新民，等．MMP-9與 TGF-β1在腎性高血壓大鼠心肌纖維化中的作用及阿托伐他汀的干預(yù)研究［J］．中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2008，6:173－175．